长期液氮保存PBSC细胞凋亡及死亡检测

目的比较外周血干细胞（peripheral blood stem cell，PBSC）采集物中有核细胞经长期深低温保存后细胞凋亡及死亡率与新鲜采集物的差异，便于对PBSC进行活力评价。方法47份外周血干细胞采集物标本，新鲜对照标本12份，实验Ⅰ组为液氮保存2～4年的PBSC26份，实验Ⅱ组为液氮保存5～7年的PBSC9份，以流式细胞仪检测各组有核细胞中核酸染料7AAD着色的细胞百分比（代表死亡率），以及有核细胞中表达活化的caspase-3的细胞百分比（代表凋亡率）。结果两实验组的细胞死亡率和凋亡率均高于对照组（P〈0．05），实验Ⅱ组凋亡率为35．6％±17．51％，与实验Ⅰ组（24．14％±16．87％）的差异有显著性（P=0．031）。结论深低温保存2～7年的PBSC采集物中有核细胞活性较新鲜PBSC采集物低，凋亡率及死亡率升高。     

BioArchive自动液氮储存系统保存脐带血造血干细胞的效果评价

目的　评价BioArchive自动液氮储存系统脐带血造血干细胞的保存效果。方法　通过分析脐带血造血干细胞在BioArchive自动液氮储存系统中保存半年复苏后脐血有核细胞总数、CD34 细胞数量和造血祖细胞集落形成单位(CFU GM)的回收率,评价自动液氮储存系统保存效果。结果　85份新生儿脐带血复苏后有核细胞仍获得较高的产率,达到(8.97±4 .12 )×10 8,CFU GM计数达(90 .5 8±84 .5 0 ) /2×10 5,CD34 细胞数达到(7.2 8±3.5 7)×10 6。比较脐带血有核细胞冻存前后各组数据,经统计学分析,差异无显著性。结论　BioArchive自动液氮储存系统储存脐血造血干细胞的效果较为理想,适合于各种脐血库和细胞库的应用。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景：在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的：比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法：将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论：两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义（P〉0.05）。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景:在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的:比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法:将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论:两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

1963份脐血造血干细胞的处理与保存

本研究目的是建立脐血造血干细胞库的标准工作程序。采用自然沉降法加离心法制备脐血的造血干细胞 ,经CD34 细胞计数、集落培养、微生物检测、传染病指标检测、HLA分型后 ,将造血干细胞贮存在液氮中保存。结果表明 :贮存脐带血造血干细胞有核细胞数平均值为 (10 .94± 2 .74 )× 10 8,回收率为 (79.82± 17.76 ) % ,CD34 细胞数平均值为 (5 1.6 2± 30 .5 3)× 10 5。 8份脐带血造血干细胞冰冻 2年后复苏 ,其有核细胞、CD34 细胞、CFU GM回收率分别为 (91.4± 6 .0 ) %、(84 .6± 2 0 .0 ) %、(85 .8± 14 .9) %。结论 :本方法和程序能有效地保存脐带血造血干细胞。     

造血干细胞体外冻存的效果评价

目的探讨不同冻存环境和不同冻存时间对外周血造血干细胞活性的影响。方法采用每份终浓度为10%二甲亚砜、5%人血白蛋白作为细胞冷冻保存液对45份采集的干细胞分别进行冰箱转液氮组和冰箱组冻存,并观察冻存1、2、3年后单个核细胞(MNC)、CD34+细胞计数及细胞回收率,细胞活力。结果冰箱组冻存干细胞2、3年后单个核细     

不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响

目的:以二甲基亚砜作为保护剂,采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的兔骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。方法:实验于2003-09/2005-06在浙江省医学科学院生物工程所完成。①选取清洁级3月龄新西兰大白兔5只,抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液,密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出兔骨髓基质干细胞,并进行增殖。②取第3代骨髓基质干细胞,经消化后离心重悬,用完全培养液调整细胞浓度为6×109L-1。将质量浓度为250g/L的二甲基亚砜缓慢滴入同体积含骨髓基质干细胞的上述培养液中,混匀,二甲基亚砜的终浓度为125g/L,骨髓基质干细胞的终密度为3×109L-1,1mL/安瓿冻存。③4℃冻存直接将安瓿置4℃冰箱中;-20℃及-60℃冻存,则将安瓿置于有脱脂棉的聚丙烯泡沫盒中,壁厚1.5cm,扎紧密封,各置-20℃及-60℃冰箱过夜,取出后分别直接放于-20℃及-60℃冰箱保存;-196℃液氮冻存,则将置有安瓿的泡沫盒于-60℃冰箱过夜后,取出冻存安瓿直接放于液氮中保存。骨髓基质干细胞分别于4℃、-20℃、-60℃、-196℃条件下进行3d,10d,1,3,8个月以及1年的冻存。④经不同温度及不同时间冻存后,给予复苏。复苏时将冻存安瓿从液氮或冰箱中取出,立即置37℃水浴并轻轻摇动,约1min迅速解冻。含骨髓基质干细胞的冻存液经5倍于冻存液量的完全培养液稀释后,离心重悬,进行骨髓基质干细胞存活率测定。复苏后的骨髓基质干细胞以1×104/cm2用完全培养液再培养,观察骨髓基质干细胞的形态变化及生长活性情况。结果:实验选取3月龄新西兰大白兔5只,全部进入结果分析。①兔骨髓基质干细胞原代培养情况:培养3d时,骨髓基质干细胞数量较少,散在分布,呈短梭形形态。培养1周时细胞形成大量的小集落,细胞变长。此后集落细胞迅速增多,逐渐汇合成片,形态为均一的长梭形,呈旋涡状排列,2周时细胞长成单层。②兔骨髓基质干细胞传代培养情况:刚传代的骨髓基质干细胞呈圆形,数小时后迅速贴壁,重新成为梭形。之后细胞呈长梭形均匀分布生长,形态比原代培养更均一,细胞生长旺盛、增殖迅速。连续传代22代无明显变化。但随传代次数增多,细胞形态出现多样性,逐渐呈老化现象。③不同温度不同冻存时间下复苏后的兔骨髓基质干细胞存活率的比较:兔骨髓基质干细胞液氮保存1年,存活率为79%;-60℃保存1,3,8个月的存活率分别为67%,38%和0%;不宜于4℃及-20℃保存。④复苏后的骨髓基质干细胞再培养情况:复苏后的骨髓基质干细胞细胞形态及生长状况与冻存前无明显差异,呈长梭形生长,增殖旺盛。结论:分离纯化的兔骨髓基质干细胞生长增殖能力强,短期保存可用-60℃冻存,长期需液氮保存,为择期进行骨髓基质干细胞实验和应用提供实验依据。     

应用干细胞分离仪分离脐血与传统手工分离法的效果比较

目的:脐血处理的关键问题是提高干细胞的回收率及实现处理过程的标准化和可重复化,实验对此进行探讨,比较干细胞分离仪与传统羟乙基淀粉手工法分离脐血的效果。方法:实验于2006-12/2007-05在广州医学院附属市一人民医院完成。①脐血来源:39份脐血采自广州医学院附属市一人命医院妇产科健康顺产新生儿脐带,产妇均知情同意。随机数字表法分为仪器分离组17份、手工分离组22份。②实验方法:仪器分离组收集脐血称质量,计算体积,在开始处理前20min缓慢加入相当于20%脐血体积的60g/L羟乙基淀粉。仪器分离组按仪器要求自动分离,分离终体积20mL。手工分离组50g离心5min,压浆板压出全部血浆以及18mL红细胞移至无菌空袋,500g离心13min,自动压浆板压出血浆,保留20mL终体积样本。③实验评估:采用全自动计数仪进行检测有核细胞(白细胞)、红细胞数量。流式细胞仪分析CD34 含量。结果:采用干细胞分离仪处理浓缩脐血,有核细胞回收率为(89.7±3.4)%,CD34 细胞回收率为(98.8±5.1)%,红细胞去除率为(55.2±16.7)%,均比手工分离组分离效果好,差异有显著性意义(P<0.05或0.01)。同时,仪器分离组有核细胞回收率、CD34 细胞回收率的标准差均明显低于手工分离组(3.4vs.15.3;5.1vs.10.3)。结论:相比传统的羟乙基淀粉手工分离法,干细胞分离仪脐血分离浓缩效果理想,且结果标准误小,数据稳定。     

人胚胎干细胞的保存方法

目的:胚胎干细胞经传代长期培养后会导致核型出现异常、未分化细胞的克降数减少,因此经低温保存后复苏的胚胎干细胞必须要保持其未分化状态及生物学特性.实验拟比较程序降温法、改良慢速冻存法及传统慢速冻存法对人胚胎干细胞冷冻保存的效率,以及解冻后细胞生长与分化的状态.方法:实验于2006-07/2007-04在解放军军事医学科学院野战输血研究所完成.①材料:清洁级孕13.5 d的ICR小鼠由军事医学科学院动物中心提供,用于制备鼠成纤维细胞饲养层,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.人胚胎干细胞系PKU由北京大学第三医院生殖中心建立并提供:kryo-550.16程序降温仪为英国planner公司产品,由液氮压力泵、液氮罐、层流冷冻箱、温度传感器组成.②实验方法:将人胚胎干细胞系PKU接种在胚胎鼠成纤维细胞饲养层上,胶原酶Ⅳ消化传代,分3组冷冻保存人胚胎干细胞.程序降温法:用吸管将消化后人胚胎干细胞吹成若干团块,取65个团块移入配制的冻存液中,装入麦管进行三段式降温,即22℃～-7℃,每分钟降温2.5℃→-7℃置核后停留5min→-7℃～-30℃,每分钟降温0.3℃ 30℃～-150℃,每分钟降温10℃.降至-150℃时置液氮中保存.改良慢速冻存法:A管含人胚胎干细胞培养基和血清替代品,B管含人胚胎千细胞培养基和二甲亚砜,将60个团块置入A管,再将B管液体移入A管,混匀后-70℃过夜,第2天移入液氮中保存.传统慢速冻存法:将60个团块直接放入添加二甲亚砜的人胚胎干细胞培养基中混匀,分装入冻存管,-4℃放置1 h,-70℃过夜,第2天移入液氮长期保存.③实验评估:解冻后,将保持完整形态且细胞未散离的人胚胎干细胞团块回收,比较3组细胞复苏率、复制生长状态、克隆分化程度.鉴定程序降温组人胚胎干细胞的生物学特性.结果:①复苏率:程序降温组、改良慢速冻存组、传统慢速冻存组的细胞复苏率分别为78.5%、56.7%和23.3%,组间比较差异有显著性意义(x2=6.81～13.89,P＜0.01).②复制生长与克隆分化程度:解冻后第7天与传统慢速冻存组比较,程序降温组及改良慢速冻存组细胞克隆均明显增大(t=7.36,P＜0.05:t=6.89,P＜0.05),且解冻后克隆不易分化(x2=20.47,P＜0.01:x2=9.69,P＜0.01).③生物学特性鉴定:程序降温组解冻后第10代人胚胎干细胞染色体核型正常,人胚胎干细胞特异性表面抗原SSEA-4及TRI-1.81表达呈阳性,RT-PCR可检测到nanog基因表达,SSEA-4及OCT-4阳性表达率分别为83.44%、89.38%.结论:①程序降温法是冷冻保存人胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和生物学特性.②在不具备程序降温仪的条件下,采用改良慢速冻存法保存胚胎干细胞也是可行的.     

不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响

目的：以二甲基亚砜作为保护剂，采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的免骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。 方法：实验于2003-09／2005—06在浙江省医学科学院生物工程所完成。①选取清洁级3月龄新西兰大白兔5只，抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出兔骨髓基质干细胞，并进行增殖。②取第3代骨髓基质干细胞，经消化后离心重悬，用完全培养液调整细胞浓度为6&;#215;10^9L^-1。将质量浓度为250g／L的二甲基亚砜缓慢滴入同体积含骨髓基质干细胞的上述培养液中，混匀，二甲基亚砜的终浓度为125g／L，骨髓基质干细胞的终密度为3&;#215;10^9 L^-1，1mL／安瓿冻存。③4℃冻存直接将安瓿置4℃冰箱中；-20℃及-60℃冻存，则将安瓿置于有脱脂棉的聚丙烯泡沫盒中，壁厚1．5cm，扎紧密封，各置-20℃及-60℃冰箱过夜，取出后分别直接放于-20℃及—60℃冰箱保存；-196℃液氮冻存，则将置有安瓿的泡沫盒于-60℃冰箱过夜后，取出冻存安瓿直接放于液氮中保存。骨髓基质干细胞分别于4℃、-20℃、-60℃、-196℃条件下进行3d，10d，1，3，8个月以及1年的冻存。④经不同温度及不同时间冻存后，给予复苏。复苏时将冻存安瓿从液氮或冰箱中取出，立即置37℃水浴并轻轻摇动，约1min迅速解冻。含骨髓基质干细胞的冻存液经5倍于冻存液量的完全培养液稀释后，离心重悬，进行骨髓基质干细胞存活率测定。复苏后的骨髓基质干细胞以1&;#215;10^4／cm^2用完全培养液再培养，观察骨髓基质干细胞的形态变化及生长活性情况。结果：实验选取3月龄新西兰大白兔5只，全部进入结果分析。①兔骨髓基质干细胞原代培养情况：培养3d时，骨髓基质干细胞数量较少，散在分布，呈短梭形形态。培养1周时细胞形成大量的小集落，细胞变长。此后集落细胞迅速增多，逐渐汇合成片，形态为均一的长梭形，呈旋涡状排列，2周时细胞长成单层。②兔骨髓基质干细胞传代培养情况：刚传代的骨髓基质干细胞呈圆形，数小时后迅速贴壁，重新成为梭形。之后细胞呈长梭形均匀分布生长，形态比原代培养更均一，细胞生长旺盛、增殖迅速。连续传代22代无明显变化。但随传代次数增多，细胞形态出现多样性，逐渐呈老化现象。③不同温度不同冻存时间下复苏后的兔骨髓基质干细胞存活率的比较：兔骨髓基质干细胞液氮保存1年，存活率为79％；-60℃保存1，3，8个月的存活率分别为67％，38％和0％；不宜于4℃及-20℃保存。（少复苏后的骨髓基质干细胞再培养情况：复苏后的骨髓基质干细胞细胞形态及生长状况与冻存前无明显差异，呈长梭形生长，增殖旺盛。 结论：分离纯化的兔骨髓基质干细胞生长增殖能力强，短期保存可用-60℃冻存，长期需液氮保存，为择期进行骨髓基质干细胞实验和应用提供实验依据。     

Cesarean section due to fetal distress increases the number of stem cells in umbilical cord blood

BACKGROUND: Umbilical cord blood (UCB) can be used as hematopoietic stem cell source for transplantation. The success of a transplantation is highly correlated with the number of total nucleated cells (TNCs) and CD34+ cells in the UCB. Certain obstetric factors increase the yield of stem cells in the UCB. It is necessary to evaluate optimal conditions in labor to decrease the rate of sample rejection due to low cell count. No data exist regarding the difference between primary and secondary Cesarean sections in terms of efficacy of stem cell harvesting. STUDY DESIGN AND METHODS: Seventy-nine consecutive UCB units from women who had a Cesarean section between 1997 and 2003 were included. The number of TNCs, CD34+ cells, colony-forming units (CFUs), white blood cells (WBCs), nucleated red blood cells (NRBCs), and the total collection volume were compared between cases with primary and secondary Cesarean section. RESULTS: UCB obtained after a Cesarean section due to fetal distress has significantly higher numbers of TNCs, CD34+ cells, NRBCs, and WBCs compared to elective Cesarean section. Of the cases with secondary Cesarean section due to fetal distress, 67 percent resulted in UCB units with sufficient TNC numbers (> or =80 x 10(7) TNCs) compared to 42 percent of the cases with primary Cesarean section. CONCLUSION: Fetal distress increases the number of hematopoietic stem cells mobilized into UCB. Particular effort should be made to collect UCB from newborns who experienced fetal distress.     

Cord Blood Banking and Transplantation in China: A Ten Years Experience of a Single Public Bank

Background

Umbilical cord blood (UCB) has successfully used for transplantation to treat hematologic malignancies and genetic diseases. Herein, we describe the experience generated in a single public UCB bank at Zhejiang Province in China.

Methods

Good manufacturing practice and standard operating procedures were used to address donor selection as well as UCB collection, processing, and cryopreservation. Total nucleated cells (TNCs), cellular viability, CD34+ cells, and colony-forming units were determined, and infectious diseases screening test, sterility test, and HLA typing for UCB units were done.

Results

Only 18.51% of all collected UCB units met storage criteria, and 7,056 UCB units were cryopreserved in 10 years. The volume of UCB units was 95.0 ± 22.0 ml. The number of TNCs before and after processing was 13.32 ± 3.63 × 10⁸ and 10.63 ± 2.80 × 10⁸, respectively, and the recovery rate was 80.71 ± 11.26%. 0.4344 ± 0.1874% of the TNCs were CD34+ cells. The CFU-GM was 32.1 ± 28.0 colonies per 1 × 10⁵ nucleated cells. Based mainly on HLA and nucleated cell content, 26 UCB units were released for transplantation.

Conclusions

A public UCB bank was successfully established in China; collection and processing of UCB units should be optimized in order to gain maximum volume and cell count.     

-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响

目的探讨-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响。方法对-80℃下分别冻存1、2、3、4、8、16、32 w的脐血细胞进行复苏,比较各组间有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率的差异。结果脐血细胞在-80℃下保存1、2、3、4、8 w后,各组的有核细胞数和CD34^＋数的差异无统计学意义,而在冻存16、32 w后较1 w的差异有统计学意义（P〈0.05）。台盼蓝拒染率在8、16、32 w较1 w的差异均有统计学意义（P〈0.05）,1、2、3、4 w各组间的差异无统计学意义。结论-80℃直接冻存对于短期（〈8 w）脐血细胞的活性（有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率）无明显影响,但对于需要长期保存的脐血细胞的效果有影响。     

骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血单个核细胞表面抗原表达的影响

背景：课题组已建立胎儿骨髓基质细胞联合细胞因子的造血细胞体外培养体系,该培养体系能否有效扩增各个发育阶段的造血细胞有待验证。目的：观察骨髓基质细胞联合细胞因子培养体系对脐血单个核细胞表面抗原CD133、CD34表达的影响。方法：将从脐血标本中分离出来的单个核细胞接种于无血清培养体系,实验分为3组：①F组：干细胞因子＋Flt3配体＋促血小板生成素＋单个核细胞。②S组：基质细胞＋单个核细胞。③SF组：基质细胞＋干细胞因子＋Flt3配体＋促血小板生成素＋单个核细胞。在第0,6,10,14天检测有核细胞总数、CD133^＋、CD34^＋、CD133^＋CD34^＋细胞数以及集落形成单位数。结果与结论：SF组有核细胞总数在各个检测时间点均比其他两组高;除了第14天外,第6、10天两个时间点SF组中CD133^＋、CD34^＋、CD133^＋CD34^＋细胞及集落形成单位数均高于其他组;含骨髓基质细胞的S组和SF组中CD133＋细胞/有核细胞、CD34＋细胞/有核细胞、CD133＋CD34＋细胞/有核细胞的比例保持在较高的水平。结果说明骨髓基质细胞联合细胞因子能有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133^＋、CD34^＋、CD133^＋CD34^＋细胞,基质细胞对维持造血干细胞的原始性具有重要的作用。     

深低温冻存不同时间对脐血细胞质量的影响

本研究旨在探讨不同冻存时间的脐血干细胞复苏后的回收率,并分析冷冻复苏的细胞对患者植入速度的影响。20份经-196℃液氮低温保存1-10年的脐血干细胞标本,比较冻存前（脐血库提供资料）和复苏后的细胞活率、总有核细胞数（TNC）、CD34＋细胞和粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）的数量,并分析复苏后的细胞回收对移植受者植入速度的影响。结果表明,不同冻存时间对复苏后干细胞的回收率没有影响。经冻存复苏后,细胞活存率为（92．75±2．55）％,TNC、CD34＋细胞数和CFU-GM的回收率分别为89．9％、84．8％和84．3％,与冻存前相比明显减少（P=0．000）,但细胞数量的下降对移植患者中性粒细胞和血小板的植入时间均无影响。冻存后TNC和CD34＋细胞数量与冻存前数量有很大的相关性（r=0．954;r=0．931,P=0．000）,而CFU-GM的相关性弱（r=0．285,P=0．223）。结论：冻存和复温过程会-定程度上损伤脐血干细胞,导致细胞丢失,但不会影响移植的效果。     

供者特征对脐带血造血功能的影响

目的 分析可能影响脐带血造血功能的供者特征.方法 对广州脐带血库1998年6月至2008年12月保存的4 358份脐带血的供者特征(包括母亲年龄、分娩方式、妊娠期、婴儿体重、婴儿性别)和脐带血采集量及造血功能的指标(包括总有核细胞数、CD34+细胞、干细胞集落等)进行相关性分析.结果 婴儿体重、分娩方式及婴儿性别是影响脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs及CFU-GM的主要因素.随着婴儿体重的增加,脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs、CFU-GM均呈上升趋势(P=0.000).阴道分娩时脐带血的采集量虽然低于刮宫产(P=0.000),但总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs,CFU-GM均高于剖宫产(P=0.000).女婴脐带血中总有核细胞数含量高于男婴(P=0.000),但脐带血采集量(P=0.000)、CD34+细胞数(P=0.002)均低于男婴.随着妊娠期的延长,脐带血中总有核细胞数增加(P=0.000),但CD34+细胞数减少(P=0.001).结论 某些脐带血供者特征对脐带血造血功能指标有积极影响.     

脐血造血干细胞短期冻存效果的评价

为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果，分别将各自为8例冻存6个月、1年、2年的脐血千细胞进行复苏，观察造血干细胞活性。有核细胞(NC)计数采用自动血细胞分析仪测定，CD34^ 细胞采用流式细胞技术测定，用体外造血细胞培养技术分析粒一巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)产率，台盼蓝染色法判断造血细胞存活率。结果表明：脐血造血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后解冻，其有核细胞、CD34^ 细胞、细胞活率、CFU-GM产率在3个不同冻存时间的差异无显著性。结论：脐血干细胞于液氯中短期冻存，其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化，冻存效果较好。     

A simple controlled-rate freezing method without a rate-controlled programmed freezer provides optimal conditions for both large-scale and small-scale cryopreservation of umbilical cord blood cells

BACKGROUND: Umbilical cord blood (CB) is being used as a source of alternative HPCs for transplantation with increasing frequency. The goal of CB banks for unrelated transplantation is to provide good quality-controlled CB units that can be transplanted for HPCs into the largest possible number of patients. STUDY DESIGN AND METHODS: Large CB samples in freezing bags wrapped with insulators and small samples in cryotubes placed into double styrene-foam boxes were cryopreserved at -85 degrees C without a rate-controlled freezing machine, followed by storage in the liquid phase of nitrogen. After thawing these cells, the viability and recovery of cells, as well as the recovery rate of HPCs such as CD34+ cells, CFU-GM, and total CFU were evaluated. RESULTS: Measurement of the freezing rate in CB bags and cryotubes demonstrated that this simple method for cryopreservation of CB cells provided optimal conditions for both large-scale and small-scale cryopreservation. Recovery of CB progenitor cells after cryopreservation was also shown to be potentially acceptable when evaluated with CD34+ cells, CFU-GM, and total CFU. These results were comparable to the method using a rate-controlled programmed freezer. CONCLUSIONS: A simple method for cryopreservation of CB cells without a rate-controlled programmed freezer could provide a sufficient-enough potential for the transplantability of HPCs after thawing.     

Comparison of CD34+ cell numbers and colony growth before and after cryopreservation of peripheral blood progenitor and stem cell harvests: influence of prior chemotherapy

BACKGROUND: Quantitative determination of hematopoietic progenitor cells is a major issue in peripheral blood progenitor and stem cell collection and transfusion, although the extent is still an object of discussion. STUDY DESIGN AND METHODS: In 116 leukapheresis collections from 42 patients, immunophenotyping for CD34+ cells, evaluation of in vitro proliferative capacity by a colony-forming unit-granulocyte- macrophage (CFU-GM) assay, and viability assessment by trypan blue exclusion were performed before and after storage in liquid nitrogen at -196 degrees C. RESULTS: Before storage, the median number of CD34+ cells was 1.46 × 10(6) (range, 0.01–54.05 × 10(6)) per kg of body weight (BW). There was no significant difference between precryopreservation and postcryopreservation numbers. The median number of CFU-GM was 2.25 × 10(5) (range, 0.02–157.49 × 10(5)) per kg of BW before cryopreservation and significantly (p < 0.001) lower, 0.83 × 10(5) (range, 0–220.36 × 10(5)) per kg of BW, after cryopreservation. The correlation coefficient of prestorage and poststorage values was 0.92. The median ratio of poststorage and prestorage values was 42.3 percent (0–304.8%). Male patients who underwent intense chemotherapy (> 5 cycles) showed a significantly lower ratio of postcryopreservation and precryopreservation CFU-GM values than other patients (p = 0.0047). A strong linear correlation was determined between the number of CD34+ cells per kg of BW and the number of CFU-GM per kg of BW before and after cryopreservation. A viability below 50 percent predicted a high loss of in vitro proliferative capacity, while a viability above 50 percent did not correlate with a high ratio of CFU-GM from after and before cryopreservation. CONCLUSION: A good correlation between the variables used for characterization of peripheral blood progenitor cells–the number of CD34+ cells and the number of CFU-GM–was observed. Viability assessment by trypan blue exclusion does not seem to be a substitute for assays evaluating in vitro proliferative capacity.