Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义.方法 采用实时定量PCR(Q-PCR)和Western blotting方法检测135例新鲜前列腺癌病理组织标本及临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes1 mRNA和蛋白表达情况.同时采用免疫组化方法检测135例前列腺癌病理组织标本与临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes 1蛋白表达情况,并分析各蛋白表达与前列腺癌患者临床病理因素的关系.结果 135例新鲜前列腺癌病理组织标本Q-PCR及Western blotting结果表明,与临近非肿瘤组织相比,前列腺癌组织中Notch 1、Notch 3及Hes 1 mRNA和蛋白表达均上调(P均＜0.05).免疫组化的结果表明,59.26％(80/135)前列腺癌样本为Notch 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％ (24/135)(P＜0.05);65.19％(88/135)前列腺癌样本为Notch 3阳性,高于临近非肿瘤组织22.22％(30/135) (P＜ 0.05);62.22％ (84/135)前列腺癌样本为Hes 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％(24/135)(P＜0.05).统计分析证实Notch 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Notch 3蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Hes 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤大小密切相关(x2=6.781,P=0.012).结论 Notch信号通路相关蛋白Notch 1、Notch 3及Hes 1在前列腺癌患者组织中表达升高,Notch信号通路的激活可能在前列腺癌发生、发展过程中起重要作用.     

Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表达,用qRT-PCR检测Notch下游靶分子Hes1的表达,并用SPSS17.0软件分析Notch1的表达水平与临床病理特征的相关性。结果免疫组织化学染色,Western blot法和qRT-PCR结果均显示Notch1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,qRT-PCR结果显示Hes1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,且Notch1的表达与肿瘤Fuhrman分级和AJCC分期呈负相关。结论 Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌的发生发展过程中可能具有肿瘤抑制基因的作用。     

Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响

目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的增殖与分化功能。方法:体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化。结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P0.05),促进AECⅡ从S期进入G_2/M期,增殖增加而分化减少(P0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),AECⅡ被阻滞于G_0/G_1期,增殖减少而分化增加(P0.05)。结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化。     

连续血液净化对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织及Notch1信号表达的影响

目的：探讨连续血液净化对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织、Notch 信号表达的影响。方法：将大 鼠随机分为3 组,空白组仅作开腹处理,未建立SAP模型,SAP组和干预组均建立SAP模型,建模后干预组进行 12 h 连续连续血液净化,其余大鼠不进行连续血液净化。H-E 染色检测胰腺形态,并作病理评分,TUNEL 检测 胰腺细胞凋亡率,免疫印迹和PCR检测Notch 等信号蛋白和mRNA表达。结果：建模后12 h,SAP组病理评分与 空白组比较差异有统计学意义,干预组病理评分低于SAP组。SAP组胰腺细胞凋亡率与空白组比较升高明显,与 SAP组比较,干预组凋亡率降低,组间比较差异有统计学意义。3 组大鼠胰腺组织Notch1、Hes1、Bcl-2 及Bax 表达比较差异有统计学意义。SAP组胰腺组织中Notch1、Hes1、Bcl-2 蛋白及mRNA表达高于空白组,Bax 蛋白 及mRNA表达低于空白组;干预组胰腺组织中Notch1、Hes1、Bcl-2 蛋白及mRNA表达与SPA 组比较降低明显, Bax 蛋白及mRNA表达与SPA 组比较有所升高。结论：重症急性胰腺炎采用连续血液净化治疗后胰腺细胞凋亡减 少,胰腺组织病理损伤改善,其机制可能与抑制Notch1、Hes1、Bcl-2 表达,激活Bax 活性相关。     

Notch信号通路蛋白在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及意义

目的观察糖尿病肾病肾组织中Notch信号通路的表达情况,探讨其与糖尿病肾病肾脏损害的关系。方法收集10例手术切除的远离肿瘤的瘤旁肾组织及34例糖尿病肾病肾穿刺组织,免疫组化检测Jagged1、Notch1、NICD1和Hes1蛋白表达情况。结果 Jagged1、Notch1、NICD1和Hes1蛋白在糖尿病肾病肾组织中高表达,并与24小时尿蛋白成正相关,而与肾小球滤过率成负相关。结论 Notch信号通路在糖尿病肾病肾组织中激活,与糖尿病肾病肾脏损伤有关。     

人Delta-like1蛋白的表达及其对动员外周血CD34+细胞的扩增作用

构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用.克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性.磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用.结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白.配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路.此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用.我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础.     

下调Notch1基因促进人肝癌细胞系HepG2自噬

目的 探讨Notch1基因对人肝癌细胞系HepG2的增殖、凋亡、自噬及Akt/mTOR信号通路的影响.方法 选择于新乡医学院第三附属医院行肝癌手术治疗患者的肝癌组织32例,荧光定量PCR检测Notch1 mRNA的表达.构建Notch1 siRNA真核表达载体,经脂质体转染入HepG2细胞中,应用RT-qPCR及Wes...     

下调Notch1信号抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖能力

 目的 探讨Notch1基因与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖能力的关系。方法 应用?-分泌酶抑制剂DAPT或表达Notch1-shRNA慢病毒载体阻断SH-SY5Y细胞Notch1信号的活化,RT-PCR和Western blot法行Notch1及Hes1表达水平的检测,MTT法和裸鼠体内种植检测瘤细胞体内外增殖能力的变化。结果 DAPT处理和表达Notch1-shRNA慢病毒载体转染均能减少细胞内NICD和Hes1表达,其细胞体外增殖能力受到明显抑制(P<0.01),Notch1RNAi细胞体内种植瘤重为0.20±0.13g,明显轻于对照组的0.89±0.58g（P<0.01)。结论 Notch1信号的活化与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力密切相关,有望成为神经母细胞瘤基因治疗的潜在靶点。     

NICD/Hes1影响心肌梗死后小鼠缺血心肌的血管新生

背景：心肌缺血是心肌梗死后心功能受损的主要原因之一,Notch通路参与血管新生过程,但其下游分子Notch受体胞内部分(Notch intracellular domain,NICD)/Hes1在心肌梗死后缺血心肌血管新生中发挥何种作用,研究尚少。目的：借助Notch γ分泌酶抑制剂RO4929097,探讨NICD/Hes1对心肌梗死后小鼠心功能及缺血心肌血管新生的影响。方法：按随机数字表法将C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组和RO4929097组,每组10只,后2组C57BL/6小鼠通过结扎左前降支冠状动脉建立心肌梗死模型,RO4929097组小鼠术后第2天按10 mg/(kg·d)每天灌胃1次,假手术组和模型组小鼠给予等体积生理盐水,灌胃20 d。第21天超声检测小鼠左室射血分数,马松染色观察心肌梗死面积及病理组织学变化,免疫荧光法检测缺血心肌CD31水平,酶联免疫吸附法检测血清血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平,免疫蛋白印迹技术检测心肌组织缺氧诱导因子1α、心肌营养素1及NICD、Hes1蛋白表达量。结果与结论：(1)模型组小鼠左室射血分数较假手术组显著降低(P &...     

Notch1信号抑制对成骨肉瘤细胞化疗药物敏感性的影响

目的研究抑制Notch1信号对成骨肉瘤细胞化疗药物敏感性的影响及部分机制。方法将人成骨肉瘤细胞系OS-732按γ-分泌酶抑制剂（GSI）作用与否分为GSI组和对照组;脂质体法转染真核细胞表达质粒;Realtime PCR检测NICD、Hes1mRNA表达;流式细胞仪（FACS）检测Annexin V-PE/7-AAD双标的细胞凋亡;MTT法检测化疗药物对细胞的抑制率。结果 GSI组NICD和Hes1 mRNA均较对照组明显降低（P〈0.01）。GSI组化疗药物导致的瘤细胞抑制率和凋亡率均明显高于对照组。过表达Hes1可减弱GSI诱导的瘤细胞化疗药物敏感性增高。结论 GSI通过抑制Notch1受体激活和下游靶基因Hes1表达促进人成骨肉瘤细胞凋亡,从而增加人成骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A5（ANXA5）对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。 方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Real-time PCR和Western bloting检测各组p21^cip1 mRNA和P21^cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1（cyclinD1）蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。 结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白均显著降低（P<0.05）,cyclinD1（P<0.05）也显著降低。 结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。     

半乳糖凝集素3低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的 探讨半乳糖凝集素3（galectin-3）表达抑制对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖产生的影响。 方法 将胃癌细胞系MGC-803细胞分为3组,siRNA干扰组（转染靶向galectin-3 的特异siRNA）,空白对照组（只加转染试剂）和阴性对照组（转染非特异性的siRNA）。用Western blotting法检测转染后细胞中galectin-3蛋白的抑制效率,应用MTT法、集落形成实验检测galectin-3基因低表达对MGC-803细胞增殖的影响;用Western blotting和免疫组织化学法检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。 结果 siRNA干扰组细胞中galectin-3蛋白的表达与阴性对照组和空白对照组相比明显降低（P<0.05）;细胞集落形成实验和MTT显示,siRNA干扰组细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组细胞比较显著降低（P<0.05）;cyclin D1和PCNA蛋白表达均为siRNA 干扰组细胞表达显著低于两对照组（P<0.05）。 结论 Galectin-3低表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖能力,这可能与抑制cyclin D1和PCNA的表达有关。     

胃癌中ANP表达与BMP信号通路相互作用对细胞侵袭、转移的影响

目的探讨心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)在胃癌组织和细胞中的表达及ANP对胃癌细胞侵袭转移的作用。方法采用免疫组化EnVision法检测60例胃癌组织及正常胃黏膜组织中ANP的表达;培养胃癌细胞MGC-803,并将其分为两组:加入ANP组(ANP阳性组)、未加入ANP组(ANP阴性组)。采用Transwell实验检测两组胃癌细胞MGC-803的侵袭性,利用CCK8法检测两组胃癌细胞MGC-803的增殖能力。采用Western blot法检测两组胃癌细胞MGC-803中BMP信号通路相关蛋白表达量的变化及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量的变化。结果免疫组化检测ANP定位于胃黏膜细胞的胞质中,且在胃癌组织中的阳性率明显低于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05);CCK8法、Transwell实验结果显示,ANP阳性组胃癌细胞的增殖速度及侵袭性比ANP阴性组低,差异有统计学意义(P均<0.05)。Western blot法检测ANP阳性组中BMP信号通路相关蛋白Smad1/5表达量比ANP阴性组低,差异有统计学意义(P<0.05);BMP6/7和p-Smad1/5的表达升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。Western blot法检测ANP阳性组中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白比ANP阴性组低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论胃癌组织中ANP的表达低于正常胃组织,ANP可能通过激活BMP信号通路抑制胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和转移,为胃癌的发病机制及靶向治疗提供新思路。     

黄芩素抑制胃癌MGC-803细胞增殖和迁移

目的:探讨黄芩素(BAI)对胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的作用及机制。方法:MGC-803细胞用不同浓度BAI处理后,采用MTT法检测细胞的存活率;平板集落形成实验检测细胞的集落形成能力;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验检测细胞的迁移能力;ELISA检测12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)的浓度;Western blot实验检测血小板型12-脂氧合酶(p12-LOX)、血管内皮生长因子(VEGF)、p-ezrin和上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白的表达。结果:BAI可显著抑制MGC-803细胞的增殖、平板集落形成及迁移(P0.05或P0.01),显著下调p12-LOX代谢产物12-HETE的浓度(P0.05或P0.01),并显著下调p12-LOX、VEGF、p-ezrin、vimentin和Snail蛋白的表达水平(P0.05或P0.01),上调E-cadherin蛋白的表达水平(P0.01)。结论:BAI可有效抑制胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移,其机制与BAI调控p12-LOX、VEGF、p-ezrin及EMT相关蛋白的表达变化有关。     

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响。方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞, 空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blotting 和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定。检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响。 结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著（P<0.05）。细胞迁移变化不显著。结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变。     

下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

目的：探讨下调人Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响。方法：SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞（SLP-2敲低组）,另设空白组（细胞未做任何处理）和阴性对照组（细胞转染无义siRNA序列）,转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组（P>0.05）。结论：下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

Notch信号通路对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经再生的影响

目的 探讨抑制Notch信号通路促进脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后神经再生的机制。方法 采用大脑中动脉阻塞MCAO）方法构建局灶性脑缺血模型,体外培养NSCs,移植入纹状体缺血区。将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组（移植神经干细胞）、氮-［氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰］-S-苯基甘氨酸丁酯］（DAPT）+移植组。采用HE染色观察各组大鼠神经元损伤程度,利用免疫组织化学、Western blotting检测各组大鼠脑组织中Notch1、Hes1及Hes5的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组神经元损伤严重,出现核固缩和核溶解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞表达明显增多,Notch1、Hes1及Hes5蛋白表达显著上调（P＜0.05）。与模型组相比,移植组和DAPT+移植组神经元损伤均不同程度缓解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞均有部分表达,各项蛋白表达均有所降低（P＜0.05）;DAPT+移植组神经元损伤明显恢复,较移植组各项蛋白阳性细胞和蛋白表达进一步降低(P＜0.05)。结论 抑制Notch信号通路可促进脑缺血大鼠神经干细胞移植后的神经再生,其机制主要与下调Notch1、Hes1及Hes5的表达有关。     

Involvement of Notch1/Hes signaling pathway in ankylosing spondylitis

We aimed to investigate the role of Notch1/Hes signaling pathway in the pathogenesis of abnormal ossification of hip ligament in patients with ankylosing spondylitis (AS). 22 AS patients scheduled for artificial hip arthroplasty were randomly chosen as AS group. As controls, we used 4 patients diagnosed with transcervical fracture who underwent hip replacement surgery. Notch1 and Hes mRNA expressions were detected by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (RFQ-PCR). Immunohistochemistry (IHC) was used to detect Notch1 and Hes protein expression. Correlation analyses of Notch-l and Hes with AS-related clinical factors were conducted with spearman’s correlation analysis and partial correlation analysis. RFQ-PCR results showed significant differences in Notch1 and Hes mRNA expressions between AS group and the control group (all P < 0.05). IHC analysis further indicated positive nuclear signals of Notch1 and Hes protein, indicating functional activation of the Notch1 and Hes pathways. Semi-quantitative IHC showed a higher Notch1 and Hes expression levels in AS group compared to the control group (all P < 0.05). Correlation analysis suggested that Hes protein expression was positively associated with the clinical course of the disease in AS patients. In conclusion, Notch1 and Hes overexpression was clearly detected in hip joint ligaments of AS patients, Hes protein expression was associated with the clinical course of AS. Taken together, we suggest that signaling pathways mediated by Notch1-Hes may contribute to ligament ossification of hip joints in AS patients.