rhG-CSF动员的外周血采集物与稳态骨髓中CD4^＋CD8^＋初始及记忆T细胞亚群的比较

本研究探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员的外周血采集物（G—PB）与稳态骨髓（SS—BM）中CD4^＋、CD8^＋初始、记忆T细胞亚群的差异。依据细胞表面CIM5RA和CD62L的表达将CD4^＋、CD8^＋T细胞划分为初始T细胞（naive，CIM5RA^＋CD62L^＋）、中心记忆T细胞（centralmemory，TCM，CIM5RA—CD62L^＋）、效应记忆T细胞（effeetor memory，TEM，CIM5RA^-CD62L^-）、终末分化效应记忆T细胞（terminally difierentiated effeetor memory，TTTp，CIM5RA^＋CD62L^-）。用流式细胞仪测定G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞的比例组成，并计算每微升采集物中各细胞亚群的绝对数量。结果表明：G—PB中CD4^＋、CD8^＋T细胞的比例组成及CD4^＋／CD8^＋比值均高于SS—BM（P〈0．05）；G—PB中CD4^＋初始T细胞的比例显著低于SS—BM（P〈0．001），而CD4^＋TEM比例显著高于SS—BM（P〈0．001）；G—PB中CD8^＋初始和记忆T细胞亚群的比例与SS—BM无显著差异（P〉0．05）；与SS—BM相比，G—PB中CD4^＋CD62L^＋T细胞的比例明显降低（P=0．001），每微升G—PB移植物中的各淋巴细胞亚群均明显高于SS—BM（P〈0.001）。结论：G—PB与SS—BM中CD4^＋、CD8^＋初始和记忆T细胞亚群在相对和绝对数量方面存在明显的差异，这种差异可能影响G—PB和SS—BM移植后急性、慢性移植物抗宿主病发生率及其程度的异同。     

rhG-CSF对健康供者外周血和骨髓免疫特性影响的比较

本研究探讨rhG—CSF对健康供者外周血采集物（G—PB）和骨髓采集物（G—BM）免疫学特性影响的异同。用MTT法和夹心酶联免疫复合物（ELISA）法检测G—PB和G—BM中T淋巴细胞增殖能力和IL-4、IFN-7的分泌，并用流式细胞术测定两种移植物的T细胞亚群、树突状细胞（DC）亚群、单核细胞及共刺激分子CD28的表达。结果表明：G—PB中淋巴细胞，CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞，DC1、DC2以及单核细胞的含量，CD4／CD8的比值高于G—BM（P〈0，001）。G—PB的T淋巴细胞增殖能力高于G—BM（P〈0．05）；每微升G—PB移植物中T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ,IL-4的量均明显高于G—BM，且G—PB中IL-4／IFN-γ比值小于G-BM（P〈0．001），DC2与T淋巴细胞的比值也低于G—BM（P〈0．01）；而G-PB中CD4^＋、CD8^＋细胞上CD28表达的百分比和总体表达均高于G—BM（P〈0．001）。结论：rhG—CSF体内应用诱导G—PB和G—BM产生的T细胞免疫低反应性是有差异的，而两者之间的差异是G—PB和G—BM移植后移植物抗宿主病（GVHD）发生率和程度不同的免疫学基础。     

间充质干细胞对活化T淋巴细胞的免疫调节作用

本研究的目的是探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对活化T淋巴细胞的免疫调节作用及其在allo—HSCT相关GVHD防治中的作用。用终浓度为10μg/ml的PHA于不同时间作用T淋巴细胞，以^3H—TdR掺入法检测T细胞增殖功能；以不同数量的MSC分别与活化T淋巴细胞作用，根据MSC数量不同实验分为A组（对照组，不加MSC）、B组（MSC2×10^4）、C组（MSC4×10^4）、D组（MSC8×10^4），用^3H—TdR掺入法检测作用前后T细胞功能，FCM检测细胞免疫表型。结果显示，在终浓度为10μg／ml PHA作用下，T淋巴细胞的增殖能力随培养时间的延长而增强，48小时达高峰。FCM检测MSC细胞表型表明：CD44、CD105、CD29、FIK1表达阳性，不表达CD33、CD34、CD45、HLA—DR。随着MSC数量增加，与共培养前相比，T细胞的SI值逐渐降低（P〈0．05），但C组和D组间比较无差异（P〉0．05）。在低数量MSC作用下，CD3^＋CD4^＋表达低于对照组（P〈0．05），CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋高于对照组（P〈0．05）；C组和D组与对照组相比，CD3^＋CD4^＋表达明显降低（P〈0．01），CD3^＋CD8^＋、CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋明显增高（P〈0．01）。结论：丝裂原PHA可以使T细胞活化；骨髓MSC在体外可以使活化T细胞功能和细胞免疫表型发生改变，下调CD3^＋CD4^＋的表达，上调CD3^＋CD8^＋、CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋的表达。     

恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群和调节性T细胞的检测及临床意义

【目的】研究恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群、调节性T细胞水平的变化及其临床意义。【方法】采用流式细胞仪对40例恶性肿瘤患者及40例正常人外周血淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平进行检测。【结果】病例组与正常对照组比较,CD3^＋T淋巴细胞百分比、CD4^＋T淋巴细胞百分比、CD4^＋／CD8^＋比值及CDl6^＋／56^＋-NK细胞百分比均明显降低（P〈0．05）;CD8^＋T淋巴细胞和CD19^＋B淋巴细胞百分比明显高于正常对照组（P〈0．01）。与对照组相比较,恶性肿瘤患者外周血CD4^＋、CD25^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋曲调节性T细胞均明显升高（P〈0．05）。【结论】恶性肿瘤患者细胞免疫功能明显异常;CD4^＋CD25^＋曲调节性T细胞增多可能是肿瘤患者免疫功能受抑的重要原因之一。淋巴细胞亚群及调节性T细胞水平检测在评价肿瘤患者疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。     

再生障碍性贫血患者的淋巴细胞表型变化

目的研究再生障碍性贫血（AA）患者骨髓（BM）及外周血（PB）淋巴细胞及其活化相关分子的表达及临床意义。方法采用双色免疫荧光标记、流式细胞仪分析AA患者的BM和PB中淋巴细胞膜分子表达。结果AA患者BM和BP中CD8＋细胞增加，CD4／CD8比例下降，BM中CD25＋细胞和HLA-DR＋细胞增多，急性AA增加尤为显著（P（0．01），BM中CD16＋或CD56＋细胞也明显增多（P〈0．05）；双标记分析提示T细胞主要为CD8＋细胞；急性AA患者CD8＋-CD25＋细胞显著增多（P〈0．01），AA患者BM中淋巴细胞活化相关分子表达增多，尤其是4—1BB＋、CD95L＋和CD40L＋细胞显著增多（P〈0．01）。结论AA患者BM中淋巴细胞活化相关膜分子增多，是AA免疫功能异常及最终导致造血功能衰竭的原因之一。     

人重组粒细胞集落刺激因子动员后采集骨髓对健康供者外周血采集物成份的影响

本研究探讨健康供者体内应用人重组粒细胞集落刺激因子（G—CSF）后采集骨髓对外周血采集物成份的影响。62例健康供者皮下注射rhG—CSF5μg/（kg·d），连用5天，其中31例供者在第4、5天分别采集骨髓和外周血采集物（A组）；另31例供者于第4、5天均单采集外周血单个核细胞（B组）。应用流式细胞术检测两组供者外周血采集物中的淋巴细胞、CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的数量。结果显示，A组供者每微升外周血采集物中单个核细胞中CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的中位含量分别1．56×10^5μ1、8．56×10^4μl、6．12×10^4μl、3．38×10^4μl、2．27×10^4μl、3．83×10^4μl、744μl及3588μl，与B组的1．40×10^5μl、7．34×10^4μ1、5．32×10^4l、3．06×10^4μl、1．83×10^4μl、3．21×10^4μl、554μl及3120μl的差异无统计学意义（p〉0．05）；A组外周血采集物中CD4^＋细胞与CD8^＋细胞的比值[1．52（0．54—2．87）]、单核细胞与CD3^＋细胞的比值[0．57（0．15—1．64）]以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞与CD3^＋细胞[0．064（0．018—0．673）]的比值与B组[1．68（0．31—3．35）]、[0．59（0．18—1．25）]、[0．063（0．021—0．136）]的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：健康供者体内应用rhG—CSF后采集骨髓对外周血采集物成份无影响，对rhG—CSF动员的同一健康供者可单独采集骨髓、外周血采集物或同时采集两种采集物以满足临床移植的需要。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群变化与其血清HBVDNA的水平分析

目的：观察慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者细胞免疫功能的变化,探讨病毒复制程度与细胞免疫功能的关系。方法：应用流式细胞仪直接免疫荧光法检测136例乙肝病毒感染者、60例正常对照者外周血T淋巴细胞亚群百分率,用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测乙型肝炎感染者血清HBVDNA。结果：84例慢性HBV携带者（ASC）、52例慢性乙型肝炎（cHB）患者与健康对照组相比,CD3＋T淋巴细胞百分比、CD4＋T淋巴细胞百分比和CD4＋／CD8＋T淋巴细胞比值均显著降低（P〈O．001）,CD8＋T淋巴细胞百分比均显著升高（P〈0．001）。慢性乙型肝炎患者与慢性HBV携带者相比,CD3＋T淋巴细胞百分比差异无统计学意义（P〉0．05）、CD4＋T淋巴细胞百分比明显降低（P〈0．05）、CD8＋T淋巴细胞百分比明显升高（P=0．01）、CD4＋／CD8＋T淋巴细胞比值明显降低（P〈o．05）。随着病情发展,从健康对照组、慢性HBV携带者到慢性乙型肝炎,CD4＋T淋巴细胞百分比、CD4＋／cD8＋。比值呈逐渐下降趋势,CD8＋T细胞百分比呈逐渐升高的趋势。慢性HBV携带者HBVDNA阳性组与HBVDNA阴性组相比,CD3＋T淋巴细胞差异均无统计学意义（P〉0．05）,CD4＋T淋巴细胞百分比明显下降（P〈0．001）,CD4＋／cD8＋T淋巴细胞比值明显下降（P〈0．001）,CD8＋T淋巴细胞百分比明显升高（P〈0．01）。结论：HBV感染可导致感染者细胞免疫功能的改变,HBADNA复制增加进一步加重乙肝病毒感染者T细胞亚群的紊乱,CD4＋／CD8＋T淋巴细胞比值的动态变化可及时提示临床HBV感染者细胞免疫功能的变化并加强临床的监测。     

雷公藤多甙对急性移植物抗宿主病小鼠的作用

本研究应用雷公藤多甙防治小鼠急性移植物抗宿主病。对受致死量照射的C57BL／6受鼠，注入供鼠BABC／c骨髓与脾淋巴细胞的混合液，并给予雷公藤多甙、环孢素A、甲氨蝶呤处理。用免疫组织化学法、流式细胞术和ELISA法检测各组小鼠T淋巴细胞、黏附分子、细胞因子。结果表明：所有异基因对照组小鼠，在30天内死于aGVHD，而雷公藤多甙组（19／21）、环孢素A＋甲氨蝶呤组（13／21）和雷公藤多甙＋环孢素A组（17／21）的大部分小鼠存活时间超过了30天，并没有明显的aGVHD症状表现。雷公藤多甙、环孢素A、甲氨蝶呤可明显降低皮肤、肺组织CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD11a^＋、CD18^＋细胞（P〈0．05）和脾组织CD3^＋,CD4^＋，CD8^＋，CD4^＋CD11a^＋，CD4^＋CD18^＋。CD8^＋CD11a^＋，CD8^＋CD18^＋细胞（P〈0．05）。而小肠组织CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞变化不明显（P〉0．05）。同时，雷公藤多甙可降低受鼠血清中IL-2、TNFα浓度和脾组织IL-2、TNFα的mRNA的表达（P〈0．05）；上调血清中IL-10的水平（P〈0．05）。但对IL-4的作用不显著（P〉0．05）。结论：雷公藤多甙具有明显抗aGVHD作用并同时保留抗白血病效应，其作用机制与调节促炎／抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达，以及抑制T淋巴细胞作用有关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群检测的意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的特点及意义。方法 以35倒健康人作为对照组,用流式细胞术分析了35例确诊的PBC患者外周血T淋巴细胞亚群及其分泌IL-4和IFN-γ情况。结果 PBC患者组CD^4＋T细胞升高,CD8^＋T细胞下降,CD4^＋T／CD8^＋T比值上升（P〈0．05）;PBC患者CD4^＋T细胞IFN-1表达显著升高（P〈0．05）,而IL-4水平与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 在PBC发病机制中,CD4^＋T细胞和TH1亚群细胞超重要作用。     

初发过敏性紫癜患儿免疫功能变化及其临床意义

目的探讨初发过敏性紫癜（HSP）患儿细胞免疫、体液免疫功能变化及其临床意义。方法采用流式细胞术检测156例HSP患儿外周血T淋巴细胞CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8^＋,B淋巴细胞CD3^-CD19^＋及NK细胞CD3^＋CD16^＋CD56^＋的表达水平,采用散射免疫比浊法检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,以及补体C3、C4的水平,采用免疫化学发光法检测IgE水平,并与25例健康儿童进行比较。结果HSP患儿CD3^＋、CD3^＋CD4^＋百分比及CD4^＋／CD8^＋比值均显著下降,CD3^-CD19^＋百分比显著上升,与健康儿童相比差异均有统计学意义（P〈0．01）,CD3^＋CD4^＋CD8^＋百分比上升（P〈0．05）,CD16^＋CD56^＋百分比下降（P〈0．05）。HSP患儿的IgA、IgE、IgG、C3水平升高,与健康儿童比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HSP患儿存在细胞免疫及体液免疫水平失调造成的免疫功能紊乱,淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体的检测对于从细胞免疫及体液免疫角度了解患儿的免疫功能,探讨疾病的发病机制、辅助诊断及预后有重要意义。     

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨影外周血混合采集物中CD34^＋细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF5μg／（kg·d）,连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34^＋细胞数量。结果表明：rhG—CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为（1．15±0．60）×10^9／L;骨髓和外周血采集物中的CD34^＋细胞总量分别是（5．854±2．93）×10^7和（1．33±0．77）×10^8;骨髓和外周血混合采集物的CD34^＋细胞总量是（1．92±0．86）×10^8。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数（×10^9／L）与骨髓采集物中CD34^＋细胞的总量（相关系数：r=0．265,P=0．027）、外周血采集物中CD34^＋细胞总量（r=0．340,P=0．004）以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量（r=0．398,P：0．001）均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量均呈正相关关系（P值分别为0．027、0．004和0．001）。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34^＋细胞总量预测的敏感性是71％,特异性是70％（P=0．007）。结论：rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34^＋细胞总量即采集效果。     

rhG-CSF对供者骨髓和外周血采集物中Th17细胞的影响

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）供者体内应用对骨髓采集物（GBM）和外周血采集物（GPB）中Th17细胞的影响。对25名亲缘供者皮下注射rhG-CSF5μg/（kg.d）,连用5天,于第4、5天分别采集骨髓和外周血,注射前留取部分供者稳态骨髓（steady state bone mavrow,SSBM）和稳态外周血（steady state peripheral blood,SSPB）。采用流式细胞术测定动员前后供者骨髓和外周血中T细胞分泌IL-17的变化。结果显示：rhG-CSF体内应用后供者骨髓中CD4＋T细胞和CD8＋T细胞分泌Il-17的能力较稳态骨髓明显下降（GBM vs SSBM Th17/CD4＋T,0.74%±0.27%vs1.78%±1.19%,p〈0.05;Tc17/CD8＋T,0.19%±0.16% vs 0.36%±0.37%,p〈0.05）,外周血中的变化与骨髓相同（GPBvsSSPBTh17/CD4＋ T,1.82%±0.91%vs3.26%±1.89%,p〈0.01;Tc17/CD8＋T,0.21%±0.17%vs0.44%±0.28%,p〈0.01）。25例供者GBM与GPB相比,GPB中Th17/CD4＋ T和Tc17/CD8＋ T的比值均高于GBM（p〈0.05,p〈0.01）。结论：体内应用rhG-CSF能够抑制供者骨髓及外周血采集物中Th17细胞的产生,它可能是GPB和/或GBM混合移植对GVHD的发生率没有增加的部分原因。     

1型糖尿病小鼠同基因骨髓移植治疗后的免疫变化

摘要本研究旨在观察同基因骨髓移植（syn—BMT）治疗1型糖尿病（T1D）4、鼠前后外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞比例的变化。探讨其在小鼠T1D的发生及同基因骨髓移植在诱导T1D小鼠恢复免疫耐受中的作用。选取C57BL／6J小鼠以链脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型,并将成模小鼠分为病鼠移植组及病鼠对照组;另取正常C57BL／6J小鼠6只作为正常对照组。病鼠移植组小鼠于成模后第10天行同基因骨髓移植治疗;正常对照组和病鼠对照组不作处理。每10天监测1次正常对照组、病鼠对照组、病鼠移植组空腹血糖;每3天监测1次病鼠移植组小鼠移植后血象。小鼠成模后第10天即移植治疗当天及移植后30天分别取正常对照组、病鼠对照组及病鼠移植组小鼠外周血标本,用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞比例。结果显示,syn—BMT后,小鼠空腹血糖逐渐下降,至移植后25天,与正常对照鼠相比无差异,显著低于对照病鼠;移植后小鼠外周血白细胞和血小板计数分别在接受预处理及骨髓移植后3天和6天达最低值,此后逐渐上升,至移植后27天基本恢复正常。糖尿病小鼠外周血CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例均较正常对照鼠明显升高（P〈0．01）,CD8^＋T淋巴细胞比例较正常对照鼠显著下降（P〈0．01）。syn．BMT后CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例较对照病鼠不同程度的降低,CD8^＋T淋巴细胞比例较对照病鼠及正常对照鼠明显升高（P〈0．01）。结论：同基因骨髓移植可以逆转糖尿病小鼠的高血糖状态。糖尿病小鼠发病初期,外周血CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例增高及CD8^＋T淋巴细胞比例降低,这些变化可能与糖尿病的发生有关。同基因骨髓移植可以不同程度的逆转糖尿病小鼠的免疫紊乱。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者T细胞亚群及其数量与功能的研究

本研究探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者T细胞免疫状态及GPI^＋T细胞、GPI—T细胞的数量与功能。采用流式细胞术检测22例PNH患者及18名正常对照T细胞亚群、Th细胞亚群、GPI^＋T细胞、GPI—T细胞分别在CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞群中的比例及其CD69的表达。结果显示,PNH患者CD4^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（47．7670±13．91139）％]较正常对照组[（54．9592±7．11678）％]降低,CD8^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（52．2767±13．90395）％]较正常对照组[（45．2418±6．75306）％]升高,差异均有显著性（P〈0．05）;CD4^＋／CD8^＋比值倒置,以PNH．AA患者最为明显（0．77763±0．409153）,与正常对照组（1．26356±0．348878）相比,差异有显著性（P〈0．05）。PNH患者Th1细胞比例[（16．9136±6．78899）％]较对照组[（4．4600±1．81879）％]升高,差异有显著性（P〈0．05）,PNH—AA患者Th1细胞比例变化[（22．8000±5．45244）％]较发作性PNH患者[（12．0083±2．20770）％]曼为显著,Th2细胞比例[（4．75824±．98441）％]较正常对照组[（3．7960±1．13810）％]无明显变化。PNH患者体内存在一群GPI—T细胞,其占CD8^＋T细胞的（14．67974-11．96718）％,占CD4^＋T细胞的（3．92414-2．46263）％,其占CD8^＋T细胞的比例较占CD4^＋T细胞的比例升高更为明显。PNH患者CD8^＋GPl^＋T细胞[（17．67881±8．562493）％]、CD8^＋GPI—T细胞[（15．86575±7．279743）％]、CD4^＋GPI^＋T细胞（4．65431±1．984378）％]、CD4^＋GPI—T细胞[（4．93181±1．730001）％]c1969的表达均高于正常对照组[CD8^＋T细胞（4．68038±1．216645）％,CD4^＋T细胞（1．77339±0．645259）％],差异有显著性（P〈0．05）,GPI^＋T细胞CD69的表达与GPI—T细胞相比,差异并无显著性。结论：PNH患者存在T细胞免疫功能亢进,其可能是造成骨髓衰竭的原因,但与T淋巴细胞组分中含有PNH克隆可能无关。     

体外rhG-CSF刺激对健康人外周血CD4^＋T细胞黏附和极化的影响

T淋巴细胞黏附和极化过程的完成需要依赖细胞表面的淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）与其配体细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的结合。本研究旨在探讨体外重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对健康人外周血CD4^＋T细胞的黏附和极化的影响。采集12例健康志愿者的外周血,使用免疫磁珠分选法纯化CD4^＋T细胞,加入rhG-CSF体外培养24 h,检测CD4^＋T细胞接受基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）和ICAM-1信号刺激后细胞的黏附和极化的能力。结果显示,实验组（体外rh G-CSF作用后的健康志愿者）CD4^＋T细胞的黏附比例为（61.9±5.9）%,对照组（健康志愿者）为（68.3±7.3）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;实验组（体外rh G-CSF作用后的健康志愿者）CD4^＋T细胞的极化比例为（24.3±4.3）%,对照组（健康志愿者）为（47.1±5.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：体外rh G-CSF能抑制健康者外周血CD4^＋T细胞黏附和极化的能力。     

重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1／细胞间黏附分子1信号途径诱导CD4^＋T淋巴细胞活化及增殖的影响

目的：观察在异基因外周血造血干，祖细胞移植中重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号途径诱导的外周血CD4＋T淋巴细胞的影响，验证重组人粒细胞集落刺激因子动员对淋巴细胞功能相关抗原1/细胞间黏附分子1信号通路的抑制作用。 方法：选择2006—06/2007—06在解放军总医院血液科异基因外周血造血干细胞移植前进行重组人粒细胞集落刺激因子动员的10例健康供者，对治疗方案均知情同意，且得到医院伦理道德委员会批准。给予重组人粒细胞集落刺激因子10μg，（kg·d）进行动员，在动员前1天和动员后第5天取供者外周静脉血，用miniMACS磁珠分选系统分离纯化CD4＋T淋巴细胞，分别用CD3单克隆抗体OKT3＋细胞间黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激活化CD4^＋T淋巴细胞，用双色荧光标记检测动员前后CD4^＋T淋巴细胞激活后活化标记CD69，CD25的表达；用四甲基偶氮唑盐法检测动员前后OKT3＋细胞间粘黏附分子1、佛波酯＋离子霉素刺激CD4^＋T淋巴细胞增殖能力变化。 结果：①纯化后CD4^＋T淋巴细胞纯度均在90％以上。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞活化标记CD69和CD25的表达均明显低于动员前（P〈0．01）。②动员后OKT3＋细胞间黏附分子1组、佛波酯＋离子霉素组CD4^＋T淋巴细胞增殖率均明显低于动员前（P〈0．05）。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子动员可能抑制了淋巴功能相关抗原1/细胞间黏附分子1协同刺激信号，从而使CD4^＋T淋巴细胞活化、增殖能力下降。     

CD7阳性急性髓系白血病骨髓干／祖细胞5个基因表达的研究

本研究探讨abca5、mdr-1、kdr、dapk和irf-1 5个基因在CD7^＋急性髓细胞性白血病干／祖细胞的表达。利用实时定量RT—PCR（RQ—PCR）方法检测了15例正常骨髓（NBM）和16例AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中5个基因的表达。采用流式细胞仪（FCM）分选8例NBM和21例AML患者骨髓CD34^＋CD38^＋祖细胞和CD34^＋CD38-干细胞,利用微量细胞RQ—PCR方法检测分选细胞中5个基因的表达。结果表明：NBMMNC均表达这5个基因,其中irf-1与dapk表达水平最高,相对表达量分别为4．08和3．86;abca5和mdr-1表达水平较低,为0．49和0．84;kdr表达最低为0．02。在经分选的CD34^＋CD38^＋祖细胞中,dapk和irf-1表达明显减低（P〈0．05）,kdr表达明显增加（P〈0．05）,其余2个基因无明显变化。在CD34^＋CD38^＋Lin-干细胞中,5个基因的表达均高于CD34^＋CD38^＋祖细胞,普遍增加至近2倍,而kdr增加了3倍,其中kdr和irf-l表达的增加具有统计学差异（P〈0．05）。与NBM相比,AMLMNC中5个基因的表达水平均有不同程度减低,以abca5、mdr-1、kdr和dapk最为显著（P〈0．05）。与AMLMNC相比,AMLCD34^＋CD38^＋细胞中,irf-1和dapk表达明显减低（P〈0．05）,其余3个基因表达增加,以kdr表达增加有统计学意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋与CD34^＋CD38^-细胞比较,发现5个基因在CD34^＋CD38^＋细胞中的表达均增加,尤以kdr和irf-1的表达增加有意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^-CD7-细胞中5个基因的表达均比CD34^＋CD38^＋细胞中的高,其中只有CD34^＋CD38^- CD7^＋细胞中KDR和CD34^＋CD38^-CD7^-细胞中KDR和irf-1的表达增加并具有统计学差异（P〈0．05）。结论：NBM中kdr主要表达在干／祖细胞中,而dapk和irf-1主要表达在较分化的细胞中。5个基因在干细胞阶段的表达均高于祖细胞阶段。AMLCD34^＋CD38^-CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^＋CD7^-都具有干／祖细胞的基因表达特点。     

骨髓腔内输注人造血干／祖细胞促进NOD-SCID小鼠体内造血功能的恢复

本研究比较经骨髓腔内输注（intra—bone marrow infusion,iBMI）及静脉输注（intravenous infusion,iVI）人脐血（cord blood,CB）造血千／祖细胞（HS／PC）对NOD～SCID受鼠体内造血重建的影响。将纯化的CB CD34^＋细胞移植到受亚致死剂量照射的NOD—SCID受鼠体内。受鼠随机分为3组：①iBMI组：骨髓腔内输注CD34^＋细胞5×10^5／只;②iVl组：尾静脉输注CD34^＋细胞5×10^5／只;③阴性对照组：输注PBS缓冲液。于异种移植后第3、5及第8周通过流式细胞术、聚合酶链式反应、免疫组织化学及造血祖细胞集落分析的方法比较人造血系统各系细胞植入率,通过二次移植实验比较NOD—SCID受鼠体内人HS／PC长期造血重建能力。结果表明：移植后第8周,iB—MI组受鼠骨髓、外周血及脾脏中人CD45^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）;iBMI组及iVI组移植的HS／PC均具有多向分化能力;移植后第8周,iBMI组受鼠骨髓中CD45^＋CD19^＋细胞、CD45^＋CD33^＋细胞、CD45^＋CD56^＋细胞及CD45^＋CD34^＋细胞比例均显著高于iVI组（P〈0．05）,CD45^＋CD14^＋细胞及CD45^＋CD41a^＋细胞比例亦高于iVI组（P〉0．05）。iVI组及iBMI组长期存活受鼠的肝脏、脾脏、肺脏、外周血、骨髓细胞中均可检测到人17号染色体α-卫星特异性片段。应用免疫组织化学法在移植后第8周的iBMI组受鼠的脾脏、肝脏和肺脏中均可检出人CD45抗原的表达.iBMI组受鼠的骨髓细胞各系集落总数于移植后第8周显著高于iVI组（P〈0．05）。二次移植后第6周,iVI组及iBMI组受鼠的各组织脏器中均可检出人17号染色体α-卫星特异性片段的表达。结论：与iVI相比,经iBMI移植人CBCD34^＋细胞至NOD—SCID受鼠可以促进HS／PC的造血重建及多向分化,提高植入率。