他莫昔芬诱导体内外雌激素受体阳性乳腺癌细胞凋亡的周期特异性研究

目的研究他莫昔芬(TAM)诱导不同生长状态下雌激素受体阳性(ER( ))乳腺癌细胞凋亡的周期特异性并比较其差异。方法体外培养的ER( )乳腺癌细胞株MCF-7细胞株和原代培养的。ER( )乳腺癌细胞用TAM作用后，在流式细胞仪(FCM)上用亚G1峰(sub—G1)法检测细胞凋亡率，用细胞周期特异性细胞凋亡检测法(API)检测细胞凋亡的周期特异性。结果TAM诱导不同生长状态的ER( )乳腺癌细胞凋亡均为G0／G1期发生的周期特异性细胞凋亡，但TAM在体外诱导的乳腺癌细胞凋亡率高于在体乳腺癌细胞。结论在ER( )乳腺癌细胞中TAM在G0／G1期特异性诱导细胞凋亡，但在不同的生长状态下，TAM诱导细胞凋亡的效率不同。     

甲基硒酸对乳腺癌细胞体外凋亡和细胞周期的影响

目的:观察甲基硒酸(MSA)对乳腺癌细胞系MCF-7凋亡和细胞周期的影响。方法:以不同浓度的MSA作用乳腺癌细胞系MCF-7,在不同时间内,观察不同浓度MSA对乳腺癌细胞凋亡率和细胞周期的影响。流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:①MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡,随着药物浓度及作用时间的增加,乳腺癌细胞凋亡率逐渐增加。②MSA可改变乳腺癌的细胞周期,将乳腺癌细胞周期阻断在G1期,并且减少S期细胞的比例。结论:MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡、调控乳腺癌细胞周期。MSA有望成为预防和治疗乳腺癌的一种新方法。     

Twist及其相关调控基因在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的:观察不同转移潜能人乳腺癌细胞株中Twist及其相关调控基因mRNA表达的差异。方法:培养低侵袭性人乳腺癌细胞株MCF-7和高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用RT-PCR法检测两种细胞株中Twist、脆性组氨酸三联体(FHIT)、皮性钙黏附素(E-cadherin)、细胞凋亡相关基因Mcl-1、Bcl-2和Bax mRNA表达的差异。结果:MCF-7中FHIT、E-cadherin、Bax mRNA的表达显著高于MDA-MB-435S细胞,Twist mRNA在MDA-MB-435S细胞中的表达明显高于MCF-7,Mcl-1、Bcl-2 mRNA在两种细胞株中的表达无明显差异。结论:Twist、FHIT、E-cadherin、Bax mRNA表达差异可能与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关。     

SAHA和TRAIL联合作用对MDA-MB-231细胞增殖影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合作用对三阴乳腺癌细胞系细胞增殖影响。方法以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,实验设对照、SAHA、TRAIL、SAHA+TRAIL组,应用自动细胞分析仪检测MDA-MB-231细胞活力、细胞凋亡率和细胞周期变化,采用实时定量PCR和固相凋亡抗体芯片技术检测MDA-MB-231细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白的表达。结果与对照组(96.6%)比较,SAHA、TRAIL、SAHA+TRAIL组MDA-MB-231细胞活力(分别为82.5%、87.1%、57.6%)明显降低,细胞增殖被明显抑制,SAHA与TRAIL联合应用对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用具有协同效应;与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用使MDA-MB-231活细胞比率降低39%,活细胞总数下降超过40%;实时定量PCR和凋亡抗体芯片筛查结果表明,与对照组比较,SAHA与TRAIL联合应用后MDA-MB-231细胞caspase-3、TRAIL DR5以及p21~(CIP1)表达量明显增加,Bcl-2、Bcl-x、p53表达量明显减少。结论 SAHA与TRAIL联合应用对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231生长具有协同抑制作用,其机制可能与激活TRAIL相关细胞凋亡通路,诱导细胞凋亡有关。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

生长激素联合氟尿嘧啶对结肠癌LOVO细胞影响的实验研究

目的: 探讨生长激素(GH)联合氟尿嘧啶(5-Fu)在体外对结肠癌LOVO细胞的影响. 方法: 将培养的结肠癌LOVO细胞分为对照组、GH组、5-Fu组和GH+5-Fu组,GH组又按剂量分为两个亚组,即GH1终浓度为50 ng/mL和GH2终浓度为100 ng/mL;GH+5-Fu组又按剂量分为两个亚组,即GH1+5-Fu(GH 50 ng/mL+5-Fu 100 μg/mL)和GH2+5-Fu(GH 100 ng/mL+5-Fu 100 μg/mL),加入不同浓度的处理液后24、48和72 h,分别行四基偶氮唑蓝(MTT)比色观察,计算细胞存活率.并于加入不同浓度的处理液24 h后,以流式细胞仪测定细胞周期和凋亡情况.结果: 5-Fu组和GH+5-Fu组与对照组比较,细胞存活率明显下降(P＜0.05).GH+5-Fu组与单用5-Fu组比较,细胞生存率均有所降低,但各时间段无显著性差异(P＞0.05).GH组与对照组比较,S期细胞百分比和增殖指数(PI)均增加(P＜0.05),G_0/G_1细胞百分比有所减少(P＜0.05).GH+5-Fu组的S期细胞百分比和PI均降低(P＜0.05).5-Fu组和GH+5-Fu组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05);GH+5-Fu组与5-Fu组比较,S期细胞百分比、PI和凋亡率均无显著性差异(P＞0.05). 结论: rhGH体外作用于结肠癌LOVO细胞,未刺激细胞生长,GH与化疗联合用是安全的.     

东北菱对鼠肝癌H22细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的研究东北菱对鼠肝癌H22细胞凋亡及周期的影响。方法用东北菱对鼠肝癌如细胞进行体外实验，采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果细胞周期阻滞在G1／G0期，S期细胞明显减少，凋亡率在43．11％，而阳性5-Fu组凋亡率为19．62％。结论东北菱能促进肿瘤细胞凋亡。     

染料木质素对人乳腺癌细胞BCaP-37凋亡的诱导作用

采用荧光显微镜观察了染料木质素诱导体外培养的人体乳腺髓样癌细胞株BCaP 37凋亡的形态学特征 ,并用流式细胞仪检测了染料木质素对乳腺癌细胞株细胞周期、凋亡率和bcl 2基因表达的影响。结果显示经丫啶橙染色后 ,荧光显微镜下可见到乳腺癌细胞出现细胞凋亡的特征性形态学改变 ;染料木质素能阻断细胞由G1 期向S期移行 ,使G0 -G1 期细胞数目明显增多 ,并能诱导细胞发生凋亡 ,呈现剂量 效应关系 ;bcl 2基因表达量与染料木质素浓度呈负相关。故染料木质素可通过抑制bcl 2蛋白表达诱导细胞凋亡     

2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。     

染料木黄酮影响MDA-MB-453细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的:探讨染料木黄酮(genistein,GEN)影响紫杉醇(paclitaxel,PTX)体外化疗HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453敏感性的作用机制。方法:GEN和PTX单独或联合处理MDA-MB–453细胞,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学法检测HER2/neu蛋白、Westernblot检测Akt、p-Akt、CyclinB1、CDK1蛋白表达的变化。结果:GEN和PTX单独作用时MDA-MB-453细胞分别阻滞于G1/S期和G2/M期,HER2/neu、总Akt和CDK1蛋白水平均没有明显变化,但GEN可显著降低p-Akt和CyclinB1蛋白水平,而PTX则明显增加CyclinB1蛋白水平,二者联合处理时GEN拮抗PTX增加CyclinB1蛋白水平和诱导G2/M期阻滞的作用。结论:GEN拮抗PTX增加cyclin B1蛋白水平和G2/M期阻滞的作用,可能是其降低PTX体外化疗MDA-MB-453细胞敏感性的机制之一。     

重组人生长激素联合5-氟尿嘧啶对表达或不表达生长激素受体人肝癌细胞的体外干预

目的研究重组人生长激素（rhGH）在体外对表达或不表达生长激素受体（GHR）的人肝癌细胞系的影响。方法采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系的GHR表达。每种肿瘤细胞系分4组进行处理：未处理组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理组、rhGH处理组及5-Fu＋rhGH联合处理组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术分析不同浓度rhGH及其与5-Fu合用对人肝癌细胞系的生长抑制、凋亡、细胞周期及增殖指数（PJ）等的影响。结果Bel-7402细胞表达GHR；与未处理组相比，各浓度rhGH组的生长率、G2／M期比例和PI显著升高，细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）；与5-Fu处理组相比，各浓度rhGH＋5-Fu组的G2／M期比例和PI显著升高，抑制率和细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）。SMMC7721不表达GHR；不同浓度rhGH对该细胞系的分裂增殖无明显影响（P均〉0．05）；rhGH＋5-Fu联合处理组与5-Fu处理组问的细胞抑制率、凋亡率及Pl差异也无显著性（P均〉0．05）。结论rhGH在体外能促进GHR^＋的肝癌细胞增殖，减弱5-Fu对GHR^＋细胞的抗癌作用，但对GHR^-的肝癌细胞无明显影响，也不能明显干扰5-Fu对GHR^-细胞的抗癌功能。     

miR-21在辐射敏感性不同的3种乳腺癌细胞株中的表达差异及意义

目的:研究miR-21在MDA-MB-435S、MCF-7、MDA-MB-231这3种辐射敏感性不同的乳腺癌细胞株中表达量的差异及其意义。方法:①采用实时定量PCR法分别检测3种乳腺癌细胞株中miR-21的表达量的差异。②时程关系:在3Gy的X射线分别照射3种乳腺癌细胞株后,分别于0、4、8、12、24 h,进行实时荧光定量PCR检测其miR-21的表达量。结果:①miR-21在MDA-MB-435S细胞株的表达量最低,在MCF-7型细胞株中的表达量处于中间水平,在MDA-MB-231型细胞株中的表达量最高。②时程关系:miR-21在MDA-MB-231型细胞株受照后表达量逐渐升高,在12 h达到峰值,24 h后基本恢复至照前水平;miR-21在MCF-7型细胞株受照后,表达量也逐步升高,8 h达到峰值,24 h后基本恢复至照前水平;mir-21在MDA-MB-435S型细胞株受照后,表达量一路下降,8 h达到最低值,24 h后,其表达量仍明显低于照前水平。结论:miR-21的表达量与乳腺癌细胞的辐射敏感性成反比。     

人卵巢癌COCl／5-Fu耐药细胞株多药耐药与凋亡关系的研究

目的探讨耐药株人卵巢癌细胞COC1／5-Fu的耐药机制及耐药与细胞凋亡的关系。方法检测COC1／5-Fu细胞株对不同抗肿瘤药物的敏感性,流式细胞仪分析COC1／5-Fu细胞在5-Fu作用的凋亡情况以及对5-Fu的耐受分析,RT—PCR分析COC1／5-Fu细胞株中凋亡相关基因p53、bcl-2、bcl—xl、bax等基因的表达情况。结果COC1／5-Fu细胞与COCl细胞相比除对5-Fu耐药外,对其它几种常用化疗药均有不同程度的耐药性;COCl细胞未经5-Fu处理的对照组、30ixmol／L5-Fu组及150umol／L5-Fu组的凋亡指数与对照组相比,凋亡分别增加了1．2倍和2。1倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而经同样浓度5-Fu处理的COC1／5-Fu细胞与其对照组相比,细胞凋亡变化不明显（P〉0．05）;经30umol／L和150umol／L5-Fu处理后,COC1细胞与其对照组相比,呈现明显的GO／G1期增加,S期、G2／M减少,而COC1／5-Fu细胞与其对照组相比细胞周期未见改变;PCR分析发现与COC1细胞相比,COC1／5．Fu细胞耐药株bcl-xl、bcl-xs和bax的表达增高,而p53和cpp32的表达减少,特别是p53基因表达明显减少（P〈0．05）。结论wtp53基因的突变与卵巢癌细胞的细胞周期的改变、耐药性的产生相关,是卵巢癌细胞COC1／5-Fu产生多药耐药性的机制之-。     

Soy Isoflavone Genistein-Mediated Downregulation of miR-155 Contributes to the Anticancer Effects of Genistein

We previously reported that dietary genistein inhibits mammary tumor growth and metastasis of the highly metastatic MDA-MB-435 cancer cells in immunocompromised mice. The purpose herein was to characterize the role of the novel oncogenic microRNA (miRNA) miR-155 in the anticancer effects of genistein in metastatic breast cancer. The effect of genistein was determined on breast cancer cell viability, apoptosis, and expression of miR-155 and its targets. At low physiologically relevant concentrations, genistein inhibits cell viability and induces apoptosis in metastatic MDA-MB-435 and Hs578t breast cancer cells, without affecting the viability of nonmetastatic MCF-7 breast cancer cells. In parallel with reduced cell viability, miR-155 is downregulated, whereas proapoptotic and anticell proliferative miR-155 targets FOXO3, PTEN, casein kinase, and p27 are upregulated in MDA-MB-435 and Hs578t cells in response to genistein treatment. However, miR-155 levels remain unchanged in response to genistein in the MCF-7 cells. Ectopic expression of miR-155 in MDA-MB-435 and Hs578t cells decreases the effects of genistein on cell viability and abrogates the effects of genistein on apoptosis and expression of proapoptotic genes. Therefore, genistein-mediated downregulation of miR-155 contributes to the anticancer effects of genistein in metastatic breast cancer.     

Thymoquinone Alterations of the Apoptotic Gene Expressions and Cell Cycle Arrest in Genetically Distinct Triple-Negative Breast Cancer Cells

Breast cancer (BC) is the most common cancer in women worldwide, and it is one of the leading causes of cancer death in women. triple-negative breast Cancer (TNBC), a subtype of BC, is typically associated with the highest pathogenic grade and incidence in premenopausal and young African American (AA) women. Chemotherapy, the most common treatment for TNBC today, can lead to acquired resistance and ineffective treatment. Therefore, novel therapeutic approaches are needed to combat medication resistance and ineffectiveness in TNBC patients. Thymoquinone (TQ) is shown to have a cytotoxic effect on human cancer cells in vitro. However, TQ’s mode of action and precise mechanism in TNBC disease in vitro have not been adequately investigated. Therefore, TQ’s effects on the genetically different MDA-MB-468 and MDA-MB-231 human breast cancer cell lines were assessed. The data obtained show that TQ displayed cytotoxic effects on MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells in a time- and concentration-dependent manner after 24 h, with IC₅₀ values of 25.37 µM and 27.39 µM, respectively. Moreover, MDA-MB-231 and MDA-MB-468 cells in a scratched wound-healing assay displayed poor wound closure, inhibiting invasion and migration via cell cycle blocking after 24 h. TQ arrested the cell cycle phase in MDA-MB-231 and MDA-MB-468 cells. The three cell cycle stages in MDA-MB-468 cells were significantly affected at 15 and 20 µM for G0/G1 and S phases, as well as all TQ concentrations for G2/M phases. In MDA-MB-468 cells, there was a significant decrease in G0/G1 phases with a substantial increase in the S phase and G2/M phases. In contrast, MDA-MB-231 showed a significant effect only during the two cell cycle stages (S and G2/M), at concentrations of 15 and 20 µM for S phases and all TQ values for G2/M phases. The TQ effect on the apoptotic gene profiles indicated that TQ upregulated 15 apoptotic genes in MDA-MB-231 TNBC cells, including caspases, GADD45A, TP53, DFFA, DIABLO, BNIP3, TRAF2/3, and TNFRSF10A. In MDA-MB-468 cells, 16 apoptotic genes were upregulated, including TNFRSF10A, TNF, TNFRSF11B, FADD TNFRSF10B, CASP2, and TRAF2, all of which are important for the apoptotic pathway andsuppress the expression of one anti-apoptotic gene, BIRC5, in MDA-MB-231 cells. Compared to MDA-MB-231 cells, elevated levels of TNF and their receptor proteins may contribute to their increased sensitivity to TQ-induced apoptosis. It was concluded from this study that TQ targets the MDA-MB-231 and MDA-MB-468 cells differently. Additionally, due to the aggressive nature of TNBC and the lack of specific therapies in chemoresistant TNBC, our findings related to the identified apoptotic gene profile may point to TQ as a potential agent for TNBC therapy.     

内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响。方法:通过瞬时转染内皮抑素质粒到卵巢癌细胞A2780后,采用MTT法和流式细胞术检测内皮抑素以及内皮抑素和顺铂联合应用对细胞增殖和凋亡的影响。结果:MTT法检测发现转染内皮抑素质粒后,A2780细胞的增殖明显减慢,顺铂对其生长抑制作用明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现与空白组相比,转染内皮抑素质粒后A2780细胞的G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,细胞的凋亡率由(1.59±0.86)%增加到(8.66±1.27)%;内皮抑素质粒联合顺铂治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论:内皮抑素联合顺铂可通过抑制A2780细胞的生长和增加其凋亡而产生协同抗瘤作用。     

人生长激素对结肠癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的：了解人生长激素（ｈＧＨ）对于结肠癌细胞有无促增殖和分化作用。方法：取对数生长期的人结肠癌细胞株ＬＯＶＯ,以顺铂和（或）不同浓度的ｈＧＨ体外培养,２４ｈ后以流式细胞增殖周期及细胞凋亡等指标。结果：同时加顺铂和ｈＧＨ培养细胞,癌细胞群在Ｇ２－Ｍ期发生阻滞,细胞凋亡率增加,Ｓ期细胞数率非常显著地降低;加ｈＧＨ１００ｎｇ／ｍｌ组Ｇ０－Ｇ１期九率降低,Ｓ期百分率增高。结论：ＬＯＶＯ细胞表面可能有ｈＧＨ     

人生长激素对人结肠癌细胞LS-174-T增殖周期的影响

目的：研究人生长激素（hGH)对体外培养的结肠癌细胞株增殖周期和DNA倍体的影响和意义。方法：取指数生长期的结肠癌细胞株LS-174-T（简称174）,以顺铂和（或）不同浓度的hGH体外培养,24h后以流式细胞仪测定细胞增殖周期等指标。结果：hGH能诱导174细胞S期数率显著上升（P＜0.01),G2/M期参数下调（P＜0.01),DNA指数未见增高。加用顺铂后细胞大量凋亡,细胞存活率显著下降（P＜0.01),各组S期百分数或显著下降,或与对照组无差异。结论：hGH体外作用于174细胞,能促使细胞进入对化疗药敏感的DNA合成期,没有上调DNA倍体数;顺铂能诱导大量凋亡,并且抑制hGH促进细胞增殖的作用。