阻断促红细胞生成素抑制小鼠视网膜新生血管生成

目的：建立C57 BL/6小鼠氧致血管增生性视网膜病变模型( oxygen induced retinopathy, OIR),探讨阻断促红细胞生成素( Erythropoietin, EPO )对视网膜新生血管的抑制作用。
　　方法：取鼠龄7 d ( P7)的健康C57 BL/6小鼠置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5d,鼠龄12d (P12)时返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型;新生小鼠于P12~P16隔日给予玻璃体腔内注射0.5μL含有25ng(A组),50ng(B组),250ng(C组)可溶性EPO受体的PBS液以及不含EPO受体的PBS液( D组)。于P17时分批处死各组小鼠,小鼠眼球以4%多聚甲醛固定,制成病理切片,进行视网膜组织形态病理学观察计数突破内界膜新生血管细胞核数,了解视网膜新生血管增生程度。
　　结果：计数病理切片突破内界膜新生血管细胞核数目,各组玻璃体内EPO受体注射组较PBS注射组新生血管细胞核数明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。并且各不同浓度EPO受体组间新生血管细胞核计数差异亦有统计学意义(P<0.01),随着EPO受体浓度增高,突破内界膜新生血管内皮细胞数减少。
　　结论：可溶性EPO受体玻璃体腔内注射能够阻断EPO的促新生血管生成作用,有望成为治疗眼部新生血管性疾病的新方法。     

小鼠氧诱导视网膜新生血管形成中促红细胞生成素的变化

目的:观察C57BL/6小鼠氧诱导视网膜新生血管病变模型(oxygen-induced retinopathy,OIR)眼内促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)含量的变化。方法:新生C57BL/6小鼠20只,随机分为实验组(n=10)和对照组(n=10)。实验组小鼠于出生后7d(P7)与母鼠共置于密闭的氧箱,含氧75±5mL/L,共培养5d(P5)后回到正常氧环境,含氧20±1mL/L,建立OIR模型。对照组小鼠不进入氧箱,与母鼠一同饲养于正常氧环境。于P17处死各组小鼠,摘取右眼眼球制作组织切片,HE染色后行病理组织学检查,计数突破内界膜视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)内皮细胞核数。采用放射免疫法测定实验组和对照组小鼠左眼视网膜组织EPO含量。结果:实验组小鼠视网膜突破内界膜RNV内皮细胞核计数为80.0±6.2个,而对照组仅为1.0±0.9个,两者差异有统计学意义(P<0.01)。实验组视网膜EPO含量为80.8±20.7U/L,对照组为14.4±6.8U/L,两者差异有统计学意义(P<0.01),且视网膜组织EPO表达与RNV增生程度呈明显正相关(r=0.58,P<0.01)。结论:小鼠视网膜新生血管形成与眼球局部EPO上调有关。     

促红细胞生成素在视网膜新生血管形成中的作用

促红细胞生成素（EPO）不仅为造血细胞因子，还具有血管生成素的活性，EPO／EPOR系统在体内组织中广泛表达，并参与体内众多生理和病理性血管生成过程。EPO在视网膜新生血管形成中起重要的作用，有望成为预防和治疗缺血性视网膜病变中新生血管化的全新的干预靶点，就EPO在视网膜新生血管形成中的作用进行综述。     

促红细胞生成素在眼部新生血管疾病发病中的作用

眼部新生血管是一组难治性致盲性眼病的共同临床表现.多种促新生血管因子是其发病的主要机制.促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)不仅具有调节红细胞生成的作用,也是一种促新生血管因子,在生理和病理性血管形成过程中起重要作用.EPO在角膜新生血管、视网膜新生血管等形成过程中表达增加,在氧诱导的视网膜新生血管动物模型中,阻断EPO信号可以抑制新生血管形成.这些研究提示EPO在眼部新生血管疾病中起重要作用,有望成为治疗眼部新生血管的新靶点.     

促红细胞生成素/促红细胞生成素受体系统与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是世界性致盲眼病之一,其发病机制尚不完全清楚。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是新发现的独立的潜在的糖尿病视网膜病变的血管源性因子。而EPO在DR发病中所起的作用,在不同研究中有不同的表现。本文就EPO/EPOR系统在DR中的表达与DR病变发病的关系研究以及EPO治疗DR的相关研究进展进行综述。     

促红细胞生成素及其受体与视神经视网膜疾病

促红细胞生成素（EPO）具有促进红系祖细胞增生和分化的作用,其在光诱导性视网膜变性、视网膜缺血一再灌注损伤、急慢性高眼压、视神经损伤、多发性硬化性视神经炎、糖尿病视网膜病变（DR）、早产儿视网膜病变（ROP）等视神经视网膜疾病模型中的神经保护作用也受到了关注。就EPO及其受体在视网膜的分布、其在视神经视网膜病变模型中的表达情况及其对视网膜神经元的保护作用和机制方面的研究进展进行综述。     

促红细胞生成素在氧诱导小鼠视网膜组织中的表达及意义

目的 观察促红细胞生成素(EPO)在氧诱导视网膜病变鼠模型中的动态表达变化,初步研究EPO在早产儿视网膜病变(ROP)中的意义.方法 将14只7d龄C57BL/6J幼鼠暴露于高氧环境5d后转置于正常氧环境5d,作为高氧组;另14只同日龄幼鼠为正常对照组.进行视网膜铺片和二磷酸腺苷(ADP)酶染色、组织病理学及免疫组织化学检测,分别观察视网膜血管的改变、视网膜新生血管细胞核数量及EPO蛋白的表达变化.结果 相对低氧时,高氧组可见大量新生血管形成;EPO蛋白表达与视网膜新生血管的组织病理学改变相平行.结论 EPO在不同时间点的动态表达变化与ROP的两期病理改变相一致,可能参与了ROP视网膜新生血管的形成过程.     

视网膜脱离模型中外源性促红细胞生成素对其受体表达的影响

目的探讨外源性促红细胞生成素（EPO）对促红细胞生成素受体（EPOR）在脱离的视网膜中表达的影响。方法通过视网膜下腔注射质量分数1.4%透明质酸钠在60只SD大鼠的右眼建立视网膜脱离（RD）模型,12只正常SD大鼠为正常对照组。不同组RD模型眼（每组12只眼）玻璃体腔内分别注射PBS或100、200、400ng重组大鼠源性EPO。玻璃体注射后3d应用Westernblot法半定量检测各组SD大鼠脱离的视网膜中EPOR蛋白表达水平的变化并进行比较,应用免疫组织化学法定位检测脱离的视网膜中EPOR蛋白的表达。结果 Westernblot检测结果表明大鼠正常视网膜中EPOR表达量少,为0.28±0.02;造模后3d,EPOR在脱离的视网膜中表达量明显增加,为0.41±0.05,差异有统计学意义（P〈0.05）。RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组EPOR蛋白的表达量分别为0.39±0.03、0.41±0.03、0.43±0.07、0.44±0.05,明显高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组间EPOR蛋白的表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。RD组与RD＋不同剂量EPO组比较EPOR表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。免疫组织化学检测结果证实EPOR蛋白表达于视网膜各层,RD＋不同剂量的EPO处理组EPOR表达均强于正常对照组。结论 RD发生后补充外源性EPO对EPOR的表达并无影响。     

促红细胞生成素与促红细胞生成素受体在大鼠脱离视网膜中的表达

目的 观察促红细胞生成素（EPO）和促红细胞生成素受体（EPOR）在大鼠脱离视网膜中的表达情况。方法48只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、视网膜脱离（RD）后1、3、6、12、24、48、72 h组,每组6只大鼠12只眼。视网膜下腔单次注射1.4%透明质酸钠致上半侧视网膜隆起建立RD模型,采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）测定不同时间点EPO和EPOR的mRNA和蛋白水平的表达情况,同时采用免疫组织化学方法观察EPO和EPOR在视网膜中定位表达的情况。结果 EPO和EPOR的mRNA表达水 平在RD后均上调,均于RD后48 h达到高峰,分别于RD后6、12 h显著高于正常对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;同样,EPO和EPOR的蛋白表达水平也在RD后均增高并在RD后48 h达到高峰,均于RD后3 h显著高于正常对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示正常视网膜自神经节细胞层至光感受器细胞的内外节均有EPO弱表达,RD后48 h视网膜相应部位呈强阳性表达;正常视网膜自神经节细胞层至光感受器细胞的内节均有EPOR表达,RD后48 h视网膜相应部位呈强阳性着染。结论 RD后大鼠视网膜EPO和EPOR表达均逐渐增强,48 h达到高峰;大鼠神经视网膜大部分层次能表达EPO和EPOR。     

促红细胞生成素小干扰RNA对兔角膜新生血管的抑制作用

目的：评估促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)在兔角膜新生血管发病机制中的作用,并观察促红细胞生成素小干扰RNA(siRNA)对角膜新生血管的抑制作用。

方法：健康新西兰白兔22只,随机分为实验组及正常对照组,实验组兔双眼行碱烧伤法建立角膜新生血管模型,造模后每日裂隙灯检查角膜形态学改变并计算新生血管面积,同时自造模当日起右眼每日结膜下注射siRNA 1U组成siRNA治疗组,左眼以control siRNA为实验对照组,分别于术后3、7、14、21d取角膜组织行免疫组化染色,观察EPO的表达情况。

结果：实验组最早于碱烧伤后3d可见CNV长入,7～14d生长最为旺盛,免疫组织化学染色见随碱烧伤时间延长,角膜EPO的表达逐渐增加; siRNA治疗后CNV延迟长入,面积较实验对照组明显减小,炎性细胞浸润减轻,且角膜中EPO的表达较前者明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：EPO可能在CNV的发生发展中发挥重要作用,碱烧伤后siRNA的早期干预可能通过影响EPO的表达而抑制CNV的生长。     

Erythropoietin receptor antibody inhibits oxidative stress induced retinal neovascularization in mice

AIM: To observe the effect of erythropoietin receptor antibody(EpoRA) on oxygen-induced retinal neovascu- larization. METHODS: C57BL / 6J mice, newly born 7 days, were exposed in high oxygen for 5 days and then placed in normal air for another 5 days, thus the animal models of retinal neovascularization were made. Experimental animals were allocated into 3 groups: normal, experimental and therapeutic. The normal group was fed in the normal environment. Into the vitreous cavity of mice in the therapeutic group were injected 2μL of EpoRA for 5 successive days. And the experimental group was injected the same amount of normal saline. Mice were sacrificed 17 days after birth and their eyeballs were removed for detection of malonaldehyde(MDA) content in the retina and by HE staining endothelial cells were counted the breaking through internal limiting membrane. RESULTS: In the experimental group, MDA content in the retina was 25.11±3.46μmol/g , which was obviously less than those in the normal group(5.34±1.79μmol/g, P<0.01) and those in the therapeutic group (12.04±1.91μmol/g). Pathological sections showed the nuclear number of the endothelial cells breaking through internal limiting membrane was 0.7±0.2 in normal group, and 46.2±6.5 in high oxygen induced experimental group. In the therapeutic group injected with EpoRA, it was lowered to 24.0±5.0(P＜0.01). CONCLUSION: EpoRA can effectively inhibit oxygen- induced neovascularization in retina of mouse by reducing oxidative damage.     

Inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization in mice

AIM: To study the inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization (RNV). METHODS: Sixty seven-day-old mice were randomly divided into treated group and control group with thirty mice in each group. These mice were exposed to 750 ± 50mL/L oxygen for 5 days and then to room air. The treated group had been injected captopril (2.7mL/kg), while control group had been injected 9g/L sodium chloride (2.7mL/kg) by intravitreal for 5 days. The mice were sacrificed at the 17th day after birth and the eyes were enucleated. Adenosine diphosphate-ase (ADPase) stained retina flat-mounts was performed to assess the retinal vascular profiles, Hematoxylin Eosin (HE) staining method was applied to count the number of new vascular cell nuclei and the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and pigment epithelium derived factor (PEDF) was detected by immunohistochemical method. · RESULTS: Comparing with control group, regular distributions, good branch and reduced density of RNV were observed in the treated group. The number of nucleus of new vessels vascular endothelial cells breaking through the internal limiting membrane was less in the treated group than in the control group ( <0.05). Stain of retinal MMP-2 was weaker in the treated group than in the control group and stain of retinal PEDF was stronger in the treated group than in the control group. CONCLUSION: Intravitreal injection of captopril (2.7mL/kg) may block the RNV in the oxygen-induced mouse model and the method may provide an effective method for preventing RNV.     

低分子量肝素抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的 观察低分子量肝素对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法以高浓度氧诱导C57BL／6J幼鼠建立血管增生性视网膜病变动物模型。治疗组皮下分别注射低分子量肝素3．0U／g（大剂量组）和0．5U／g（小剂量组），每日2次共5d；对照组皮下注射相同体积的平衡盐溶液。用免疫组织化学法对视网膜铺片进行染色，了解视网膜血管改变；用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞的细胞核数目，观察低分子量肝素对视网膜新生血管形成的抑制情况。结果治疗组视网膜血管密度减少，突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少，与对照组相比差异有显著统计学意义；大剂量组突破内界膜内皮细胞细胞核数目减少，与小剂量组相比差异有显著统计学意义。各组间眼内出血情况无显著统计学差异。结论低分子量肝素可以有效抑制视网膜新生血管形成。     

Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制

目的　探讨Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制。方法　选取48只出生后7 d健康清洁级C57BL/6J幼鼠,随机分为氧诱导视网膜病变（oxygen induced retinopathy,OIR）组、OIR+ Arresten组和常氧组,每组16只。OIR+Arresten组及OIR组幼鼠在体积分数为（75±2）％的高氧环境下饲养5 d,然后转移至正常氧气环境中饲养5 d,其中OIR+Arresten组幼鼠于高氧饲养刚结束时,给予双眼玻璃体内注射Arresten蛋白。常氧组幼鼠则在常规氧气环境中连续饲养10 d。在鼠龄17 d时,各组取6只幼鼠经股静脉注射异硫氰酸葡聚糖溶液处死并摘出眼球,视网膜铺片后观察视网膜的血管形态、计算无灌注区面积。同时对小鼠眼球视网膜行石蜡切片和HE染色,计算侵入玻璃体内血管内皮细胞核的数量。同时,通过细胞培养实验,利用MTT法检测Arresten蛋白对人血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果　视网膜铺片结果显示,常氧组、OIR组、OIR+Arresten组视网膜无灌注区相对面积分别为（2.35±1.62）％、（57.28±9.36）％和（20.38±8.69）％,三组间总体比较,差异有统计学意义（F=18.732,P<0.05）,且OIR组无灌注区相对面积显著高于OIR+Arresten组,差异有统计学意义（P<0.05）。常氧组小鼠视网膜的内界膜结构仍保持平滑完整,未发现有新生血管侵入玻璃体内。OIR组和OIR+Arresten组每张切片上血管内皮细胞核的数量分别为 （15.18±4.83）个、（7.33±3.88）个,其中OIR+Arresten组侵入玻璃体内新生血管内皮细胞核的数量显著低于OIR组,差异有统计学意义（P<0.05）。Arresten蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制率随着其浓度的升高而增加,但当Arresten蛋白浓度达到1000 μg·L^-1时,人脐静脉内皮细胞的增殖抑制率达到顶峰,为（58.00±0.65）％。结论　Arresten蛋白能够抑制氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,通过抑制血管内皮细胞增殖来抑制新生血管形成。     

小鼠视网膜新生血管模型的建立及特征

目的:建立可靠稳定的视网膜新生血管动物模型,为今后探究视网膜新生血管疾病的发生机制和治疗方法奠定模型基础。方法:将24只新生C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,每组各12只。将模型组小鼠于生后第7d置于750mL/L氧浓度环境,生后第12d返回正常空气中;正常组小鼠始终置于正常空气环境喂养。至小鼠生后第17d进行心脏荧光素灌注造影视网膜铺片以及眼球连续切片苏木精-伊红(H-E)染色,观测视网膜新生血管生成情况。结果:模型组小鼠心脏荧光素灌注造影结果显示视网膜中央区域呈无灌注缺血,另外视网膜血管有迂曲扩张、荧光渗漏等异常表现。眼球连续切片发现模型组小鼠突出视网膜内界膜的血管内皮细胞核数为48.65±6.24个/片/眼,而正常组小鼠平均为0.38±0.21个/片/眼,两组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:氧诱导的视网膜缺血模型可成功诱导小鼠产生视网膜新生血管,可作为探究视网膜新生血管疾病发生机制和治疗方法的可靠动物模型。     

毛花甙丙抑制氧诱导乳鼠视网膜新生血管的实验研究

目的　探讨毛花甙丙对乳鼠氧诱导视网膜病变模型中视网膜新生血管的抑制作用。方法　将２０只生后第７天的Ｃ５７乳鼠经体积分数７５％ ±１％的氧诱导５ｄ后,分别给予左眼玻璃体内注射０．５０μｇ（１０眼）和０．１０μｇ（１０眼）毛花甙丙注射液,右眼注射相同剂量的磷酸盐缓冲液做对照,在生后第１７天时进行视网膜铺片染色,计算视网膜新生血管面积和视网膜无灌注区面积,双眼间做配对样本ｔ检验。结果　给予０．０５μｇ和０．１０μｇ毛花甙丙玻璃体内注射后视网膜新生血管的面积分别为（１．０９±０．３２）ｍｍ２和（０．９２±０．４０）ｍｍ２,明显低于对照眼的（１．８４±０．５９）ｍｍ２和（２．０３±０．３５）ｍｍ２（均为Ｐ＜０．０５）;０．０５μｇ、０．１０μｇ毛花甙丙注射后视网膜无灌注区面积分别为（１．４０±０．４４）ｍｍ２ 和（１．０７±０．４０）ｍｍ２,明显低于对照眼的（２．００±０．６５）ｍｍ２和（１．８３±０．４６）ｍｍ２（均为Ｐ＜０．０５）。同时０．１０μｇ毛花甙丙治疗效果优于０．０５μｇ。结论　毛花甙丙对氧诱导视网膜病变乳鼠模型中视网膜新生血管的生长具有抑制作用,同时还能促进视网膜无灌注区的修复。     

Captopril抑制鼠视网膜新生血管的形成(英文)

目的:探讨Captopril对鼠视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将60只7d龄小鼠随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),置于体积分数750±50mL/L高氧环境下饲养5d后回到正常空气环境中饲养,出氧箱后治疗组每天1次玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril,对照组注射9g/L的氯化钠注射液2.7mL/kg,连续5d。两组小鼠均于17d处死并摘除眼球,采用ADP酶视网膜铺片、HE染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞核数及检测MMP-2、PEDF蛋白的表达。结果:治疗组与对照组相比视网膜血管分布规则、分支良好、新生血管密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P<0.05);治疗组MMP-2染色较对照组减弱,PEDF染色较对照组增强。结论:玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成, Captopril有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

可溶性VEGF受体1在视网膜新生血管疾病中的研究进展

视网膜新生血管性疾病的共同特征是病理性新生血管形成。目前研究的内源性视网膜新生血管因子最主要的是VEGF。可溶性VEGF受体1(sFlt-1)是VEGFR-1的mRNA胞外区剪接形成的可溶性形式,只编码胞外区,缺乏细胞内酪氨酸激酶区域,所以其仅具有与配体结合的能力,而无信号转导能力,从而阻止新生血管的形成。sFlt-1作为近年来的研究热点,有可能成为治疗该类疾病的新的基因治疗方法。本文就sFlt-1在视网膜新生血管疾病治疗中的作用机制及研究进展做一综述。