肝癌组织IGF－II、IGF－IIR、HBxAg的表达与细胞DNA倍体和S期的关系

为了探讨胰岛素样生长因子ＩＩ（ＩＧＦ－ＩＩ）在肝癌发生发展中的作用，采用免疫组织化学ＰＡＰ法检测了肝癌组织ＩＧＦ－ＩＩ及其受体（ＩＧＦ－ＩＩＲ）、乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）的表达，并用流式细胞术分析了ＩＧＦ－ＩＩ表达与细胞ＤＮＡ倍体、Ｓ期的关系。结果显示：（１）ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－ＩＩＲ、ＨＢｘＡｇ在血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）标记阳性的癌组织阳性率均为９３％（ｎ＝１５），高于ＨＢＶ标记阴性的癌组织（１／５）（Ｐ＜０．０５）；（２）ＩＧＦ－ＩＩ阳性的癌组织ＤＮＡ异倍体出现率为１００％、Ｓ期比例为２８．８±６．４％，高于ＩＧＦ－ＩＩ阴性的癌组织ＤＮＡ异倍体出现率（６０％）和Ｓ期比例（１２．８±２．４％）（Ｐ＜０．０５）；（３）肝癌组织ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－ＩＩＲ的表达与ＨＢｘＡｇ表达一致。研究结果提示ＩＧＦ－ＩＩ可能在乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）阳性的肝细胞癌发生发展中有某种作用，ＨＢｘＡｇ可能是ＩＧＦ－ＩＩ基因的一种激活因子。     

细胞间黏附分子—1／淋巴细胞功能相关抗原—1在乙型肝炎？…

目的 探讨细胞间黏附分子－１／淋细胞功能相关抗原－１（ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１）在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 用免疫组化检测１１例正常人和７０例ＨＢＶ感染者肝内ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１和ＣＤ８表达状况，并用免疫组化双重染色技术研究ＨＢＶ感染者肝内ＩＣＡＭ－１与ＬＦＡ－１双重表达状况。结果 在炎症坏死区，ＬＦＡ－１阳性淋巴浸润在ＩＣＡＭ－１阳性肝细胞周围，部分与ＩＣＡＭ－１阳性肝细胞紧密接触，Ｌ     

醛固酮对培养的大鼠血管平滑肌细胞蛋白合成和胶原合成的影响

探讨醛固酮（Ａｌｄ）对血管平滑肌细胞蛋白合成、胶原合成及分泌的影响。方法将培养的乳鼠ＶＳＭＣ分成１７组：正常对照组；Ａｌｄ１０－７组；安体舒通（Ｓｐｉ）１０－７ｍｏｌ／Ｌ组；血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）１０－７ｍｏｌ／Ｌ组；碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）１０ｎｇ／Ｌ组；上述浓度的ＡｎｇⅡ和ｂＦＧＦ分别加入不同浓度的Ａｌｄ和Ｓｐｉ（１０－９，１０－８，１０－７ｍｏｌ／Ｌ）组成不同浓度的配伍组。观察３Ｈ－亮氨酸和３Ｈ－脯氨酸参入的影响，以计算对蛋白质和胶原合成的情况。结果Ａｌｄ明显增加ＶＳＭＣ的３Ｈ－脯氨酸参入，并加强ＡｎｇⅡ及ｂＦＧＦ剌激的３Ｈ亮氨酸和或３Ｈ－脯氨酸的参入及胶原分泌。Ｓｐｉ抑制ＶＳＭＣ的３Ｈ－亮氨酸和或３Ｈ－脯氨酸的参入并抑制ＡｎｇⅡ及ｂＦＧＦ的３Ｈ－亮氨酸和３Ｈ－脯氨酸的参入和胶原的分泌。结论Ａｌｄ作为局部因子，通过旁分泌或自分泌参与ＶＳＭＣ的蛋白合成、胶原合成和分泌。     

HGV-RNA阳性与阴性慢性乙型肝炎患者的对比研究

目的 研究慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的意义。方法 ＲＴ＿ＰＣＲ法对１４６例ＣＨＢ患者血清进行了ＨＧＶ－ＲＮＡ检测,并将ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性与阴性患者进行临床与病理学对比。结果 ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性２３例（１５．７５％）。ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性与阴性２肝功能等生化指标水平,肝脏病理损害程度、ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率均无显著性差异。５例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性、１６例ＨＧＶ－ＲＮＡ阴性ＣＨＢ患     

肝癌中IGF-Ⅱ表达与11p染色体脆性位点、癌断点的关系

探讨人肝癌组织胰岛素生工因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）的表达与１１号染色体短臂（１１ｐ）结构改变的关系,用免疫组织化学ＳＰ法和核分析法检测了同一肝癌（ＨＣＣ）患者癌组织ＩＧＦ－Ⅱ和１１ｐ部位的脆性位点,癌断点,２５例ｎ＝３０）ＩＧＦ－Ⅱ阳性ＨＣＣ中,伴脆性位点１１ｐ１３者３例,伴癌断点１１ｐ１５者１例,同时伴有脆性位点１１ｐ１３或１１ｐ１５和癌断点１１ｐ１２－１５者４例,５例ＩＧＦ－Ⅱ阴性ＨＣＣ中仅１例有危     

磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白—1对肝癌细胞体外生长抑制作用

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白－１（ＩＧＦＢＰ－１）对肝癌细胞选择性生长抑制作用和对胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦⅡ）调解机理。方法采用从孕妇羊水中纯化的磷酸化结合蛋白－１（ＰＢＰ－１）和非磷酸化结合蛋白－１（ｎｐＢＰ－１）,自肝细胞癌实体瘤和肝性腹水标本中获取瘤细胞。应用ＭＴＴ试验,地高辛标记的原位杂交和膜上斑点杂交试验,分别定性和定量测定各实验组中肝癌细胞生长和ＩＧＦⅡｍＲＮＡ表达的动态变化。结果实验表明,ＰＢＰ－１组细胞与对照组相比,同一时间细胞生长趋缓,于培养第２天即呈下降趋势（Ｐ＜０．０５）;原位杂交显示各组细胞在整个培养期间,均有ＩＧＦⅡｍＲＮＡ阳性信号。膜上斑点杂交经光密度扫描表明,ｐＢＰ－１组细胞的ＩＧＦⅡｍＲＮＡ表达平均光密度值与对照组和其他各组比较差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）,ＰＰＢＰ－１及其他组则无明显差异。结论ｐＢＰ－１在体外可抑制肝癌细胞的生长;ＩＧＦⅡｍＲＮＡ表达可能与ｍＢＰ—１的调节抑制作用有关。     

庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）与HBV和HCV联合或重叠感染的初步研究

目的 研究庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）与ＨＢＶ和ＨＣＶ联合或重叠感染的情况，方法 采用ＥＬＩＳＡ的方法检测血液制剂和血源乙肝疫苗原料血浆中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ；并用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ。结果 ＨＢｓＡｇ和抗ＨＣＶ均阴性血浆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性率为１８．８％（１５／８０）；ＨＢｓＡｇ阳性而抗ＨＣＶ阴性血浆的ＧＢＶ－     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

慢性肝病患者血清肿瘤坏死因子的水平及其临床意义

应用ＥＬＩＳＡ法检测了７０例慢性肝病患者及４６例健康献血员血清ＴＮＦ含量。结果表明ＣＰＨ（４．７３±３．３８ｎｇ／ｍｌ），ＣＡＨ（１３．７１±１２．６８ｎｇ／ｍｌ），ＨＣ（７．０８±５．３７ｎｇ／ｍｌ）患者ＴＮＦ水平均明显高于对照组（３．０５±１．４９），而以ＣＡＨ为最高；血清ＡＬＴ＞１６０ｕ和ＳＢ＞３４．２μｍｏｌ／Ｌ组患者ＴＮＦ水平明显高于正常组；ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ阳性的乙肝患者ＴＮＦ水平明显高于阴性组。提示血清ＴＮＦ含量变化与肝细胞坏死程度、肝炎活动及病毒复制活跃程度密切相关，可作为衡量慢性肝病病情变化的重要指标。     

双位点核酶抑制细胞内乙型肝炎病毒表达的研究

目的 观察针对ＨＢＶＣ区双位点核酶在细胞内阻断Ｃ区基因表达的作用。方法 采用垩 克隆技术，从ｐＧＥＭ－核酶１２３（含针对ＨＢＶＣ区２０２９－２０３１及２０６３－２０６５双位点核酶）上切下双位点核酶的片段，定向克隆于真核表达载体ｐＢＢＳ２１２中，利用脂质体介导，将重组质粒ｐＢＢＳ２１２－Ｒｚ与Ｐ１，２Ⅱ（含乙型肝炎病毒全序列）花园要入人肝癌细胞（ＨＨＣＣ）中，采用原位杂交观察核酶的表达，ＥＬＩＡＳＡ     

乙型肝炎患者血中转化生长因子β1

目的分析急性乙型肝炎（ＡＨＢ）和慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者血清中有生物活性的ＴＧＦβ１蛋白水平和ＨＢＸ蛋白阳性率．方法ＡＨＢ和ＣＨＢ患者各２４例，用Ｐｒｏｍｅｇａ免疫分析试剂盒检测血清中ＴＧＦβ１浓度，并用自产的抗ＨＢＸ单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢＸ蛋白的存在．结果ＡＨＢ组和ＣＨＢ组的ＴＧＦβ１水平（μｇ／Ｌ）分别为２３６±７７和１９７±８９，均明显高于对照组８０±３４，Ｐ＜００１），但两组之间区别不大．血清中ＨＢＸ阳性率ＡＨＢ组为２５０％，ＣＨＢ组达５００％，ＨＢＸ阳性的慢性肝炎患者１５例中有１０例（８３％）ＴＧＦβ１血清水平高于中位值．结论ＡＨＢ和ＣＨＢ患者血清中ＴＧＦβ１水平明显升高，ＣＨＢ组有半数患者血清呈ＨＢＸ蛋白阳性，而这些ＨＢＸ阳性患者中８３％显示有较高的ＴＧＦβ１血清水平     

快速简便筛检乙型肝炎病毒C基因启动子变异的方法及应用

目的明确中国乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区段变异特点及其可能的临床意义。方法应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法，结合核苷酸序列分析，检测１４３例ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＢＶ慢性感染者中Ｘ基因／ＢＣＰ区的核苷酸（ｎｔ）１７６２碱基由Ａ→Ｔ和１７６４碱基由Ｇ→Ａ变异。结果在１１４份ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中，３７例感染ＢＣＰ变异株，其中３１例为慢性肝炎病例，６例为慢性ＨＢＶ无症状感染者（ＡｓＩ）；其中４１例ＨＢｅＡｇ阳性ＡｓＩ中仅２例检出，１８例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＩ中也有４例检出。ＨＢｅＡｇ阳性的６５例中，１３例有ＢＣＰ区变异，而ＨＢｅＡｇ阴性的４９例中，２４例有ＢＣＰ区变异（Ｐ＜０．０１）。结论错配ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测这一对点突变，具有快速、简便、适用的优点；ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能与肝病变活动有一定关系。     

日本血吸虫病合并HBV和HCV感染血清肝纤维化指标的变化及意义

目的：探讨ＨＢＶ和ＨＣＶ对日本血吸虫病肝纤维化的影响。方法：用放免和酶标法分别测定晚血、慢血和自然人群血清的ＨＢＳＡｇ和抗ＨＣＶ，分成ＨＢＳＡｇ阳性组，抗ＨＣＶ阳性组和双阴性组，用放免法和生化法测定其血清肝纤维化指标即透明质酸（ＨＡ）、层粘蛋白（ＬＮ）、Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）、谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）。结果：晚血的肝纤维化指标显著高于慢血，后者又显著高于自然人群。晚血的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ阳性组的ＨＡ、ＬＮ和ＰＣⅢ均显著高于阴性组，慢血的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ阳性组的ＰＣⅢ显著高于阴阳组，而ＨＡ和ＧＳＴ没有。结论：ＨＢＶ和ＨＣＶ可能有促进日本血吸虫病肝纤维化形成作用     

日本血吸虫病合并HBV和HCV感染血清肝纤维化指标的变化？…

目的：探讨ＨＢＶ和ＨＣＶ对日本血吸虫病肝纤维化的影响。方法；用放免和酶标法分别测定晚血，慢血和自然人群血清的ＨＢＳＡｇ和抗ＨＣＶ，分成ＨＢＳＡｇ阳性组，抗ＨＣＶ阳性线和双阴性组，用放免法和生化法测定其血清肝纤维化即透明质酸（ＨＡ）。层粘蛋白（ＬＮ）Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）。结果：晚血的肝纤维化和指标显著高于慢血，后者又显著高于自然人群，晚血的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ阳性组的ＨＡ     

肝癌组织IGF—II,IGF—IIR,HBxAg的表达与细胞DNA倍体…

为了探讨胰岛素样生长因子ＩＩ（ＩＧＦ－ＩＩ）在肝癌发生发展中的作用，采用免疫组织化学ＰＡＰ法检测了肝癌组织ＩＧＦ－ＩＩ及其受体（ＩＧＦ－ＩＩＲ），乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）的表达，并用注流式细胞术分析了ＩＧＦ－ＩＩ表达与细胞ＤＮＡ倍体，Ｓ期的关系。结果显示：（１）ＩＧＦ－ＩＩ，ＩＧＦ－ＩＩＲ，ＨＢｘＡｇ在血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）标记阳性的癌组织阳性率均为９３％（ｎ＝１５），高于ＨＢＶ标记阴     

我国首例HIV—2感染者的确认

目的 ＨＩＶ－２抗体的确认。方法 用多种血清学检测方法测定一份可疑ＨＩＶ－２抗体，并用ＨＩＶ－２特异性免疫印迹试剂盒确认。结果 从一个科特迪瓦回国人员采集的血液标本经ＧＡＧＴ（）ＧＢＣ，ＨＩＶ－１＋２）和ＥＬＩＳＡ（Ｖｉｒｏｎｏｓｔｉｃａ，ＨＩＶ－１＋２）检测为ＨＩＶ抗体阳性，使用ＨＩＶ－１＋２免疫印迹试验（ＷＢ）证实该血清衾 ＨＩＶ－２特异性抗体，其中Ｌｉａ ＴｅｋⅢＷＢ出现ＨＩＶ－１ｐ２４和Ｈ     

转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强

目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用,是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,血清ＴＧＦβ１水平,以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,提取总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％,对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明,ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．     

细菌内构建复制缺陷型人肝细胞生长因子重组腺病毒及其对胎肝细胞细胞周期的影响

利用ＡｄＥａｓｙ系统的细菌内同源重组机制构建以ＣＭＶ驱动并同时表达绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的人肝细胞生长因子 (ＨＧＦ)复制缺陷型重组腺病毒 (ＡｄＨＧＦ) ,体外感染胎肝细胞 ,初步研究其对肝细胞细胞周期的影响 ,为基因治疗技术和肝细胞移植联合应用于肝纤维化治疗研究提供新的途径。将质粒 ｐＵＣＨＧＦ扩增、酶切获得ＨＧＦｃＤＮＡ片段后插入腺病毒穿梭载体质粒 ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ的ＣＭＶ启动子的下游 ,构建重组穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ ＨＧＦ ,ＰｍｅⅠ酶切线性化后与骨架载体ＡｄＥａｓｙ 1在细菌ＢＪ5 183内同…     

恶性疟原虫疫苗研究X.MSP1中类表皮生长因子1与PfCMR基因？…

目的 克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原，为疟疾疫苗研究奠定基础。方法 将恶性疟原虫ＭＳＰ１中类表皮生长因子１（ＥＧＦ－１）基因与人工化学合成的抗原复合基因ＰｆＣＭＲ串接，插入高效非融合型蛋白表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，转化菌经４２℃热诱导表达，表达产物用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ分析。结果 构建成功重组质粒ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＥＧＦ－１，经热诱导后表达出含外     

恶性疟原虫FCC—1／HN株pcDNA3—EBA175／HRPII重组质粒直？…

为观察恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ｐｃＤＮＡ３－ＥＢＡ１７５／ＨＲＰⅡ重组质粒肌肉途径接种后在宿主体内的表达。ＢＡＬＢ／ｃ小鼠分为３组,１组（实验组）经后腿股四头肌注射重组粒ｐｃＤＮＡ３－ＥＢＡ１７５／ＨＲＰⅡ１００μＧ;２组（实验对照组）注射空白质粒ｐｃＤＮＡ３１００μＧ,３组（正常对照组）注射ＰＢＳ（ｐＨ７．４）１００μｌ。每隔２０ｄ加强注射,于第１次接种后２０ｄ和第２次接种后１０ｄ取小鼠双侧