白血病细胞WT1基因启动子区DNA甲基化研究

目的：研究白血病细胞WT1启动子区DNA甲基化与其表达的关系。方法：采用RT-PCR技术、硫化PCR结合限制性内切酶技术检测白血病细胞系及正常人外周血单个核细胞WT1基因的表达及其启动子区DNA甲基化水平。结果：正常人外周血单个核细胞及U937细胞不表达WT1基因，而HL-60、K562和KG1细胞高表达WT1基因，HL-60细胞WT1基因无甲基化。结论：WT1基因启动子区DNA甲基化不能抑制其表达，尚存在其他调节WT1基因表达的因素。     

急性白血病zo-1基因启动子区甲基化状态研究

本研究探讨健康人和急性白血病(AL)不同时期患者zo-1基因启动子区甲基化状态差异。采用硫化测序特异性PCR(BS-PCR)方法对白血病细胞系、AL患者及健康人骨髓标本进行zo-1基因启动子区甲基化状况检测。结果显示:在健康人骨髓中呈低甲基化状态(1.9%),初治、复发和完全缓解的AL患者骨髓中zo-1基因呈高甲基化状态,甲基化率分别为93.2%、66.9%及16.4%,明显高于健康人,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:与健康人相比,急性白血病患者骨髓细胞zo-1基因呈高甲基化状态,且AL不同时期的患者中zo-1基因都发生了不同程度的甲基化改变,对zo-1基因甲基化状态的分析有助于监测AL患者疾病的进展。     

卵巢上皮癌中DNA错配修复基因启动子区甲基化状态研究

目的探讨卵巢上皮癌中DNA错配修复基因（hMLH1、hMSH2）启动子区甲基化状态及其在卵巢癌发生发展中的作用。方法用甲基化特异性PCR（MSP）法检测20份正常卵巢组织，25份良性卵巢肿瘤，56份卵巢上皮癌中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态；同时检测5-氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR）处理前后卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中hMLH1、hMSH2甲基化改变；逆转录（RT）-PCR法检测5-Aza—CdR（1μm/L）处理前后卵巢癌细胞株中hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平。结果正常卵巢癌组织中均未见hMLH1、hMSH2启动子甲基化；良性卵巢肿瘤中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为4％（1／25）、8％（2／25）；卵巢上皮癌中hMLH1和hMSH2甲基化阳性率分别为30．4％（17／56）、51．8％（29／56）；且与肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。5-Aza—CdR处理卵巢癌细胞株后，可逆转hMLH1和hMSH2启动子区的甲基化，细胞株的hMLH1和hMSH2 mRNA表达均有不同程度的增加。结论DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2甲基化为卵巢癌发生发展中的早期基因改变，有可能成为卵巢癌早期诊断、评价疗效和判定预后的分子生物学指标。hMLH1和hMSH2甲基化与mRNA表达密切相关，是表达调节的重要方式之一，这种改变可被甲基化酶抑制剂所逆转。     

胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究

目的 探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4％(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P>0.05)。按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011)。脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3％(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动了未发生甲基化。11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022)。结论 RASSF1A基因启动了在胶质瘤中发生异常甲基化。尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调。推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制。     

造血系统肿瘤WT1基因启动子区域DNA甲基化及其调控的研究

目的 应用聚合酶链反应（PCR）的实验方法研究白血病细胞系中WT1基因启动了区域的DNA甲基化水平，及其与WT1基因表达的关系。方法 ①采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR（Methylation-spectific PCR，MSP）技术检测8226、HL-60、Jurkat、KG-1及Raji等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态；②以5-杂氮脱氧胞嘧啶（5-aza-CdR）对U937细胞系进行去甲基化处理，并观察WT1基因表达水平的改变。结果 ①HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高，而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系WT1表达水平则极低，同时检测到在8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存和WT1基因启动子区域DNA高甲基化；②经去甲基化处理后，U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者上升，同时伴随着WT1启动子区域DNA甲基化水平的下降和未甲基化水平的升高。结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。     

DNA甲基化对TIG1基因在急性白血病中表达的影响

本研究探讨急性白血病细胞中抑癌基因T1G1的表达及其甲基化状态。应用实时荧光定量PCR（real—timeQuantitativePCR,RT—QT—PCR）的方法,检测53例急性白血病（acuteleukemia,AL）患者及20例正常对照者（nom—alcontrols,NC）的TIG1表达情况,并通过甲基化特异性PCR（methylation—sepecificPCR,MS—PCR）检测TIGl基因的甲基化状态。应用去甲基化试剂处理KG-1a、U937和I（562细胞株,观察其基因转录水平和甲基化状态之间的关系。结果表明,TIG1mRNA在NC中高表达,而在AL患者中低表达;AL患者中TIG1的异常甲基化率高达75％（40／53例）,而在正常标本中不发生甲基化;在初治AL中,发生甲基化的患者TIGj的表达水平明显低于未甲基化的患者;Kg-1a、U937和K562细胞株TIG1基因启动子CpG岛均存在过甲基化,应用去甲基化试剂处理后,TIG1基因启动子CpG岛甲基化程度降低,T1G1的表达都得到了恢复,并且TIG1的表达随着5-Aza—CdR浓度增加而增高。结论：TIG1基因表达的减少与急性白血病的发病有关,而甲基化是导致TIG1基因转录沉默的重要机制之一。     

膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态的研究

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义。方法 收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织；采用甲基化特异聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10／30、1／30，二者差异有统计学意义（P〈0．叭）；hMLH1基因甲基化阳性率在Ta-T1期、T2-T3期膀胱癌中分别为7／19、3／11，二者差异无统计学意义（P〉0．05）；在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7／18、2／9、1／3，三者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化，但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性，提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。     

DNA甲基化与基因沉默及肿瘤

DNA甲基化在胚胎发育及肿瘤演变过程中都扮演了重要角色,相关方面的研究日益受到关注。现对近年来DNA甲基化的分子学基础及其与基因沉默和肿瘤关系的研究进行综述。     

重型β地中海贫血γ珠蛋白基因启动子区甲基化状态

本研究旨在通过对广西省重型β地中海贫血患者和正常人外周血中γ珠蛋白基因启动子区CpG岛的甲基化位点的确认和对各个CpG位点甲基化率在重型β地中海贫血患者与正常人之间的差异性分析,初步筛选出可能影响γ珠蛋白表达的主要甲基化位点。采用重亚硫酸盐测序法修饰,递降PCR扩增,最后对PCR产物进行DNA克隆测序,得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况,定量检测甲基化的确切位置与程度。结果表明:重型β地中海贫血患者与正常人γ珠蛋白基因启动子区存在4个CpG甲基化位点,在序列中分别位于28、122、231和234bp,均呈高度甲基化,其中122和231 bp位点甲基化率明显低于正常对照组,差异均有统计学意义。28和234 bp位点甲基化率与正常对照组均无显著性差异。结论:证实γ基因启动子区存在甲基化位点、明确位点位置且经定量分析证实无论地中海贫血患者还是正常人各个甲基化位点均呈高甲基化状态;初步筛选出影响γ珠蛋白表达的主要位点可能在122和231 bp,为后续通过调节γ珠蛋白的表达缓解重型β地中海贫血的临床症状、靶向基因治疗研究提供了实验依据。     

肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子的甲基化研究

目的：检测肾癌组织中伯特-霍格-杜贝（BHD）、Ras相关结构域家族（RASSF）1A、丝氨酸蛋白酶抑制剂（SPINT）2基因启动子的甲基化状态,探讨其在肾癌发病中的可能作用。方法：收集肾肿瘤组织标本24份,其中透明细胞癌19份、错构瘤2份、癌旁组织3份,应用甲基化特异性聚合酶链反应法分别检测其BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：19例透明细胞癌同时检出3种抑癌基因甲基化3例,2种抑癌基因甲基化9例,1种抑癌基因甲基化7例。2例错构瘤中检出1种抑癌基因甲基化1例,3例癌旁组织中检出2种抑癌基因甲基化1例。检出BHD基因甲基化9例,均为透明细胞癌。检出RASSF1A基因甲基化8例,其中透明细胞癌7例,癌旁组织1例。检出SPINT2基因甲基化20例,其中透明细胞癌18例,错构瘤1例,癌旁组织1例。结论：肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区存在甲基化状态,抑癌基因甲基化可能在肾癌的发病机制中起重要作用。     

急性白血病Id4基因启动子区甲基化状态研究

本研究探讨正常人和不同疾病状态急性白血病（AL）患者Id4基因启动子区甲基化状态差异。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）对正常人和AL患者骨髓进行Id4基因启动子区甲基化状况检测。结果表明：Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态，初治AML和ALL患者中Id4基因甲基化比例分别为84％和86％。8例复发难治的AL患者中Id4基因全部甲基化，14例Id4基因甲基化的完全缓解ALL患者中有8例在12个月内复发，而9例Id4基因非甲基化的完全缓解ALL患者中12月内复发仅1例；Id4基因呈甲基化状态的完全缓解的AML患者中12个月内复发率为62．5％，而在非甲基化的患者中12个月内复发率仅为10％，两者差异有显著性意义。完全缓解的ALL患者甲基化比例为64．3％，而完全缓解的AML患者甲基化比例为28．6％，两者差异有显著性意义。39例初治AL中。有33例Id4基因呈甲基化状态，8例复发难治的AL患者的Id4基因均呈甲基化状态，58例完全缓解的AL中。有24例Id4基因呈甲基化状态。结论：与正常人不同，AL患者中Id4基因都发生了不同程度的甲基化改变，缓解状态患者的甲基化比例低于非缓解状态患者，Id4基因甲基化模式的改变与AL的发生密切相关。     

骨髓增生异常综合征患者血浆DNA中FHIT基因启动子区甲基化状态及地西他滨的去甲基化作用

本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者血浆DNA中FHIT基因启动子区域甲基化状况及地西他滨对其甲基化的影响。采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测1例初治的MDS患者、3例MDS转化而来的AML患者在地西他滨序贯半量CAG方案化疗前后血浆DNA中FHIT基因启动子区域CPG岛甲基化情况,并分析其临床疗效。结果表明,3例患者治疗前有FHIT基因甲基化。治疗1个疗程后其中2例患者FHIT基因甲基化得到逆转,4例患者中有2例获得临床缓解,2例无效。结论:MDS的发生可能与FHIT基因甲基化相关,地西他滨对MDS患者血浆DNA中FHIT基因高甲基化具有明显的去甲基化作用。血浆DNA的FHIT基因甲基化检测可能成为MDS辅助诊断和预后判断的分子标记。     

DNA启动子甲基化与白血病的关系

甲基化修饰是哺乳动物DNA的一种正常自然修饰方式，在基因表达的调控、基因结构的稳定等方面有重要作用。异常甲基化，尤其是启动子高甲基化在白血病的发生发展过程中起重要作用。甲基化研究可用于抑癌基因的筛选、微小残留病灶的检测及预后判断，去甲基化治疗已成为白血病治疗的又一重要途径。本文就近年来白血病异常甲基化在白血病机制研究、诊断及治疗中的应用等方面的研究进展作一综述。     

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS—PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示：白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论：甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值。     

CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病的相关性分析

目的研究CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病(AML)发生的相关性。方法选取180例AML患者骨髓标本及24例健康供者骨髓标本,通过甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)进行CTNNA1基因启动子区异常甲基化阳性率进行检测,提取基因组DNA,设计硫化测序PCR(BS-PCR)引物及甲基化特异性PCR(MS-PCR)引物,进行PCR扩增及测序分析。结果 5例健康者标本及5例AML患者标本DNA经硫化且BS-PCR测序分析,其健康者标本甲基化率分别为1.5%、1.0%、1.0%、1.5%、1.0%,而AML患者CTNNA1甲基化率分别为92.0%、78.5%、86.0%、56.0%、90.0%,远远高于健康供者。MS-PCR分析结果显示,CTNNA1基因在24例健康人中呈完全非甲基化状态,在180例AML患者中其甲基化阳性率为37.2%(P0.05)。结论 CTNNA1基因启动子区异常甲基化可能参与AML的发生,为疾病的早期监测提供分子理论依据。     

乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:对乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因沉默机制进行初步探讨.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)和直接测序法检测40例乳腺癌、癌旁组织及10例正常乳腺组织中TRβ1基因启动子甲基化状态;分析其与临床病理特征间的关系.结果:乳腺癌及癌旁组织中TRβ1 基因启动子甲基化率分别为80.0%、72.5%,而正常乳腺组织仅10%;直接测序结果显示至少3个CG位点有甲基化改变.TRβ1基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、临床分期不相关.结论:甲基化可能是乳腺癌中TRβ1基因表达沉默的重要机制之一,在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

结直肠癌患者SorCS1基因启动子甲基化检测的临床价值

目的 探讨结直肠癌患者SorCS1基因启动子甲基化检测的临床价值。方法 收集17例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,采用MassARRAY平台检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织相关基因启动子甲基化水平,筛选出癌组织与癌旁组织基因启动子甲基化存在差异的基因,并与肿瘤基因图谱计划（TCGA）数据库进行比对。同时检测SEPT9基因甲基化水平。用癌组织基因启动子甲基化检测值与癌旁组织基因启动子甲基化检测值的差值（Δ）表示结直肠癌患者癌组织基因启动子甲基化水平相对于癌旁组织的差异。结果 共筛选出2个基因（SorCS1、CASR）。结直肠癌患者癌组织SorCS1、CASR、SEPT9基因启动子甲基化水平均显著高于癌旁组织（P<0.001）。与TCGA数据库的比对结果显示,膀胱尿路上皮癌、宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌、多形性胶质母细胞瘤、直肠腺癌、胃腺癌患者的SorCS1基因相对表达量均低于正常对照者（P<0.05）,结肠癌、直肠癌、肺腺癌患者SorCS1基因启动子甲基化水平明显高于正常对照者（P<0.05）;结直肠癌患者与正常对照者之间CASR基因相对表达量差异无统计学意义（P>0...     

恶性血液病细胞株中IEX-1基因启动子区CpG岛甲基化状态的初探

本研究探讨基因IEX-1启动子区CpG岛甲基化状态的改变及其与恶性血液病发生的相关性.应用MSP的方法检测9种恶性血液病细胞系中IEX-1基因启动子区CpG岛甲基化状态,并把经M.sssI酶处理过的正常人外周血单个核细胞中IEX-1 CpG岛甲基化状态作为阳性对照,把正常人外周血单个核细胞中IEX-1 CpG岛甲基化状态作为阴性对照.结果显示:在NB4、Molt4.、Raji细胞系中IEX-1基因启动子区CpG岛呈高甲基化状态;在CA46、CEM、U937、K562、HL-60、Jurkat细胞系中IEX-1基因启动子区CpG岛呈部分甲基化状态;在正常人外周血单个核细胞中IEX-1基因启动子区CpG岛呈非甲基化状态;经M.sssI酶处理过的正常人外周血单个核细胞中IEX-1基因启动子CpG岛呈高甲基化状态.结论:IEX-1基因启动子区CpG岛甲基化状态的改变与恶性血液病有一定的相关性.     

精神分裂症易感基因DNA甲基化修饰的研究进展

遗传因素和环境因素共同作用于精神分裂症的发生。环境因素介助于表观遗传学机制修饰遗传因素,继而影响疾病的发生和发展。以往的遗传学研究已经发现了多个精神分裂症易感基因,本文将对这些易感基因的DNA甲基化修饰在精神分裂症发生和发展中的作用进行综述。     

DNA启动子甲基化与白血病的关系

甲基化修饰是哺乳动物DNA的一种正常自然修饰方式,在基因表达的调控、基因结构的稳定等方面有重要作用。异常甲基化,尤其是启动子高甲基化在白血病的发生发展过程中起重要作用。甲基化研究可用于抑癌基因的筛选、微小残留病灶的检测及预后判断,去甲基化治疗已成为白血病治疗的又一重要途径。本文就近年来白血病异常甲基化在白血病机制研究、诊断及治疗中的应用等方面的研究进展作一综述。