新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17在脑缺血损伤中的作用

目的探讨新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17对脑缺血及缺氧缺糖(OGD)诱导皮层混合培养细胞中神经元损伤及小胶质细胞激活的影响。方法①以线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学、Western blotting、RT-PCR以及免疫荧光等方法观察脑内GPR17的时空表达及细胞分布特点。大鼠侧脑室埋管给予GPR17 siRNA靶向沉默脑内GPR17表达,观察其对脑缺血急、慢性期神经元损伤和小胶质细胞激活的影响。②以OGD诱导大鼠皮层混合培养细胞的缺血性损伤,以GPR17 siRNA靶向沉默GPR17的表达,观察其对OGD诱导的原代皮层混合培养细胞中神经元损伤和小胶质细胞激活的影响。结果①缺血中心区,GPR17 mRNA及蛋白水平在再灌注24 h和7,14 d表达上调;缺血周边区,再灌注7,14 d表达上调。在正常大鼠脑组织,GPR17主要表达于神经元、少突胶质细胞。在缺血中心区,再灌注24 h GPR17主要表达于损伤的神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞,再灌注14 d主要表达于增生激活的小胶质细胞,部分表达于少突胶质细胞;而在缺血周边区,再灌注24 h以及14 d,GPR17主要表达于神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞。星形胶质细胞不表达GPR17。大鼠侧脑室给予GPR17 siRNA成功抑制脑内GPR17表达,显著改善再灌注24 h神经症状、减少脑梗死体积以及神经元损伤;同样,也改善再灌注14 d的脑萎缩和周边区的神经元损伤,并显著抑制小胶质细胞的增生激活。②大鼠原代皮层混合培养细胞中,OGD 1 h恢复24 h(OGD/R)诱导细胞活性降低,LDH释放增加,PI染色结果显示细胞坏死增加,以神经元死亡为主。GPR17 siRNA处理后减轻OGD/R诱导的细胞活性下降以及LDH释放,并减轻细胞坏死,以减轻神经元死亡为主;GPR17siRNA处理后能够改善小胶质细胞激活的形态变化。结论大鼠局灶性脑缺血后,脑内GPR17表达上调,介导缺血后急性神经元损伤以及亚急性/慢性期的小胶质细胞激活。GPR17还介导OGD诱导的大鼠皮层混合培养细胞中的神经元损伤和小胶质细胞激活。     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol·L-1鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果鱼藤酮(0.3～30μmol·L-1)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特1和5μmol·L-1可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。鱼藤酮(1～10μmol·L-1)作用PC12细胞24 h及鱼藤酮3μmol·L-1处理3 h和24 h,均可诱导CysLT 1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论 CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。     

半胱氨酰白三烯受体拮抗剂对脑缺血的保护作用

炎症是影响脑缺血急性损伤严重程度以及慢性期恢复的主要因素之一,而半胱氨酰白三烯是体内最重要的炎症介质之一,通过半胱氨酰白三烯受体(CysLT1R和CysLT2R)调节脑缺血后炎症等病变。目前,已证实CysLT1R拮抗剂对脑缺血动物模型急性和亚急性/慢性损伤的保护作用,其神经元保护作用可能是间接通过调节胶质细胞,对星形胶质细胞增殖及胶质疤痕形成则有明确的抑制作用。CysLT2R拮抗剂还有待深入研究,但可能与神经元和星形胶质细胞损伤、小胶质细胞激活等有密切关系。CysLT1R和Cys-LT2R拮抗剂是抗脑缺血损伤潜在的新型治疗药物。     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

曲古抑菌素A对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖 (oxygen-glucose deprivation,OGD) 损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)持续性OGD损伤模型,MTT法检测细胞活性,以评估持续性OGD损伤对SH-SY5Y细胞的损伤程度.继而观察TSA(10、20、40、80 nmol·L-1)对OGD诱导的神经元损伤的影响,实验指标如下:倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT检测TSA对细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死情况,荧光显微镜检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位(mitochondrion membrane potential,MMP)的变化.结果 OGD损伤2 h,模型组的细胞活性和MMP水平较对照组明显降低,并随OGD时间的延长而变化越明显.而ROS含量较对照组明显升高,Hoechst 和PI双染检测也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,并随OGD时间的延长,凋亡和坏死细胞的数量增加.与模型组相比,40 nmol·L-1 TSA能明显提高OGD诱导的神经元的活性,降低细胞内ROS含量,以及提高MMP水平.结论 TSA对OGD诱导SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤具有明显的保护作用,其保护机制可能与降低细胞内ROS水平及维持MMP的高能状态有关.     

丁苯酞抑制原代大鼠海马神经元氧糖剥夺/复氧诱导的凋亡

目的:观察丁苯酞对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(0.1,1,10μmol·L-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各丁苯酞给药物组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度升高而降低;Bcl-2蛋白表达不同程度地增高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高。结论:丁苯酞能抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,其可能通过增加神经元内Bcl-2凋亡抑制蛋白的表达而抑制凋亡,进而保护神经元。     

Cysteinyl leukotriene receptor I mediates LTD4- induced activation of mouse microglial cells in vitro

Aim： To investigate the roles of cysteinyl leukotriene receptors CysLT1R and CysLT2R in leukotriene D4 （LTD4）-induced activation of microglial cells in vitro.
Methods： Mouse microglial cell line BV2 was transfected with pcDNA3.1（＋）-hCysLT1R or pcDNA3.1（＋）-hCysLT2R. The expression of relevant mRNAs and proteins in the cells was detected using RT-PCR and Western blotting, respectively. Phagocytosis was determined with flow cytometry analysis. The release of interleukin-1β （IL-1β） from the cells was measured using an ELISA assay.

Results： The expression of CysLT1R or CysLT2R was considerably increased in the transfected BV2 cells, and the receptors were mainly distributed in the plasma membrane and cytosol. Treatment of the cells expressing CysLT1R or CysLT2R with CysLT receptor agonist LTD4 （0.1–100 nmol/L） concentration-dependently enhanced the phagocytosis, and increased mRNA expression and release of IL-1β. Moreover, the responses of hCysLT1R-BV2 cells to LTD4 were significantly larger than those of hCysLT2R-BV2 or WT-BV2 cells. Pretreatment of hCysLT1R-BV2 cells with the selective CysLT1R antagonist montelukast （1 μmol/L） significantly blocked LTD4-induced phagocytosis as well as the mRNA expression and release of IL-1β, whereas the selective CysLT2R antagonist HAMI 3379 （1 μmol/L） had no such effects.

Conclusion： CysLT1R mediates LTD4-induced activation of BV2 cells, suggesting that CysLT1R antagonists may exert anti-inflammatory activity in brain diseases.     

白藜芦醇对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤的保护

目的 观察白藜芦醇(Res)对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤的保护作用.方法 将新生大鼠脑皮质神经元原代培养至第10天,以低糖结合物理性缺氧诱导缺氧缺糖(OGD)模型,并于造模 2 h后复氧复糖(RP),尼莫地平(Nim 1.0 μmol · L-1)为阳性对照,观察Res对OGD和OGD/RP的噻唑蓝(MTT)液比色吸光度和乳酸脱氢酶(LDH)释放百分率的影响,在光镜和电镜下观察神经元的形态变化.结果 Res的增加对神经元OGD 1、2、4 h和OGD 2 h/RP 3、12、24 hMTT液的吸光度有显著性差异,可减少其LDH的释放,减轻神经元形态的损伤.结论 Res对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤具有保护作用.     

木犀草苷通过调控miR-211表达对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响

目的:探讨木犀草苷(Lut)对缺氧缺糖(OGD)诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响,并探讨其潜在的分子机制.方法:采用大鼠原代皮质神经元细胞建立OGD损伤模型.实验分为对照(Con)组、OGD组、OGD+Lut低浓度组(6.25 mg·L-1)、OGD+Lut 中浓度组(12.5 mg·L-1)、OGD+Lu 高浓度组(...     

青藤碱对大鼠海马神经元缺血损伤的保护作用

目的观察青藤碱(sinomenine,SN)对氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)诱导海马神经元缺血损伤的保护作用并探讨其机制。方法原代培养海马神经元OGD 2h后复灌24 h(OGD-R),MTT法和LDH试剂盒分别检测各组细胞存活率和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量;Hoechst染色检测细胞凋亡;Westren blot检测凋亡相关蛋白表达;荧光钙离子成像系统检测[Ca2+]i,全细胞膜片钳技术记录酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)电流。结果不同浓度SN均能抑制OGD-R诱导的海马神经元存活率降低和LDH释放增多;SN能明显抑制OGD-R诱导的神经元凋亡、Bcl-2/Bax比值的下降、caspase-3表达的增加以及胞内钙浓度升高,SN还能抑制海马神经元ASIC1a电流,也能抑制OGD诱导的ASICs电流增加。结论 SN对OGD诱导海马神经元损伤有保护作用,其机制可能与抑制ASICs通道减轻钙超载相关。     

促肾上腺皮质激素释放激素受体1拮抗剂CP154526对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体1拮抗剂CP154526对海马神经元凋亡的影响。方法原代培养大鼠海马神经元,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,然后分为4组:正常对照组(Con)、CRH刺激组(CRH)、CRH和CP154526共同刺激组(CRH+CP)、CP154526刺激组(CP)。TUNEL、流式细胞术AnnexinⅤ-PI法检测神经元凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达水平。结果 10-8mol·L-1的CRH作用于海马神经元后,细胞存活率下降(P<0.05);50 mmol·L-1的CP154526可明显提升神经元存活率(P<0.05)。与正常对照组相比,CRH刺激后神经元凋亡率增加,Bax/Bcl-2比值增高,caspase-3表达增加;加用CP154526可明显降低神经元凋亡率、Bax/Bcl-2比值及caspase-3表达水平;而单独应用CP154526对凋亡没有明显影响。结论一定浓度的CRH可诱导海马神经元细胞凋亡,其受体1拮抗剂CP154526可有效减轻细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

N-硬脂酰酪氨酸对缺氧缺糖诱导神经元凋亡的影响

目的 探讨N-硬脂酰酪氨酸(NsTyr)对缺氧缺糖(OGD)诱导大鼠皮层神经元损伤的影响及作用机制.方法 采用MTT法及Hoechst 33342染色检测NsTyr对OGD诱导神经元损伤及凋亡的影响:通过免疫印迹法探讨NsTyr抗OGD诱导神经元凋亡的分子机制,并使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的特异性阻断剂SB203580、SP600125和U0126考察其抗凋亡的信号转导通路.结果 NsTyr对OGD造成的皮层神经元损伤有剂量相关的保护作用,促进细胞存活,减少细胞凋亡;NsTyr通过上调Bcl-2表达、下调Bax表达,保持Bcl-2/Bax的平衡,实现抗OGD损伤的作用,该作用通过ERK和p38信号通路介导.结论 NsTyr可通过ERK和p38信号通路调节凋亡基因的表达,抑制OGD引起的神经元凋亡.     

痘苗病毒致炎兔皮提取物治疗缺血性脑卒中的机制

目的缺血性脑卒中(IS)是世界范围内重大的脑血管疾病,具有发病率和致残致死率高的特点,目前尚缺乏治疗或延缓脑缺血损伤的有效方法,发病机制涉及氧化应激、炎症细胞因子损害和自噬等。其中炎症细胞因子损害在缺血性脑损伤病理过程中起重要作用。小胶质细胞是脑内炎性反应的主要执行者,脑缺血后小胶质细胞被激活,形状由分枝状变成阿米巴状,其一方面发挥脑内吞噬细胞的作用,以及释放和分泌一系列免疫应答分子、细胞因子、神经毒性物质等产生细胞毒性效应;另一方面有利于神经元再生和死亡周边区神经元的存活,所以小胶质细胞具有神经毒性和神经保护双向作用。痘苗病毒致炎兔皮提取物(AGC)是从牛痘病毒致炎的日本大耳白兔的兔皮组织中提取的一种生物活性制剂,前期在大鼠大脑中动脉栓赛(MCAO)实验中发现,AGC在有效治疗时间窗内(脑缺血90 min再灌注15 min内)给药,可明显抑制MCAO大鼠脑组织的炎症反应,同时促进应激损伤修复分子的产生而发挥脑组织保护作用。这可能是治疗缺血性脑卒中的药理学机制之一。因此,本实验探讨AGC对缺血再灌注损伤炎症反应的抑制作用及促炎症因子上游信号通路的影响。方法 (1)采用CCK8法检测AGC对小鼠小胶质细胞(BV-2)细胞活力的影响;(2)采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)构建氧糖剥夺模型(OGD)缺氧缺糖1,1.5,2,3,4和6 h,复氧1,2,3和6 h后加入AGC。利用CCK8法检测AGC对OGD/R细胞活力的影响,从而确定OGD/R细胞模型建立的实验条件;(3) ELISA法检测AGC对BV-2细胞OGD/R后促炎因子表达的影响;(4) Western蛋白质印迹法检测AGC对BV-2细胞OGD/R后TLR9及其下游信号通路蛋白表达变化的影响。结果 (1) AGC在0.25～1 k U·L-1范围内对BV-2细胞活力无影响;(2)根据CCK8法检测Na2S2O4引起的氧糖剥夺再恢复(OGD/R)后BV-2细胞的活力的结果,OGD/R细胞模型建立的条件为10 mmol·L-1的Na2S2O4的条件氧糖剥夺1.5 h,复氧3 h;(3) AGC 0.25,0.5和1.0 k U·L-1抑制了BV-2细胞OGD/R后TNF-α和IL-6的表达;(4) AGC 0.25,0.5和1.0 k U·L-1抑制了BV-2细胞OGD/R后TLR9,TRAF6和NF-κB的表达。结论 AGC可通过抑制TLR9/TRAF6/NF-κB信号通路,降低氧糖剥夺再恢复后炎性细胞因子的表达,从而减轻脑缺血后的炎症反应,发挥脑保护作用。     

内质网应激在脑缺血复灌中的作用研究

目的内质网是细胞内重要的细胞器,脑缺血过程中伴随着内质网应激,然而其在脑缺血复灌过程中的作用尚不明确。方法本实验采用小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型和大鼠皮质原代神经元氧糖剥夺(OGD)模型,以tunicamy-cin(TM)和thapsigargin(TG)作为内质网应激的激动剂,4-PBA Salt和Salubrinal作为内质网应激抑制剂。MCAO 1 h血流复灌时侧脑室给予不同剂量的TM(3μg,6μg)和TG(0.02μg,0.06μg),对照组注射相同体积人工脑脊液,24 h后分别以TTC染色方法和18氟-脱氧葡萄糖microPET影像学技术检测小鼠脑梗死体积及代谢功能,记录神经行为学症状并评分。在体外培养8 d的大鼠皮质神经元OGD模型中,对神经元OGD 2 h,于复糖复氧时孵育各浓度TM(0.04～1 ng.L-1),TG(0.08～2 nmol·L-1)和4-PBA Salt(6～150 nmol·L-1),Salubrinal(0.2～5 nmol·L-1),复灌24 h后以TUNEL和MTT方法分别检测细胞凋亡和细胞活力。结果与MCAO手术对照组相比,TG,TM可剂量依赖地减少脑梗死体积,缓解脑缺血引起的葡萄糖代谢降低并改善神经行为学症状。神经元OGD复灌模型中,TM(0.2～1 ng.L-1)和TG(0.08～2 nmol·L-1)均可浓度依赖地减少OGD引起的细胞凋亡,而4-PBA Salt(6～150 nmol·L-1)和Salubrinal(1 nmol·L-1)均可显著提高OGD引起的细胞凋亡数及细胞活力降低。结论在脑缺血复灌过程中,内质网应激可能发挥了重要的神经保护作用。     

甘松新酮对缺糖缺氧损伤原代培养神经元的保护作用

观察甘松新酮对缺糖缺氧损伤原代培养神经元的保护作用。采用孕14天小鼠胚胎皮层制备原代培养神经元;MTT法确定甘松新酮对原代培养神经细胞的安全剂量,并观察其对缺糖缺氧神经元的保护作用;采用Western blotting法观察药物对缺糖缺氧损伤神经元以及正常培养神经元蛋白激酶A(PKA)和细胞外信号调节激酶(ERK)通路关键蛋白表达的影响。结果显示,甘松新酮(50和100μmol·L-1)能够增加缺糖缺氧损伤神经元的存活率(P<0.01,与OGD组比较);同时,能增加缺糖缺氧神经元PKA、小分子G蛋白Ras的相关蛋白1(Rap1)、丝裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEK1)及磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达,且此作用呈剂量依赖趋势。对正常培养神经元研究结果显示,甘松新酮(50、100和200μmol·L-1)也能增加其PKA、Rap1、MEK1及p-ERK1/2的表达(P<0.01)。以上结果表明,甘松新酮对缺糖缺氧损伤的原代培养神经元有明确保护作用,该作用可能与药物激活PKA和ERK通路有关。     

对羟基苯甲醛对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究

目的探讨天麻酚性成分4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法复制大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,各组动物脑缺血2 h,再灌注24 h,以神经病学评分、脑梗死体积评价4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用;化学法(连二亚硫酸钠)复制原代皮层神经元OGD/Rep损伤模型,检测细胞存活率、MDA含量、SOD活性、NO释放量以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达,探讨其脑保护作用的可能机制。结果 4-HBd可降低MCAO/R模型大鼠的神经病学评分(P<0.05)、脑梗死体积(P<0.01),提高OGD/Rep损伤原代皮层神经元的细胞存活率(P<0.05)、SOD的活性(P<0.05),降低模型细胞MDA的含量(P<0.05)、NO的释放量(P<0.05),并能下调模型细胞Bax的表达水平(P<0.05)、上调Bcl-2的表达水平(P<0.05),下调Bax/Bcl-2的比值(P<0.05),最终下调caspase-3的表达水平(P<0.05)。结论 4-HBd对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与提高SOD活性、降低MDA含量、减少NO释放、下调Bax蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达、下调caspase-3蛋白表达,进而对抗神经细胞凋亡有关。     

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

瑞舒伐他汀通过调控UCP2-SIRT3通路减轻脑缺血/再灌注对神经元线粒体的损伤

目的探讨瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RS)通过UCP2-SIRT3信号通路在脑缺血/再灌注(CIR)神经元线粒体损伤中的作用及其机制。方法建立SH-SY5Y细胞的脑梗死再灌注模型(OGD/R),给予不同浓度RS(40和2.5μmol·L^-1)分别处理,观察两组中细胞增殖和凋亡的变化及UCP2和SIRT3分子的表达;构建UCP2沉默细胞系,研究不同浓度RS对UCP2沉默前后细胞形态和线粒体膜电位的影响、以及SIRT3分子、线粒体外膜异位酶20(TOMM20)和线粒体合成相关蛋白(Drp1、Opa1和PGC1)的表达变化。结果RS能提高OGD/R细胞的存活率、抑制细胞凋亡、改变细胞形态、稳定细胞线粒体膜电位;增加OGD/R细胞中UCP2、SIRT3分子和TOMM20蛋白表达,并诱导Drp1和Opa1 mRNA的表达,抑制PGC1 mRNA的表达;沉默UCP2后能明显降低OGD/R细胞的存活率及TOMM20蛋白的表达,降低Drp1和Opa1 mRNA的表达,使PGC1 mRNA的表达增加。结论RS通过调控UCP2-SIRT3通路减轻CIR对神经元线粒体的损伤,发挥神经细胞保护作用。     

谷氨酸损伤大鼠皮层神经元及抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性

利用原代培养的大鼠胎鼠皮层神经元 ,采用乳酸脱氢酶 (LDH)测定和32 P参入方法 ,研究谷氨酸 (Glu)对皮层神经元损伤 ,钙 /钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (Ca MK )活性的影响及其机理 .Glu(50- 1 0 0 0μmol· L-1)作用 1 0 min,导致皮层神经元Ca MK 活性立即明显下降 ,神经元形态及 LDH释放早期无明显改变 ,2 4 h时 LDH释放显著增加 ,神经元损伤 .N-甲基 - D-天冬氨酸 (NMDA)受体拮抗剂地佐环平 (MK- 80 1 )明显降低 LDH释放 ,保护Ca MK 活性 ,而非 NMDA受体拮抗剂 6,7-二硝基喹口恶啉二酮 (DNQX)无保护作用 .去除胞外 Ca2 +可明显保护 Ca MK 活性 .Ca MK 抑制剂 KN- 62可明显拮抗 Ca MK 活性下降 ,部分保护神经元损伤 .结果提示 ,Glu兴奋毒引起皮层神经元迟发性损伤和 Ca MK 活性早期明显下降 ,主要由 NMDA受体介导和胞外 Ca2 +内流增加有关 .     

粉防己碱对喹啉酸致海马神经元损伤的保护作用

目的研究粉防己碱(Tet)对喹啉酸(QA)诱导原代培养乳鼠海马神经元兴奋毒损伤的保护作用。方法乳鼠海马神经元原代培养后用QA诱导损伤,MTT法测定细胞活力,同时测定培养上清中LDH活性,神经元病理染色后进行形态学观察。结果Tet(10-6mol·L-1和10-7mol·L-1)能明显提高QA损伤后原代培养乳鼠海马神经元的细胞活力,降低其上清液中LDH活性,与模型组相比,差异均有显著性(P<0.01),并明显改善神经元病理损伤。结论Tet(10-6mol·L-1和10-7mol·L-1)对QA所致的原代培养乳鼠海马神经元损伤有明显保护作用。