CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白（TBL1X）轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法 将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组（5.5 mmol/L葡萄糖）、HG组（25 mmol/L葡萄糖）、si-NC组（25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC）、si-circACTR2组（25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2）、si-circACTR2+inhibitor-NC组（25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染）、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组（25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染）。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；划痕实验检测细胞迁移；酶联免疫吸附试验检测丙二醛（MDA）水平和乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性；Weste...     

激动线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的大鼠心肌细胞MMP-14及TIMP-4的影响北大核心CSCD

目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型。实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L^(-1))、NG+ALDH2激动剂Alda-1组、高糖组(HG,30 mmol·L^(-1)),HG+Alda-1组。MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达。结果根据细胞活力检测确定30 mmol·L^(-1)葡萄糖干预48 h为损伤模型。与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、ALDH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低。结论激动ALDH2可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关。     

高糖通过miR-192调控CAV-1/EGF影响肾小球系膜细胞增殖、迁移及细胞外基质形成的机制研究

目的 探讨高糖条件下miR-192对肾小球系膜细胞增殖、迁移及细胞外基质形成的影响及可能的作用机制。方法 体外培养人肾小球系膜细胞并分为6组：正糖（NG,5.6 mmol/L葡萄糖）组、高糖（HG,25 mmol/L葡萄糖）组、正糖加miR-192模拟物（NG+mimics）组、高糖加miR-192模拟物（HG+mimics）组、正糖加miR-192抑制剂（NG+inhibitor）组、高糖加miR-192抑制剂（HG+inhibitor）组。干预24 h后,CCK-8法检测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测miR-192、小窝蛋白1（CAV-1）、表皮生长因子（EGF）、1型胶原蛋白（COLⅠ）、纤连蛋白（FN）mRNA水平,Western blot检测相关蛋白表达。结果 与NG组相比,HG组细胞增殖率和划痕愈合率增加,EGF、FN、COLⅠ mRNA和蛋白表达升高,CAV-1 mRNA和蛋白表达降低（均P<0.05）。在NG组和HG组分别加入miR-192 inhibitor后,细胞增殖率和划痕愈合率减少,EGF、FN、COLⅠmRNA和蛋白表达降低,CAV-1 mRNA和蛋白表达升高（均P<0.05）,HG组加入miR-192 inhibitor变化更加明显。在NG组和HG组分别加入miR-192 mimics后,细胞增殖率和划痕愈合率增加,EGF、FN、COLⅠ mRNA和蛋白表达升高,CAV-1 mRNA和蛋白表达降低（均P<0.05）。结论 高糖通过miR-192-CAV-1-EGF途径增加肾小球系膜细胞增殖和迁移,导致细胞外基质的形成。     

LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖（25 mmol/L葡萄糖）在体外构建糖尿病心肌病（DCM）细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力；乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒检测LDH释放总量；采用实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达；caspase-Glo3检测试剂盒评估casp...     

水飞蓟宾对高糖诱导人足细胞中VEGF表达的影响

目的 探讨水飞蓟宾对高糖诱导的体外培养人足细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养的人足细胞分为7组:正常糖(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)组、甘露醇对照(MN,甘露醇24.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L)组、高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组、HG+低浓度水飞蓟宾(HG+LS,水飞蓟宾5 μg/ml)组、HG+中浓度水飞蓟宾(HG+MS,水飞蓟宾10μg/ml)组、HG+高浓度水飞蓟宾(HG+HS,水飞蓟宾20μg/ml)组、HG+二甲亚砜(HG+D,DMSO 1 mg/ml)组.各作用48 h后,RT-PCR半定量法及Western印迹法检测足细胞VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 体外培养人足细胞表达基础水平的VEGF,HG刺激48 h后足细胞VEGF基冈和蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与HG组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾均可抑制HG所诱导的VEGF基因和蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 HG可使足细胞表达VEGF增加,水飞蓟宾可通过抑制HG诱导足细胞产生过多VEGF而具有潜在保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

盐酸埃他卡林对高糖致内皮细胞粘附分子基因过度表达的调节作用

目的观察盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)对D-葡萄糖(D-glucose)诱导的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant prote in-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(intercellu lar adhesive molecu le-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascu lar cell adhesive mole-cu le1-1,VCAM-1)mRNA过度表达的调节作用。方法以β2-微球蛋白为内参,应用逆转录-聚合酶链式反应技术检测空白对照组、高浓度D-葡萄糖模型组和Ipt组内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平的变化。结果0.01~10μmol.L-1的Ipt分别与内皮细胞孵育20 h,再给予浓度为25 mmol.L-1的D-葡萄糖孵育16 h后,与空白对照组相比,高糖模型组MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达升高;与高糖模型组相比,1~10μmol.L-1Ipt可抑制MCP-1、ICAM-1 mRNA表达上调,而对VCAM-1 mRNA表达上调无明显影响。结论高浓度D-葡萄糖可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加,Ipt对高糖诱发的内皮细胞损伤具有保护作用。     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞转化生长因子β1及细胞间粘附分子1表达的影响

目的研究脂联素(ADPN)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法以培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为3组:正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖,NG组),高糖组(30mmol/L葡萄糖,HG组),高糖+不同浓度的脂联素组(30mmol/L葡萄糖,2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μg/mlADPN)分别作用48h后,用ELISA法测定细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。结果作用48h后,高糖明显上调细胞内TGF-β1及ICAM-1表达。加入低浓度脂联素对于TGF-β1、ICAM-1表达影响不大,而随着脂联素浓度的升高,TGF-β1及ICAM-1的表达明显下降,与高糖组相比,浓度为10～20mg/L的脂联素组TGF-β1及ICAM-1的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论中等以上浓度的脂联素能下调TGF-β1及ICAM-1表达,提示脂联素可能通过阻抑TGF-β1及ICAM-1表达起到抗纤维化,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用。     

米诺环素对人脐静脉内皮细胞-单核细胞黏附的抑制作用及其机制研究

目的:研究米诺环素(MC)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞-单核细胞黏附的抑制作用及其机制。方法:通过酶消化法从人脐带中获得原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。将HUVECs细胞分为空白对照组、模型组和MC低、中、高剂量(1、10、100μmol/L)组,药物作用2 h后,除空白对照组外其余各组均加入10 ng/ml TNF-α诱导HUVECs与单核THP-1细胞的黏附,复制内皮细胞-单核细胞黏附模型。荧光显微镜观察黏附细胞数,荧光酶标仪测定其荧光强度;流式细胞仪检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达;Western blot法检测细胞核及细胞浆转录因子(NF)-κB p65蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组黏附细胞数及其荧光强度、ICAM-1表达、细胞核NF-κB p65蛋白表达均增加,细胞浆NF-κB p65蛋白表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,MC低、中、高剂量组黏附细胞数及其荧光强度、ICAM-1表达均降低;MC中、高剂量组细胞核NF-κB p65蛋白表达减弱,细胞浆NF-κB p65蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:MC能显著地减少TNF-α诱导的内皮细胞-单核细胞的黏附,其机制可能与降低HUVECs细胞表面ICAM-1的表达、抑制NF-κB p65蛋白的表达有关。     

高糖诱导HT-22小鼠海马神经元代谢记忆细胞模型的构建及影响

目的 体外构建高糖诱导HT-22小鼠海马神经元“代谢记忆”细胞模型,探究“代谢记忆”对HT-22细胞凋亡和组蛋白乙酰化的影响。方法 以高糖培养基(葡萄糖浓度为55 mmol/L)和常规糖培养基(葡萄糖浓度为25 mmol/L)培养HT-22细胞,分为常糖组(NG 4、6、8组,25 mmol/L葡萄糖分别培养4、6、8 d),高糖组(HG 4、6、8组,高糖培养4、6、8 d),代谢记忆组(HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4组,即高糖2 d转25 mmol/L葡萄糖培养2、4或6 d,高糖4 d转25 mmol/L葡萄糖培养2 d或4 d)。CCK-8法检测细胞活力变化,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,筛选出建立“代谢记忆”模型的最佳作用时间。后续将细胞分为NG4组、NG8组、HG4组、HG4NG4组和HG8组,光学显微镜观察各组细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测去乙酰化酶(HDAC)和组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性;Western blot检测组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、B淋巴细胞瘤-2(...     

熊果酸对妊娠期糖尿病期间高糖诱导的滋养层细胞损伤的改善作用及其机制探讨

目的 研究熊果酸对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响,并初步探讨可能的潜在机制。方法 将人HTR-8/SVneo滋养层细胞系分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、模型组(25 mmol/L葡萄糖)、低剂量组(25 mmol/L葡萄糖+1μmol/L熊果酸)、中剂量组(25 mmol/L葡萄糖+3μmol/L熊果酸)、高剂量组(25 mmol/L葡萄糖+5μmol/L熊果酸)。分别采用细胞计数试剂盒-8、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测和流式细胞术检测细胞活力、细胞毒性和凋亡。采用酶联免疫吸附试验和相应试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-1β、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。蛋白免疫印迹用于分析Toll-样受体4(TLR4)/髓系分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组细胞活力、Bcl-2蛋白表达,以及IL-10、SOD和CAT水平均显著降低,而LDH释放量、细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达及TNF-α、IL-1β和M...