灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用

目的:探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:用不同浓度的灵芝多糖处理B16F10黑素瘤细胞,以正常培养基代替灵芝多糖培养B16T10黑素瘤细胞为对照.分别采用Westem blot法和RT-PCR法检测灵芝多糖作用48h后B16F10黑素瘤细胞VEGF蛋白和mRNA表达的变化.结果:浓度为0.8μg/ml、3.2μ g/ml、12.8μg/ml的灵芝多糖处理B16F10细胞后,B16F10细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平均明显降低(P＜0.05).结论:灵芝多糖可能通过抑制B16F10黑素瘤细胞分泌EGF起到抑制肿瘤的作用.     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞黏附和迁移的影响

目的:了解三氧化二砷(As₂O₃)对黑素瘤B16细胞迁移能力的影响,评价As₂O₃抗肿瘤侵袭和转移能力。方法:用Transwell侵袭转移模型评价As₂O₃抗黑素瘤B16细胞的侵袭和转移作用。MTT法检测B16细胞的黏附能力。流式细胞术检测B16细胞表面黏附分子CD44的表达情况。结果:As₂O₃可显著抑制B16细胞的迁移和黏附能力(P<0.05~P<0.01),降低细胞表面黏附分子CD44的表达(P<0.01)。结论:As₂O₃具有抗黑素瘤B16细胞侵袭和转移作用,降低细胞表面黏附分子CD44的表达可能是其机制之一。     

灵芝多糖对小鼠黑素瘤细胞的体外抑制作用

目的：探讨灵芝多糖在体外对小鼠黑素瘤B16F10细胞株的抑制作用。方法：以小鼠黑素瘤B16F10细胞株为研究对象,用MTT法检测灵芝多糖对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞毒作用。结果：经灵芝多糖作用后黑素瘤B16F10细胞增殖活性受抑,细胞死亡增多。结论：灵芝多糖可抑制B16F10细胞的增殖,促进细胞死亡。     

全反式维甲酸对小鼠黑色素瘤B16F10细胞生物学行为的影响

目的 探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖、迁移、凋亡、致瘤性的影响及其初步作用机制.方法 采用MTT法检测ATRA对小鼠黑色素瘤细胞B16F10和小鼠成纤维细胞L929增殖能力的影响.显微镜下观察给药后两种细胞的形态变化,应用划痕实验和Transwell实验检测ATRA对B16F10细胞迁移能力的影响,分别采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI染色观察B16F10细胞凋亡情况,JC-1染色实验检测B16F10细胞线粒体膜电位,荧光分光光度计检测B16F10细胞中Caspase-9、Caspase-3的活化情况,利用体内成瘤实验观察ATRA对B16F10细胞致瘤性的影响.结果 MTT结果显示ATRA呈浓度依赖性地抑制B16F10细胞和L929细胞增殖,但B16F10细胞的存活率明显低于L929细胞的存活率(P＜0.05);分别以低、中、高3个浓度(6.25、16、40 μmol/L)的ATRA处理细胞24 h后,显微镜下可见B16F10细胞在中浓度时呈凋亡样改变,高浓度时细胞基本死亡,丧失正常形态;而L929细胞形态仅在高浓度时发生显著变化;划痕实验和Transwell实验提示B16F10细胞的体外迁移能力在中浓度即受到明显抑制(P＜0.05);继续以中浓度(16 μmol/L)的ATRA作用B16F10细胞24 h,DAPI染色可见细胞核裂解,甚至可见凋亡小体;AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞仪测得细胞凋亡率为(37.27±4.42)％;JC-1染色实验提示线粒体膜电位明显降低;荧光分光光度计测得给药后Caspase-9、Caspase-3显著被活化,活性分别增加了(1.54±0.00)、(3.09 ±0.01)倍(P＜0.05);成瘤实验结果显示ATRA处理后的B16F10细胞致瘤性显著降低(P＜0.01),甚至消失.结论 ATRA能显著抑制B16F10细胞体外增殖、迁移能力,并能通过降低线粒体膜电位,活化Caspase-9、Caspase-3蛋白诱导细胞凋亡,进而抑制B16F10致瘤性.     

紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10细胞凋亡影响的机制研究

目的 探讨紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10细胞凋亡的影响和作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测紫杉醇对B16-F10细胞增殖能力及细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 紫杉醇（0.001-10 μM）对B16-F10细胞表现出抑制作用,并且这种抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性,随着浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用更为明显.低浓度对细胞周期G0/G1作用,而高浓度对G0/G1和G2/M均发挥作用.结论 紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10具有明显促进凋亡的作用.紫杉醇可能作为黑色素瘤治疗的策略之一.     

构建稳定表达PDL1的B16F10细胞株

目的通过转染及流式细胞仪(flow cytometry,FCM)筛选出稳定表达小鼠细胞程式死亡配体1(Programmed cell death ligand 1,PDL1)的B16F10细胞株。方法将携带PDL1的真核表达质粒通过脂质体法转染到B16F10细胞株中,经FCM进行多次分选,筛选出稳定表达PDL1的B16F10细胞株,将其与抗CD3/抗CD28抗体活化的CD4⁺ T细胞共培养48 h后,FCM检测CD4⁺ T细胞表面CD69以及CD25的表达。结果建立了稳定表达PDL1的B16F10细胞株,该细胞株表面的PDL1可诱导CD4⁺ T细胞高表达CD25。结论成功地得到了稳定表达PDL1的B16F10细胞株,为后续研究奠定了物质基础。     

IL-17对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响。方法:体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,选择对数生长期的细胞,在培养基中加入一定浓度的IL-17,并设空白对照组,MTT法检测IL-17对B16细胞增殖能力的影响;transwell侵袭实验检测IL-17对B16细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性。结果:IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无变化(P>0.05)。transwell侵袭实验显示,IL-17处理组B16细胞穿膜细胞数明显增多(P<0.01)。明胶酶谱实验显示,IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性增强(P<0.01)。结论:IL-17对黑色素瘤B16F10细胞的增殖能力无影响,但可促进细胞侵袭,可能通过增强MMP-2和MMP-9的活性而发挥作用。     

灵芝多糖对NK细胞活性影响的研究

灵芝具有滋补强壮 ,扶正固本之功效 ,是祖国医药宝库的精华之一。灵芝多糖 (ｇａｎｏｄｅｒｍａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＧＰＳ )作为灵芝的有效成分 ,具有多种生理活性与药理作用。近年来 ,对其研究已进入细胞、分子乃至基因水平。我们就灵芝多糖对ＮＫ细胞活性的影响进行了实验研究 ,探讨不同浓度灵芝多糖下ＮＫ细胞活性的变化 ,进而指导临床科学用药。1　材料和方法1 1　材料1 1 1　灵芝多糖 :以泰山赤灵芝为原料 ,提取灵芝多糖 ,由泰山医学院药理教研室提供。1 1 2　Ｋ5 6 2 :对数生长期的Ｋ5 6 2 ,由山东省医科院免疫室提供。1 1 …     

灵芝多糖的抗氧化作用研究

目的 研究灵芝多糖的抗氧化作用,为灵芝多糖化妆品抗皮肤衰老功效提供科学依据。方法 化学方法评价灵芝多糖的总还原能力、羟基自由基和DPPH自由基清除能力;检测灵芝多糖脂质体过氧化进程中过氧化物和丙二醛（MDA）的产量考察其抗脂质体氧化能力;体外细胞实验考察灵芝多糖对H₂O₂诱导氧化损伤的HaCaT细胞的保护作用;在体实验考察自制灵芝多糖乳液对D-半乳糖亚急性小鼠衰老模型皮肤中超氧化物歧化酶（SOD）活力、MDA和羟脯氨酸（Hyp）含量的影响。结果 灵芝多糖的还原能力和清除2种自由基能力均呈浓度依赖性,而且它能抑制脂质过氧化物生成,60 h灵芝多糖脂质体产生的过氧化物为空白脂质体的九分之一,MDA产量为空白脂质体的三分之一。灵芝多糖在0.312 5~1.25 mg/mL的范围内对H₂O₂氧化损伤的HaCaT细胞有保护作用（P<0.01）,且保护作用随多糖浓度升高而增强。小鼠皮肤涂抹低剂量自制灵芝多糖乳液后,皮肤中SOD活力显著高于模型组（P<0.05）;高剂量涂抹时,MDA含量显著下降,Hyp含量显著升高（P<0.05）,自制灵芝多糖乳液抗氧化能力略优于市售乳液。结论 多层面评价了灵芝多糖的抗氧化活性,初步研制出具有抗衰老功效的灵芝多糖乳液,为灵芝多糖抗衰老化妆品的开发提供研究基础。      

八棱丝瓜蛋白2对B16细胞的诱导分化作用

目的测定八棱丝瓜蛋白2（LF-2）对小鼠黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用.方法以MTT法测定LF-2对B16细胞的增殖抑制作用,以形态学、黑色素含量及细胞周期变化为指标,观察LF-2诱导B16细胞分化的作用.结果LF-2对B16细胞具有明显的增殖抑制作用,并使B16细胞停滞于G1期;细胞生长缓慢,平铺不重叠,甚至形成网状结构,呈正常上皮样细胞分化,细胞质内细胞器丰富,黑色素小体明显增多;黑色素含量显著增加.结论LF-2对B16细胞具有明显的诱导分化作用.     

千里光总碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响

目的探索千里光总碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法采用3H-TdR掺入法观察千里光总碱对小鼠黑色素瘤B16F10株的影响。结果千里光总碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤B16F10株的增殖。结论千里光总碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤细胞的增殖。     

灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究

目的:探究分析灵芝多糖的抑制作用及其对小鼠免疫系统的影响. 方法:随机选取95只小鼠并采用瘤细胞建立免疫抑制动物模型,将所选小鼠随机分为48例实验组和47例对照组,实验组小鼠采用灵芝多糖口服液灌注,对照组小鼠给予生理盐水灌注,观察并分析灵芝多糖对小鼠的存活期、抑瘤作用及免疫系统的影响作用. 结果:实验组肿瘤小鼠的生存期明显高于对照组肿瘤小鼠(P<0.05) ,并且实验组小鼠血清中TNF-α、IL-2水平显著提高,其肿瘤细胞NK活性及淋巴细胞增生率也显著高于对照组( P<0.05). 结论:灵芝多糖对小鼠肿瘤无直接抑制作用,其抗肿瘤功效主要是通过机体的免疫系统介导,并且灵芝多糖能够有效延长机体生存期.     

六味地黄丸含药血清调控黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用

[目的] 观察六味地黄丸含药血清调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx)表达的作用.[方法]采用SD大鼠灌胃8 d制备六味地黄丸含药血清(药物荆量为32 g·kg-1·d-1)和对照血清(灌胃等容积生理盐水);选择对B16细胞生长和形态影响不大的血清浓度 (体积分数为10%) 作为大鼠血清的工作浓度;采用Western blot技术和间接免疫荧光法及流式荧光法检测六味地黄丸含药血清对黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx26/30/32)表达的影响.[结果]Westem blot检测显示空白组 (无鼠血清) 3种Cx几乎不表达,而对照血清和六味地黄丸各浓度含药血清均能提高Cx蛋白的表达,但含药血清的作用更为明显且有显著的量效关系;间接免疫荧光法和流式荧光法检测显示类似的结果:对照血清组和中、高剂量含药血清组的Cx蛋白荧光强度均较空白组显著增加(P<0.01),但与对照血清组比较,只有高剂量含药血清组荧光强度显著增加(P<0.05),低剂量舍药血清组Cx蛋白表达反而下降(P<0.01).[结论]六味地黄丸含药血清具有调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用.     

灵芝多糖预处理对顺铂肾毒性和抑瘤率的影响

目的　探讨灵芝多糖 (GLP)对顺铂 (CDDP)所致肾毒性的预防作用和对其抑瘤率的影响。方法　雌性Wistar大鼠接种W2 56癌肉瘤后随机分为生理盐水组、灵芝多糖组、顺铂组、顺铂 +灵芝多糖组 ,连续给药 10d后采样 ,分别测血肌酐 (Scr)、尿素氮 (BUN)、肾皮质组织丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性 ,并计算抑瘤率。结果　顺铂组血清Scr、BUN明显升高 ,肾皮质组织MDA含量升高 ,SOD与GSH -Px活性降低 ,与生理盐水组比较有显著差异 (P <0 0 5 ) ;顺铂 +灵芝多糖组血清Scr、BUN降低 ,肾皮质组织MDA含量降低 ,SOD活性、GSH -Px活性升高 ,与顺铂组比较有显著差异 (P <0 0 5 ) ;顺铂 +灵芝多糖组抑瘤率与顺铂组比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,与灵芝多糖组、生理盐水组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　灵芝多糖能减轻顺铂肾毒性 ,其机制可能与抑制顺铂致肾皮质脂质过氧化增强有关 ,且灵芝多糖不影响顺铂抗肿瘤活性     

条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡

目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm~2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。     

灵芝生料酿制液降血脂作用研究

[目的]探讨灵芝生料酿制液的降血脂药理作用。[方法]采用蛋黄乳致高血脂小鼠模型和高脂饮食致高血脂大鼠模型，观察不同剂量的灵芝生料酿制液对两种高血脂模型的降血脂作用，并与血脂康、灵芝的传统剂型灵芝饮和灵芝胶囊作比较。[结果]灵芝生料酿制液可降低蛋黄乳致高血脂模型小鼠血清甘油三酯(TG)和胆固醇(CH)的含量(与模型组比较，P＜0．05或P＜0．01)；可显著降低高脂饮食致大鼠高血脂症血清甘油三酯和胆固醇的含量(与模型组比较，P＜0．05或P＜0．01)，而高密度脂蛋白(HDL—CH)的作用不明显。[结论]灵芝生料酿制液具有较好的降血脂作用，有望开发为新的降脂药物。