肺癌中Cyr61的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨Cyr61在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达,以及其对NSCLC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法收集63例NSCLC组织及对应癌旁组织,采用免疫组化法检测组织中Cyr61的表达,分析Cyr61表达与NSCLC临床病理特征的关系。体外培养A549、NCI-H460细胞,转染Cyr61 mimics分为空白对照组、阴性转染组、Cyr61转染组,MTT法检测细胞增殖情况;Transwell小室检测细胞侵袭、迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测转染后细胞中Cyr61、BCL-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果与癌旁组织相比,NSCLC组织中Cyr61蛋白阳性率降低,差异有统计学意义(P0.05)。Cyr61蛋白表达与吸烟、淋巴结转移、临床分期有关(P0.05)。转染Cyr61 mimics后,Cyr61蛋白表达、细胞迁移、侵袭数量、BCL-2蛋白表达降低(P0.05),细胞抑制率、凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 Cyr61在肺癌中呈低表达,体外过表达后能够抑制细胞增殖、迁移,诱导凋亡,其机制可能与Caspase-3凋亡通路激活有关。     

CYB5A对胰腺癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探究细胞色素b5(CYB5A)对胰腺癌细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞株AsPC-1,分别转染SiRNA和质粒对CYB5A进行抑制和过表达,CCK8法检测AsPC-1细胞增殖活性,Western blot与荧光定量PCR(RT-PCR)分析半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、增殖细胞核抗原(PCNA)与B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)等增殖相关蛋白的表达情况,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果抑制CYB5A表达可导致AsPC-1细胞caspase-3的mRNA水平及蛋白水平增高(P0.05),PCNA及Bcl-2的mRNA水平及蛋白水平降低(P0.05),并可进一步降低细胞增殖率(P0.05),阻滞AsPC-1细胞于G2/M期(P0.05);诱导CYB5A则可使AsPC-1细胞高表达PCNA与Bcl-2的mRNA水平及蛋白水平(P0.05),而低表达caspase-3的mRNA水平及蛋白水平(P0.05),并进一步促进AsPC-1细胞增殖(P0.05),降低G2/M期细胞比例(P0.05)。结论 CYB5A可通过调控胰腺癌细胞AsPC-1增殖相关蛋白的表达,降低G2/M期细胞比例,进而促进胰腺癌细胞的增殖。     

RNA干扰环指蛋白2基因抑制胰腺癌细胞系PANC-1增殖和迁移

目的研究沉默环指蛋白2(RNF2)基因对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖、迁移、周期和凋亡的影响及可能机制。方法用siRNA-RNF2转染PANC-1细胞沉默RNF2表达,同时设立转染无义序列(siRNA-NC)的空转染组及不进行任何处理的空白对照组(mock)。荧光定量PCR检测RNF2 mRNA表达;Western blot检测RNF2和p53表达;MTS实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;流式细胞计量术检测细胞转染率、凋亡率和细胞周期。结果相比正常胰腺导管上皮细胞,RNF2在胰腺癌细胞系中高表达(P<0.05)。转染siRNA-RNF2的PANC-1细胞与阴性对照组比较,RNF2 mRNA及蛋白表达下调;细胞增殖被抑制(P<0.05);细胞迁移能力下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05);G_0/G_1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例则降低(P<0.05)。此外,转染siRNA-RNF2显著下调PANC-1细胞中p53蛋白的表达。结论 siRNA-RNF2特异性下调胰腺癌细胞RNF2表达,显著抑制细胞增殖和迁移,结果提示RNF2可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

下调长链非编码RNA PVT1表达对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡、侵袭及转移的影响

目的研究下调长链非编码RNA PVT1的表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。方法体外转染PVT1干扰序列si PVT1-1和si PVT1-2降低胰腺癌细胞系Bx PC-3 PVT1表达,同时转染阴性对照si PVT1-NC作为对照组。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移;qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin和PVT1 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3)和上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin)表达。结果下调胰腺癌细胞Bx PC-3 PVT1表达能明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和减少细胞侵袭转移数目(P0.05);E-cadherin蛋白和分子水平升高,N-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白和分子水平降低(P0.05);Bax和caspase-3蛋白水平升高,而Bcl-2蛋白水平降低(P0.05)。结论下调长链非编码RNA PVT1表达能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移能力,促进胰腺癌细胞凋亡,且能够逆转胰腺癌细胞上皮间质转化。     

Sox5促进胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化

目的:探讨Sox5对胰腺癌细胞迁移侵袭和上皮间质化的影响。方法:人正常胰腺细胞HPDE6-C7(HPDE6-C7组)、胰腺癌细胞PANC-1(PANC-1组)和AsPC-1(AsPC-1组)正常培养至对数生长期,采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中Sox5mRNA和蛋白水平。将shSox5、shControl、pcDNA 3.1-Sox5和载体pcDNA 3.1以脂质体法转染胰腺癌细胞PANC-1,分别标记为shSox5组、shControl组、pcDNA 3.1-Sox5组和Scrambled组,采用qRT-PCR法检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA表达;Western blot检测各组细胞中Sox5、E-cadherin、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的蛋白表达;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭。结果:与HPDE6-C7组相比,PANC-1组和AsPC-1组中Sox5mRNA和蛋白水平均升高(P0.01);与shControl组比较,shSox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著降低(P0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著升高(P0.01);与Scrambled组比较,pcDNA-3.1-Sox5组Sox5、N-cadherin、Vimetin、Snail和Twist1的mRNA和蛋白以及细胞迁移和侵袭水平均显著升高(P0.01),E-cadherin mRNA和蛋白水平均显著降低(P0.01)。结论:Sox5可促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,将为胰腺癌的靶点治疗提供新靶标。     

剪接因子MBNL3对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨MBNL3在胰腺癌细胞中的表达及对其恶性生物学行为的影响。方法收集自2017年至2020年北京协和医院50例胰腺癌石蜡组织样本,采用免疫组织化学法检测MBNL3蛋白表达。胰腺癌细胞经过MBNL3表达或敲低后,采用实时无标记细胞检测技术、平板集落形成技术和Transwell小室法验证MBNL3对细胞增殖、细胞集落形成、迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot检测胰腺癌细胞系中MBNL3表达。结果 MBNL3在胰腺癌组织着色的总体评分为5.0±2.7,显著高于其所对应癌旁组织的总体评分(2.1±0.6)(P0.05)。细胞增殖实验显示,MBNL3敲低组增殖曲线低于对照组,MBNL3过表达组增殖曲线高于对照组。平板集落形成实验显示,MBNL3敲低组集落形成个数显著少于对照组(P0.05),MBNL3过表达组集落形成个数显著多于对照组(P0.05)。Transwell小室法显示,MBNL3敲低组细胞迁移及侵袭能力显著低于对照组(P0.05),MBNL3过表达组迁移及侵袭能力显著高于对照组(P0.05)。结论 MBNL3在胰腺癌中高表达,有促进其增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为的作用。     

p53正向凋亡调节因子重组腺病毒载体的构建及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的 构建p53正向凋亡调节因子重组腺病毒(Ad-PUMA)载体,探讨Ad-PUMA对人体内外胰腺癌的治疗作用.方法 利用Ad-Easy系统在大肠杆菌同源重组,构建Ad-PUMA腺病毒载体,在293细胞内成功包装并鉴定后,以Ad-PUMA转染人转移胰腺癌细胞株AsPC-1.用MTT法检测转染前后存活细胞,观察Ad-PUMA的体外抑瘤作用;用Western blot方法鉴定转染前后AsPC-1细胞内PUMA蛋白表达.通过裸鼠皮下胰腺癌移植瘤模型观察Ad-PUMA的体内抑瘤效果;Westem blot方法鉴定Ad-PUMA转染后肿瘤组织内PUMA蛋白表达,TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling)法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 在体外,随着Ad-PUMA感染剂量增加,细胞内PUMA蛋白表达逐渐增加,细胞存活率逐渐下降;在体内,Ad-PUMA可显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,其抑瘤率为44.2%,瘤体组织PUMA表达水平及凋亡指数明显升高.结论 PUMA抑制体内外胰腺癌细胞增殖,可能是一种潜在的肿瘤生物治疗手段.     

过表达Rab27B体外促进人胃癌细胞系MKN-45凋亡并抑制其增殖

目的探讨Rab27B在胃癌细胞系MKN-45增殖和凋亡中的作用。方法构建Lv-Rab27B-EGFP表达载体并转染细胞作为实验组,以Lv-EGFP空载体转染细胞作为对照组,正常MKN-45作为空白组,CCK8测定细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的周期和凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase3的表达。结果与阴性对照组和空白组细胞比较,实验组细胞的增殖受到抑制(P0.05),细胞周期显示有丝分裂受阻于G1期,出现凋亡增多(P0.05)。与对照组比较,实验组细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量显著下降(P0.05),caspase3蛋白也明显升高(P0.05)。结论 Rab27B过表达可以调节细胞周期而抑制人胃癌细胞系MKN-45增殖,要通过上调Bax和caspase3蛋白,以及下调Bcl-2蛋白表达来促进细胞凋亡。     

慢病毒介导的SEMA3G过表达对人胰腺癌细胞系PANC-1的作用

目的通过体外实验探讨过表达SEMA3G对人胰腺癌细胞PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将携带SEMA3G的慢病毒载体转染人胰腺癌PANC-1细胞系,利用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白质水平。CCK-8法检测细胞增殖,transwell实验检测细胞侵袭和细胞划痕试验检测细胞的迁移。结果成功建立稳定转染SEMA3G胰腺癌PANC-1细胞系。SEMA3G病毒感染组与空白对照组和阴性对照组相比细胞的增殖能力显著降低(P0.05),SEMA3G病毒感染组的细胞侵袭和迁移能力明显低于两组对照组(P0.05)。结论 SEMA3G慢病毒载体能有效过表达人胰腺癌PANC-1细胞中内源性SEMA3G蛋白,进而抑制细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-101在胰腺癌组织中的表达水平及对癌细胞侵袭能力的影响

目的:检测分析胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中微小RNA(miRNA)的表达情况及对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:收集临床患者胰腺癌组织、癌旁组织标本及4种典藏胰腺癌细胞株,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有样本中miR-101的表达水平;采用Transwell侵袭试验检测miR-101对胰腺癌细胞株PANC-1和MIA PaCa-2的侵袭能力,同时采用Western Blotting检测转染miR-101的模拟物(mimic)后胰腺癌细胞株MIA PaCa-2的Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated coiled coil forming protein kinas,ROCK2)蛋白表达水平。结果:4种胰腺癌细胞株中miR-101表达量较正常胰腺细胞明显降低(P0.05),胰腺癌组织中miR-101表达量也明显低于癌旁组织(P0.05)。转染组miR-101的胰腺癌细胞株PANC-1和MIA PaCa-2的侵袭能力较未转染组明显减弱(P0.05),转染组胰腺癌细胞株MIA PaCa-2中ROCK2蛋白表达也显著低于未转染组(P0.05)。结论:胰腺癌组织和胰腺癌细胞株均低表达miR-101,可能靶向抑制ROCK2蛋白,减弱胰腺癌细胞的侵袭能力。     

敲减FGFR1基因表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物学特性的影响

目的:研究敲减成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因的表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)活力、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:经转染FGFR1小干扰RNA(si-FGFR1)下调FGFR1表达,研究FGFR1对HemECs生物学特性的影响,以CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡水平, Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白水平。结果:转染si-FGFR1进入HemECs能够显著抑制细胞的活力(P0.05),促进其凋亡(P0.05),降低细胞的侵袭和迁移能力(P0.05);Western blot结果显示,下调细胞中FGFR1基因的表达可降低PI3K和p-AKT的蛋白水平(P0.05),但对AKT蛋白水平无显著影响。结论:敲减HemECs细胞内FGFR1的表达可通过影响PI3K/AKT信号通路调节婴幼儿血管瘤内皮细胞的生物学特性。     

原钙黏蛋白10(PCDH10)抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖以及侵袭和迁移

目的探讨原钙黏蛋白10(PCDH10)在胰腺癌细胞株中的表达情况以及生物学功能。方法利用反转录PCR检测PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1、BXPC-3胰腺癌细胞以及HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞的表达情况。将质粒pc DNA3.1-PCDH10与质粒pc DNA3.1-vector通过脂质体转染至BXPC-3人胰腺癌细胞,转染后通过反转录PCR检测BXPC-3细胞中PCDH10 mRNA的水平、Western blot法检测其蛋白水平;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell~(TM)侵袭和迁移实验、划痕实验检测BXPC-3细胞的侵袭和迁移。结果与正常胰腺导管上皮细胞相比较,PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、BXPC-3胰腺癌细胞中表达明显下调。反转录PCR及Western blot法检测结果表明,转染pc DNA3.1-PCDH10的BXPC-3实验组细胞PCDH10表达明显高于转染pc DNA3.1-vector的对照组细胞。与对照组相比,过表达PCDH10后,BXPC-3细胞的增殖速度明显降低、克隆形成数明显减少;细胞凋亡率明显增加,细胞的侵袭、迁移能力明显降低。结论 PCDH10在胰腺癌细胞中表达下调,过表达PCDH10能够明显抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并且诱导BXPC-3细胞凋亡。     

长链非编码RNA UCA1对胰腺癌细胞系侵袭转移的影响

目的探讨尿路上皮癌相关1(UCA1)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞侵袭转移的影响。方法用荧光定量PCR检测11例胰腺癌组织和配对的癌旁组织及5种胰腺癌细胞系中UCA1的表达,通过RNA干扰技术降低胰腺癌细胞系Bx PC-3的UCA1水平,用Transwell侵袭实验和划痕实验观察Bx PC-3细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白水平。结果胰腺癌组织的UCA1水平高于相应的癌旁组织(P0.05),UCA1差异性表达于5种胰腺癌细胞系;干扰UCA1后,Bx PC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均降低(P0.01),侵袭能力和迁移能力明显减弱(P0.01)。结论 UCA1在胰腺癌中高表达,下调UCA1通过降低MMP-2和MMP-9的表达减弱胰腺癌细胞系Bx PC-3的体外侵袭转移能力。     

下调NCAPG表达对Burkitt淋巴瘤Raji细胞的影响及其机制

目的 探讨下调Burkitt淋巴瘤Raji细胞NCAPG表达对细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 应用shR-NCAPG慢病毒载体转染Raji细胞,qRT-PCR及Western blot验证细胞中NCAPG表达是否下调。应用CCK-8方法检测shR-NCAPG对Raji细胞增殖的影响,流式细胞术Annexin V-PE/7AAD双染检测细胞凋亡。Western blot法检测shR-NCAPG转染前后Bcl-2和Bax的表达变化。结果 shR-NCAPG转染Raji细胞后,NCAPG在基因及蛋白水平表达减少,明显抑制Raji细胞的增殖,增加细胞早期凋亡比例,抑制Bcl-2表达,上调Bax表达。结论 下调NCAPG表达抑制Burkitt淋巴瘤细胞Raji增殖诱导其凋亡,与Bcl-2家族蛋白相关。     

敲低dachshund同源物1(DACH1)促进Capan-1胰腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的探讨抑制dachshund同源物1(DACH1)的表达对Capan-1胰腺癌细胞周期、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法设计合成针对人DACH1基因的4条小干扰RNA(si RNA),退火形成双链短发夹RNA(shRNA),插入p Genesil-1载体中,构建成重组质粒,进行酶切及测序鉴定,通过脂质体介导转染入Capan-1细胞,利用荧光显微镜、反转录PCR和Western blot法检测其转染表达效率。藻红蛋白标记的膜联蛋白Ⅴ和7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7AAD)双标记结合流式细胞术检测Capan-1细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM侵袭、迁移实验检测Capan-1细胞侵袭迁移能力。结果成功构建并筛选出干扰质粒pshRNA-DACH1,将其转染Capan-1胰腺癌细胞后,成功下调Capan-1细胞DACH1水平,同时细胞凋亡明显增加,而对细胞周期无明显影响。下调DACH1表达后细胞侵袭和迁移能力均降低。结论敲低DACH1基因表达能显著促进胰腺癌细胞Capan-1凋亡,抑制其侵袭及迁移。     

下调CD59 对急性T 系白血病细胞株Jurkat 凋亡相关分子的影响

目的:探讨下调CD59 对急性T 系白血病细胞株Jurkat 凋亡相关分子的影响。方法:运用RNAi 慢病毒为载体下调急性T 系白血病Jurkat 细胞株CD59 的表达;激光共聚焦观察转染效率及CD59 分子的定位;Real-time-PCR、Western blot 筛选下调效果最好的一组细胞,用其做后续的分子生物学水平的实验; Western blot 检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin 蛋白表达量的变化;ELISA 检测各组的细胞培养上清中IL-3、TNF-α的表达。结果:激光共聚焦观察到转染各组的转染效率在90%以上,CD59 分子主要位于细胞膜;Real-time-PCR 筛选得出下调A 组的转染效果最好; Western blot 结果显示下调A 组的CD59 蛋白的表达量减少最明显,将RNAi-CD59-A 定义为RNAi-CD59 作为实验组进行后续实验;实验组能增强Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制Bcl-2、Survivin 蛋白的表达(P<0.05);ELISA 结果显示下调组IL-3 表达水平降低(P<0.05), TNF-α的表达水平升高(P<0.05)。结论:下调D59 基因表达可使急性T 系白血病细胞株Jurkat 的促凋亡分子表达增高,促增殖分子表达降低。     

基因枪转导K-RAS反义基因对胰腺癌细胞(K-RAS P21)蛋白表达的影响

目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RAS P21蛋白的影响。方法利用基因枪技术,将反义基因转导入宿主细胞,通过免疫细胞化学和Western blot方法,观察K-RAS突变特异性反义基因转导后AsPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RAS P21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后,AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达明显降低;BxPC-3胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后,可用于胰腺癌的治疗。     

敲减G蛋白偶联受体75表达抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的:探讨G蛋白偶联受体75(GPR75)对20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法:慢病毒转染敲减H9c2心肌细胞GPR75基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-qPCR法检测GPR75以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的mRNA表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测GPR75、Bcl-2、Bax及细胞色素C(CytC)蛋白表达;发色底物法检测caspase-3的活性。结果:H9c2心肌细胞在mRNA及蛋白水平均表达GPR75,敲减GPR75抑制了20-HETE诱导的细胞凋亡(P<0.05);同时,敲减GPR75阻断了20-HETE诱导的Bax和CytC表达上调以及caspase-3活性增高作用(P<0.05),逆转了20-HETE诱导的Bcl-2表达下调和线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论:20-HETE通过GPR75介导引起线粒体功能紊乱,诱导H9c2心肌细胞凋亡。     

ATG5敲低后抑制人肺癌细胞H1299自噬并增强南蛇藤素诱导的细胞凋亡

目的构建自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)低表达肺癌细胞株,观察肺癌细胞自噬活性,检测南蛇藤素对肺癌细胞凋亡的影响。方法用ATG5 shRNA技术构建ATG5敲低的人肺癌H1299细胞株作为ATG5敲低组,未敲低ATG5的H1299细胞作为对照组;荧光定量PCR和Western blot检测肺癌细胞中ATG5的表达和自噬标志物微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3)及死骨片蛋白1的(sequestosome 1,P62)表达,并转染红色荧光标记的LC3质粒观察LC3斑点聚集情况;经南蛇藤素刺激后,以流式细胞术检测细胞凋亡,最后使用Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等蛋白的表达。结果慢病毒感染组ATG5较对照组mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);ATG5敲低后LC3-Ⅱ水平下降,P62水平上升,并且转染后RFP-LC3斑点聚集减少(P0.05)。相比对照组,南蛇藤素明显促进ATG5敲低细胞凋亡(P0.01);ATG5敲低组中促凋亡分子Bax、cleaved caspase-3表达比对照组明显增加(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P0.05)。结论 ATG5敲低抑制肺癌细胞自噬后,南蛇藤素能够明显增强人肺癌细胞的凋亡,提示抑制肺癌细胞自噬可能为针对性处理肺癌细胞耐药提供新的思路。     

Opa相互作用蛋白5在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响

目的探索Opa相互作用蛋白5(OIP5)在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响。方法通过数据库分析OIP5在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达;用实时定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测人胰腺癌细胞系MIAPaCa-2、PANC-1、KP-3、BxPC-3细胞中OIP5 mRNA和蛋白表达;构建OIP5基因沉默质粒的慢病毒(pGCSIL-shOIP5)和对照质粒慢病毒(pGCSIL-shCtrl),分别感染PANC-1细胞,分为OIP5基因沉默组和shCtrl对照组,5 d后采用RT-qPCR和Western blot测定慢病毒敲低效率,流式细胞计量术检测细胞凋亡;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组连续5 d进行MTT检测和细胞计数;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组孵育10 d形成集落,Giemsa染色分别集落总数。结果胰腺癌中OIP5 mRNA表达显著高于正常胰腺组织(P<0.05),OIP5高表达患者的总存活率显著低于OIP5低表达患者(P<0.05),且其无病生存率也显著降低(P<0.05);OIP5在MIAPaCa-2、PANC-1和KP-3中表达较高,而在BxPC-3细胞系中的表达较低;MTT检测结果显示OIP5沉默在第4和第5天显著降低了PANC-1细胞的增殖速率(P<0.01);OIP5沉默后细胞集落数(平均为9个)显著低于shCtrl对照组中的数量(平均为40个)(P<0.01);OIP5沉默后PANC-1细胞凋亡比例为8.3%显著高于shCtrl的4.5%(P<0.01)。结论OIP5在胰腺癌细胞系中异常高表达,OIP5基因可调控胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡以及集落形成,提示OIP5可能在胰腺癌发病机制中作为癌基因发挥作用,从而为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的生物标志物。