2013年《中国药学杂志》继教栏目部分试题答案

第1期:A;A、B;B;D;A、E;C;D;E;E;C第3期:B;A、E;E;缺血预处理;心血管;靶分子;植物雌激素;注射液;进行比较;避免发生第5期:C;E;E;A;E;改性;亲脂性;减少钙;消化道;根除第7期:多晶型现象;溶解度,溶出速率,体内吸收;基因多态性;仿垂体;吉非替尼;生物学数据;纤维蛋白原;诱导,抑制;预防;近30%第9期:外排;相互作用;P-gp;不同性别;差异大;溶解性;第一责任;较高,较高;长,弱,少;我国第11期:质量源于设计;分泌,进入;光活性;最初,最轻;布洛芬,吲哚美辛;降低;减少,增加;肥胖,糖尿病;信号转移;计划、实施、检查、处理     

合欢花乙酸乙酯部位化学成分研究

该文对合欢Albizzia julibrissin干燥花序的乙酸乙酯萃取部位进行化学成分研究,采用硅胶,Sephadex LH-20,MCI GEL CHP-20P等柱色谱技术分离纯化,利用波谱数据 （¹H,¹³C-NMR,MS） 进行结构鉴定,共分离和鉴定29个化合物,分别为8-hydroxy-2,6-dimethyl-2E,6Z-octadienoic acid （1）,8-O-formyl-2,6-dimethyl-2E,6Z-octadienoic acid （1a）,8-hydroxy-2,6-dimethyl-2E,6E-octadienoic acid （2）,8-O-formyl-2,6-dimethyl-2E,6E-octadienoic acid （2a）,（2E,6S）-2,6-二甲基-6-O-β-D-吡喃木糖基-2,7-辛二烯酸 （3）,clovan-2β,9α-diol （4）,2β-O-formyl-clovan-9α-ol （4a）,2β,9α-O-diformyl-clovan （4b）,吐叶醇 （5）,（6S,9R）-roseoside （6）,香草醛 （7）,4-O-乙基没食子酸 （8）,3-乙氧基-4-羟基苯甲酸 （9）,对-羟基苯甲醛 （10）,没食子酸 （11）,原儿茶酸 （12）,硬脂酸 （13）,软脂酸 （14）,2,3-dihydroxypropyl hexadecanoate （15）,亚油酸 （16）,东莨菪内酯 （17）,3-吲哚甲醛 （18）,2-呋喃甲酸 （19）,5-羟甲基糠醛 （20）,（22E,24R）-5α,8α-epidioxy-ergosta-6,22-dien-3β-ol （21）,（22E,24R）-5α,8α-epidioxy-ergosta-6,9,22-trien-3β-ol （22）,（+）-lariciresinol 9’-stearate （23）,芒柄花素 （24） 和尿苷 （25）。其中,化合物 1a,2a,4a,4b 为分离过程中产生新的人工产物,其他25个化合物均为首次从该植物中分离得到。     

人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

目的 通过观察人参-三七-川芎提取物（GNC）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法 本研究以HUVECs作为研究对象,H₂O₂诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白组,H₂O₂组,H₂O₂+DMSO组（DMSO）,白藜芦醇组（Resv）及GNC提取物低（GNC-L）,中（GNC-M）,高（GNC-H）质量浓度组,除空白组,H₂O₂组外,其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^-1,Resv 8 μmol·L^-1,GNC 400,300,200 mg·L^-1药物干预,24 h后除空白组外给予300 μmol·L^-1 H₂O₂诱导HUVECs衰老,再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法鉴定细胞衰老程度,流式细胞仪分析细胞周期,采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧（mtROS）水平,以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测含锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与磷酸化（p-）p66的蛋白表达。结果 SA-β-gal染色结果显示,与空白组比较,H₂O₂组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少（P<0.01）;细胞周期结果显示,与空白组比较,H₂O₂组G₀/G₁期细胞数量比例明显增多（P<0.05）,G₂/M期细胞比例明显减少（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC各组及Resv组G₀/G₁期细胞数量比例明显减少（P<0.05）,GNC-H组,Resv组在G₂/M期细胞比例明显增加（P<0.05）。线粒体ROS荧光结果显示,与空白组比较,H₂O₂组强度明显减弱（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M组强度明显增高（P<0.05）;线粒体膜电位结果显示,与空白组比较,H₂O₂组荧光强度显著下降（P<0.01）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M,GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高（P<0.01）,Resv组明显增高（P<0.05）;Western blot结果显示,与空白组比较,H₂O₂组MnSOD含量明显降低（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H与GNC-M组表达明显增多（P<0.05）;与空白组比较,H₂O₂组p-p66含量显著增高（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各用药组表达显著降低（P<0.01）,表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论 中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H₂O₂诱导的血管内皮细胞的衰老,药物干预后,细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD,p-p66蛋白发生明显改善,氧化应激反应减轻,其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。     

番石榴叶乙醇提取物的化学成分研究

采用多种色谱手段,对番石榴叶95%乙醇提取物的化学成分进行分离和纯化,并根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。从番石榴叶中分离得到18个化合物,分别为（+）-globulol（1）,clovane-2β,9α-diol（2）,2β-acetoxyclovan-9α-ol（3）,（+）-caryolane-1,9β-diol（4）, ent-T-muurolol（5）,clov-2-ene-9α-ol（6）,异植物醇（7）,柽柳黄素（8）,棉花素（9）,槲皮素（10）,山柰酚（11）,guajaverin（12）,avicularin（13）,chrysin 6-C-glucoside（14）,3’-O-methyl-3,4-methylenedioxyellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside（15）,对羟基苯甲酸（16）,guavinoside A（17）和guavinoside B（18）。化合物 2~9,14~16为首次从该植物中分离得到。体外抗肿瘤活性筛选表明,番石榴叶95%乙醇提取物在60 mg·L^-1下对SW480细胞的抑制率达到61.3%。     

葛根提取物对正常及去势大鼠血清雌激素水平影响的研究

目的 :研究葛根提取物对大鼠雌激素水平的影响。方法 :将 80只成年雌性大鼠随机分成 4组 ,每组20只 :正常对照组 ;正常 +灌胃葛根提取物 ,30d ;去势组 ,去势 +灌胃葛根提取物 ,30d。抽血测定血清E₀ ,E₂ ,E₃ ,睾酮等性激素水平 ;FSH ,LH ,PRL ,GH等促性激素水平。结果 :去势后 ,E₂ ,E₃ 显著下降 (P<0.05) ;E₀ 有所下降 ,但差异无显著性 (P>0.05) ,睾酮以及FSH ,LH ,PRL ,GH等垂体分泌激素增高 (P<0.05)。葛根提取物灌注后 ,正常组雌激素和促性激素水平均有不同程度的下降 ;去势动物的E₂ ,E₃ 恢复正常 ;E₀ 和睾酮比正常组增高 (P<0 .05) ,但睾酮水平与去势组比较差异无显著性 (P>0.05)。结论 :葛根提取物可恢复去势大鼠的雌激素水平 ,提高促性激素水平 ;在正常大鼠体内 ,该物质表现为抗雌激素作用。     

南烛化学成分研究

对药食两用植物南烛的化学成分进行了研究。利用大孔吸附树脂、反相硅胶柱色谱和制备型HPLC等色谱技术从南烛枝叶中分离得到11个糖苷类化合物,运用质谱、核磁等波谱技术鉴定其结构分别为10-O-反式对羟基桂皮酰-6α-羟基-二氢水晶兰苷（10-O-trans-p-coumaroyl-6α-hydroxyl-dihydromonotropein,1）,10-O-顺式对羟基桂皮酰-6α-羟基-二氢水晶兰苷（10-O-cis-p-coumaroyl-6α-hydroxyl-dihydromonotropein,2）,乌饭树苷（vaccinoside,3）,10-O-顺式对羟基桂皮酰-水晶兰苷（10-O-cis-p-coumaroyl monotropein,4）,异落叶松脂素-9-O-木糖苷（isolariciresinol-9-O-β-D-xyloside,5）,鸢尾苷（tectoridin,6）,vicenin-3（7）,槲皮素-3-O-鼠李糖苷（quercetin-3-O-α-L-rhamnoside,8）,槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷（quercetin-3-O-α-L-arabinopyranoside,9）,槲皮素-3-O-半乳糖苷（quercetin-3-O-β-D-galactopyranoside,10）,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（quercetin-3-O-β-D-glucuronide,11）。其中化合物 1和2为新化合物 ,4,6,7为首次从该属植物中分离得到的已知化合物。     

补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响

目的 研究补肾化痰方在防治绝经后骨质疏松症中对免疫T细胞亚群辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的影响。方法 6月龄SD雌性大鼠60只,按随机数字表分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组（0.184 mg·kg^-1）,补肾化痰方低、中、高剂量组（4.7,9.4,18.8 g·kg^-1）,除假手术组外,其他组均采用手术切除卵巢,制作绝经后骨质疏松症模型。术后1周灌胃给药,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃,1次/d,灌胃12周后取材。运用微计算机断层扫描技术（Micro CT）检测大鼠骨量及骨微结构;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中叉头框蛋白p3（Foxp3）,维甲酸相关核孤受体γt（RORγt）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测骨组织中Foxp3,RORγt mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨组织中Foxp3,RORγt蛋白表达量;运用流式细胞抗原检测,分析并比较各组Th17,Treg细胞的数量。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨量降低、骨小梁显著减少（P<0.01）;骨微结构破坏,血清中Foxp3浓度显著降低,RORγt浓度显著升高（P<0.01）,骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达降低,RORγt mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,骨组织中Treg细胞数量减少（P<0.01）,Th17细胞数量增加,且Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组骨量明显增加（P<0.05,P<0.01）,血清中Foxp3浓度升高,RORγt浓度显著降低（P<0.01）,骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,但低剂量组mRNA差异无统计学意义,RORγt mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,骨组织中Treg细胞数明显升高,Th17细胞数量明显降低（P<0.05,P<0.01）,且Th17/Treg显著降低（P<0.01）。结论 补肾化痰方可以提高去卵巢大鼠骨量,改善骨微结构,并使骨组织中Treg细胞数量增加而Th17细胞数量减少。进而推论补肾化痰方可能通过调节Th17/Treg平衡,而发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。     

连钱草的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS和HPLC等色谱技术对连钱草全草进行化学成分研究,得到14个化合物。通过理化数据和波谱等手段鉴定其结构,化合物分别鉴定为 stilbostemin B（1）,trilepisiumic acid（2）,3,4-二羟基苯基乙醇酮（3）,岩白菜素（4）,oresbiusin A（5）,norbergenin（6）,stilbostemin D（7）,ehretioside B（8）,阿魏酸乙酯（9）,反式对羟基肉桂酸（10）,没食子酸甲酯（11）,原儿茶酸（12）,对羟基苯乙酮（13）,E-3-2,4-二羟基苯基-2-丙烯酸（14）,其中化合物 1~10 及化合物 13为首次从该植物中分离得到。     

桂花果实的化学成分研究

采用硅胶、Sephadex LH-20等多种材料进行分离纯化,通过理化方法和波谱分析进行结构鉴定,从桂花果实醇提溶液的乙酸乙酯萃取部分,分离并鉴定了23个化合物,分别为尼克酰胺（1）,D-阿洛醇（2）,5-羟甲基-2-呋喃甲醛（3）,乙酰氧基齐墩果酸（4）,苯甲酸（5）,麦角甾-7,22-二烯-3-酮（6）,β-谷甾醇（7）,borreriagenin（8）,麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（9）,C-veratroylglycol（10）,甲基-2-O-β-吡喃葡糖基苯甲酸（11）,3’,7-二羟基-4’-甲氧基异黄酮（12）,7-羟基香豆素（13）,咖啡酸甲酯（14）,齐墩果酸（15）,（-）-襄五脂素（16）,莳萝油脑（17）,3β,5α,9α-三羟基-麦角甾-7,22-二烯-6-酮（18）,2α-羟基齐墩果酸（19）,桦木酸（20）,白桦脂醇（21）,3,3’-Bisdemethylpinoresinol（22）,羽扇豆醇（23）。所有化合物在桂花果实中均为首次分离;除化合物 4,7,15,19,23外,其余化合物在此种植物中为首次分离。     

Liguzinediol 对正常大鼠心脏血流动力学的影响

 目的 观察 liguzinediol （ 2 , 5- 二羟甲基 -3 , 6- 二甲基吡嗪）对正常 SD 大鼠心脏血流动力学的影响。 方法 将大鼠随机分为 5 组：生理盐水组,阳性对照组（磷酸二酯酶抑制剂米力农, 0.3 mg·kg^-1 ）, 3 个剂量组（ liguzinediol 5 , 10 , 20 mg·kg^-1 ）,每组 10 只。采用 RM6240B/C （四道）型多道生理记录仪测量给药后大鼠心脏血流动力学指标如左心室收缩压（ LVSP ）,左心室终末舒张压 (LVEDP) ,左心室最大变化速率（± d<>p/d<>t_max ）,左室开始收缩至左室内压上升速率峰值时间 (t-d<>p/d<>t_max) ,收缩压 (SAP) ,舒张压 (DAP) ,平均压 (MAP) ,脉压差 (MPP) 以及心率 (HR) 。 结果 静脉给药后, liguzinediol 5 , 10 , 20 mg·kg^-1 使大鼠左心室 LVSP 、 +d<>p/d<>t_max 、 - d<>p/d<>t_max 、 SAP 、 MAP 、 MPP 显著增加, t-d<>p/d<>t_max 、 LVEDP 降低。 结论 liguzinediol 对正常大鼠心脏具有正性肌力作用。     

乌饭树叶黄酮苷类成分研究

 目的 研究乌饭树叶中黄酮苷类化学成分。 方法 运用多种色谱技术分离乌饭树叶中黄酮苷类成分,采用波谱技术和理化性质确定化合物的结构。 结果 分离得到 12 个化合物,分别鉴定为：柯伊利素 -7- O-<>β- D- 葡萄糖苷 (1) ,欧槲寄生苷乙 (2) ,柯伊利素 -7- O-(6'- O- 对羟基肉桂酰 )-<>β- D- 葡萄糖苷 (3) ,槲皮素 -3- O-<>β- D- 葡萄糖醛酸甲酯苷 (4) ,异鼠李素 -3- O-<>β- D- 葡萄糖苷 ( 5 ) ,槲皮素 -3- O-α-L- 鼠李糖苷 ( 6 ) ,槲皮素 -3- O- α-L- 阿拉伯糖苷 ( 7 ) ,牡荆素 (8) ,槲皮素 -3- O-<>β- D- 半乳糖苷 (9) ,荭草素 (10) ,异荭草素 (11) ,槲皮素 -3- O-<>β- D- 葡萄糖醛酸苷 (12) 。 结论 化合物 1~4 为首次从越橘属植物中分离得到,化合物 5~12 首次从该植物中分离得到。     

红花注射液化学成分及其活性研究

采用多种色谱技术对红花注射液化学成分进行研究,从中分离鉴定16个化合物,经波谱学等方法鉴定为野黄芩苷（1）,山柰酚-3-O-β-芸香糖苷（2）,羟基红花黄色素A（3）,芦丁（4）,香豆酸（5）,腺苷（6）,紫丁香苷（7）,反式-1-（4'-羟基苯基）-丁-1-烯-3-酮（8）,（8Z）-癸烯-4,6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷（9）,对羟基苯甲醛（10）,（2E,8E）-十四烯-4,6-二炔-1,12,14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷（11）,山柰酚-3-O-β-槐糖苷（12）,尿苷（13）,二氢红花菜豆酸（14）,肉桂酸（15） 和山柰酚（16）;其中,化合物1,2,7,9,11和12为首次从红花注射液中分离得到。家兔体外抗血小板聚集活性测试结果表明,除化合物5外,其余化合物均表现出不同程度的抗血小板聚集活性,以化合物2,3,9,12活性最强。     

开心散对APP/PS1小鼠学习记忆能力和突触功能的机制

目的 探讨开心散对APP/PS1小鼠学习记忆和突触功能的潜在保护机制。方法 将60只APP/PS1小鼠随机分为模型组,多奈哌齐（2 mg·kg^-1·d^-1）组,开心散低、中、高剂量（0.7,1.4,2.8 g·kg^-1·d^-1）组,同月龄同窝野生型小鼠为正常组,每组12只。连续灌胃给药2个月后进行Morris水迷宫实验。采用透射电镜观察海马神经元超微结构。采用比色法检测血清乙酰胆碱（ACh）,乙酰胆碱转移酶（ChAT）,乙酰胆碱酯酶（AChE）含量和海马活性氧（ROS）,丙二醛（MDA）,超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real time-PCR）检测海马脑源性神经营养因子（BDNF）,β-神经生长因子（NGFB）,discs大同源物（DLG）2,DLG4,突触素（SYP）mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数,目标象限停留时间显著减少（P<0.01）,线粒体数量明显减少,形态各异,排列不规则,部分线粒体明显肿胀,变形,线粒体嵴断裂,胞浆溶解,呈空泡状,细胞碎片较多,血清ACh,ChAT含量显著降低,AChE水平显著升高（P<0.01）,海马ROS,MDA明显升高（P<0.05,P<0.01）,SOD,GSH-Px显著下降（P<0.01）,海马BDNF,NGFB,DLG2,DLG4,SYP mRNA水平明显下降（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,多奈哌齐组和开心散中、高剂量组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增加,目标象限停留时间明显延长（P<0.05,P<0.01）,线粒体损伤改善,形态规则,多呈椭圆形,线粒体肿胀、变形减少,线粒体嵴清晰,血清ACh,ChAT水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,AChE活性明显下降（P<0.05）,海马ROS水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD,GSH-Px活性明显增加,海马BDNF,NGFB,DLG2,DLG4,SYP mRNA水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,开心散低剂量组目标象限停留时间明显延长,海马SYP mRNA水平明显增加（P<0.05）,各组间的游泳速度比较,差异无统计学意义。结论 开心散通过提高突触可塑性相关蛋白表达、减轻海马神经元超微结构损伤、抗氧化应激、调节胆碱能神经递质,改善APP/PS1小鼠学习记忆能力,从而发挥神经保护作用。     

鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响,探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组,TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁）,鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸）,除空白组外,均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型,分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞,采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）,N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）表达的变化;使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变;使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d,WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变,且E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01）,说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱,且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程,抑制WB-F344细胞的迁移能力。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

母婴分离/束缚应激模型小鼠海马小胶质细胞变化及温阳解郁方的调节作用

目的 观察母婴分离/束缚应激诱发焦虑抑郁小鼠海马小胶质细胞激活和白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达情况,探讨温阳解郁方抗焦虑抑郁的机制。方法 84只雄性C57BL仔鼠于出生后第0天（PD0）随机分为空白组、束缚应激组和造模组,造模组采取母婴分离结合束缚应激制备焦虑抑郁模型,将造模组按随机数字表法分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组。在离乳第21天（PD21）至成年第90天（PD90）,空白组、束缚应激组和模型组饲喂正常饲料,其余饲喂药混饲料（温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组用药剂量分别为5.85,12.03,16.71 g·kg^-1及2.60 mg·kg^-1）。采用旷场实验,O迷宫和社会交互实验评估模型组小鼠焦虑抑郁状态;免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞及离子钙接头蛋白-1（Iba-1）表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1β,IL-6,TNF-α,Iba-1,糖皮质激素受体（GR）mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著减少（P<0.01）,开臂活动时间与活动总路程明显减少（P<0.05,P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间显著增加（P<0.01）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平显著升高（P<0.01）,GR mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,IHC结果显示小胶质细胞的过度激活。与模型组比较,温阳解郁方及氟西汀组小鼠5 min运动总路程和中央区活动时间显著上升（P<0.01）,开臂活动时间显著上升（P<0.01）,训练探察时间和辨别探查时间明显降低（P<0.05,P<0.01）;Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-1β,IL-6,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,GR mRNA表达水平显著上升（P<0.01）,IHC结果表明小胶质细胞的形态恢复;温阳组和解郁组小鼠开臂活动时间显著上升（P<0.01）,辨别探查时间明显降低（P<0.05）,Iba-1蛋白及mRNA表达,IL-6 mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;温阳组小鼠GR mRNA表达水平明显上升（P<0.05）,TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;解郁组小鼠5 min运动总路程显著上升（P<0.01）,训练探察时间明显降低（P<0.05）,IL-1β mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,IHC结果表明两组小胶质细胞有所恢复。结论 温阳解郁方的综合疗效和药理作用优于温阳方和解郁方,其作用机制可能通过抑制母婴分离/束缚应激小鼠海马小胶质细胞的激活,降低IL-1β,IL-6,TNF-α等细胞因子的表达,增加海马GR表达,从而改善小鼠的焦虑抑郁样行为。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠学习记忆和海马谷氨酸细胞及NR2B受体的影响

目的：通过建立H₂O₂诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察番茄红素（lycopene）对心肌细胞的保护作用。方法：将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组、模型组（H₂O₂）、番茄红素低剂量组（2.5 μmol·L^-1）、番茄红素中剂量组（5 μmol·L^-1）、番茄红素高剂量组（10 μmol·L^-1）。番茄红素与心肌细胞孵育4 h后,再加入H₂O₂,24 h后MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的含量和细胞超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及丙二醛（MDA）含量,荧光电子显微镜下观察细胞核的形态变化,采用Western blot方法检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的变化。结果：与正常组比较,模型组心肌细胞存活率降低,心肌细胞LDH和CK释放量增加,SOD,CAT活性降低,MDA含量增加（P<0.01）,呈现出凋亡细胞的特征,Caspase-3的表达增高（P<0.01）。番茄红素高剂量组与模型组比较,心肌细胞的存活率增加（86.36±2.54）%,（54.15±10.97）%,P<0.01,H₂O₂所致乳鼠心肌细胞LDH释放量降低（319.53±23.48）,（495.27±31.57）U·L^-1,P<0.01,CK释放量降低（279.29±32.91）,（397.01±29.36）U·L^-1,P<0.01,SOD活性增高（47.94±2.64）,（37.19±5.78）U·mg^-1,P<0.01,CAT活性增高（34.95±4.67）,（16.35±4.84）U·mg^-1,P<0.01,MDA含量降低（14.27±2.43）,（20.11±2.09）μmol·g^-1,P<0.01,细胞核形态改善,Caspase-3的表达降低（1.40±0.20）,（1.94±0.22）,P<0.05。结论：番茄红素对H₂O₂所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用。     

香丹注射液和清开灵注射液联合用药对急性炎症血栓模型大鼠脏器的保护作用

目的 基于血栓变化、炎性指标、脏器功能和病理改变等考察香丹注射液（Xiangdan injection,XDI）和清开灵注射液（Qingkailing injection, QKLI）联合用药在炎症血栓动物模型的治疗上是否具有协同增效作用。方法 100只雄性SD大鼠,根据体质量随机分为正常组,炎症血栓模型组,XDI组（2.5,5 mL·kg^-1）,QKLI组（5,10 mL·kg^-1）,XDI+QKLI组［（2.5+5） mL·kg^-1,（2.5+10） mL·kg^-1,（5+5） mL·kg^-1,（5+10） mL·kg^-1,每组10只大鼠。各组均腹腔注射给与相应注射液,每天1次,共4 d,正常组和模型组注射生理盐水。给药第2天,除正常组外,其余各组大鼠均造模,即先采用25 mg·kg^-1角叉菜胶腹腔注射入大鼠体内,16 h后大鼠再尾静脉注射50 μg·kg^-1脂多糖（LPS）。注射LPS 24 h后,各组大鼠测定肝脏指数、肾脏指数,测定血小板（PLT）数量,测量血栓长度,全自动生化分析仪测定各项肝肾功能天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,丙氨酸氨基转移酶（ALT）,碱性磷酸酶（ALP）,肌酐（Crea）及尿素氮（BUN）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎性因子白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,苏木素-伊红（HE）染色观察心、肝、肺、肾脏组织病理学变化,以及观察脏器病变分级情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠PLT数量显著下降,大鼠尾部血栓长度显著增加,肝脏指数显著升高,肝肾功能ALT,ALP,BUN含量明显升高,IL-6和TNF-α含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,肝、肺、肾脏组织出现明显病理损伤（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,XDI 5 mL·kg^-1组明显降低大鼠血清ALT和ALP含量（P<0.05,P<0.01）,QKLI 5,10 mL·kg^-1组大鼠血清ALT,ALP和TNF-α含量明显下降（P<0.05,P<0.01）,XDI 5 mL·kg^-1和QKLI 10 mL·kg^-1单独用药均对LPS引起的肺脏病变损伤有明显减轻作用（P<0.05）;XDI和QKLI合用后,明显降低大鼠的ALT,AST,ALP和TNF-α含量,尤其是XDI和QKLI合用（5+10） mL·kg^-1组效果最为明显（P<0.05,P<0.01）,并且大鼠尾部血栓长度明显缩短（P<0.05）,肺脏病变程度也减轻（P<0.05）。与部分相同剂量XDI或QKLI单用组比较,两药合用后,大鼠血清ALT,BUN,TNF-α含量和肝脏指数都明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 XDI和QKLI单独用药对炎症血栓模型大鼠的脏器功能和器质损害及炎症反应有一定改善作用和抑制作用。两者合用后相对其单独用药,对于减少静脉血栓长度,改善肝肾功能,降低炎性因子,保护肺、肝、肾等脏器结构都有一定协同增效作用。     

PLGA-吉西他滨缓释微球在荷胰腺癌裸鼠体内的药动学研究

 目的 研究PLGA（乳酸-羟基乙酸共聚物）-吉西他滨缓释微球在荷胰腺癌裸鼠体内的药动学特点,为该药的临床合理应用提供理论和实验依据。方法 对荷胰腺癌裸鼠分别进行PLGA-吉西他滨缓释微球间质化疗（A组,8.64 mg·kg-1）,吉西他滨全身化疗（B组,8.64 mg·kg-1）和瘤体内给药化疗（C组,8.64 mg·kg-1）后,采集不同时间静脉血及恶性肿瘤、肝脏和肾脏组织,应用HPLC测定血浆和组织中的药物浓度,WinNolin4.0.1药动学软件计算主要药动学参数,t检验进行统计学分析。结果 血浆中A,B,C 3组的ρ_max分别为（0.18±0.06）,（1.765±0.329）,（0.127±0.042）mg·L-1,A组与B组相比,P<0.05,t1/2分别为（120±10.6）,（4.28±1.07）,（6.32±1.25）h, tmax分别为（72±2.5）,（0.33±0.09）,（0.50±0.21）h,MRT分别为（56.8±10.9）,（0.43±0.14）,（0.19±0.04）h,AUC分别为（10.2±2.7）,（0.13±0.03）,（0.56±0.18）mg·h·L-1;肿瘤组织中A、B、C 3组的ρ_max分别为（1.329±0.381）,（0.462±0.150）,（0.753±0.166）mg·L-1,A组与B、C组相比,P<0.05,t1/2分别为（97.39±8.93）,（5.97±1.65）,（2.15±0.58）h,tmax分别为（24±3.2）,（4.0±1.2）,（0.00±0.02）h,MRT分别为（399.8±20.8）,（126.9±15.4）,（117.8±10.7）h,AUC分别为（383.7±25.2）,（56.83±6.73）,（71.60±18.52）mg·h·L-1;肝脏中A、B、C 3组的ρ_max分别为（0.734±0.152）,（0.578±0.083）,（0.85±0.19）mg·L-1,A组与B、C组相比,P>0.05,tmax分别为（72±6.2）,（24±3.9）,（72±4.5）h,MRT分别为（520.5±20.2）,（111.7±19.4）,（112.9±9.6）h,AUC分别为（1 325.9±86.5）,（216.4±32.6）,（108.8±29.1）mg·h·L-1;肾脏组织中A、B、C 3组的ρ_max分别为（0.55±0.16）,（0.458±0.137）,（0.687±0.232）mg·L-1,A组与B、C组相比,P>0.05,tmax分别为（2.0±0.6）,（8.0±2.3）,（120±10.4）h,MRT分别为（462.1±28.6）,（111.1±20.1）,（119.6±18.6）h,AUC分别为（378.1±38.5）,（29.42±10.64）,（97.57±16.72）μg·h·mL-1。结论 PLGA-吉西他滨缓释微球间质化疗能够显著提高肿瘤局部的药物浓度,延长药物作用时间,减少化疗药物的全身毒副作用。     

桂枝加龙骨牡蛎汤对肺不藏魄型不寐模型大鼠IL-10及TNF-α表达的影响

目的 探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对肺不藏魄型不寐大鼠相关脏器中白细胞介素（IL）-10及肿瘤坏死因子（TNF）-α表达差异的影响,研究桂枝加龙骨牡蛎汤改善不寐的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组10只。造模方法选用长平台浅水环境法剥夺大鼠睡眠,造模共计42 d。空白组和模型组给予0.05 mL·kg^-1生理盐水灌胃,将西药组、中药组大鼠在继续造模的同时给予干预,西药组给予右佐匹克隆片0.105 mg·kg^-1灌胃,中药组给予桂枝加龙骨牡蛎汤7 600 mg·kg^-1灌胃,共干预28 d。造模成功后,第42天开始进行Morris水迷宫实验检测大鼠的运动及空间记忆能力;以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中IL-10及TNF-α的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织和脑组织的IL-10及TNF-α蛋白表达;免疫组化法检测大鼠肺组织和脑组织的IL-10及TNF-α的水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠睡眠分期非快速眼球运动（NREM）期和快速眼球运动（REM）期时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）,觉醒期时间显著增加（P<0.01）,平台探索总时间及总距离显著增加（P<0.01）,目标象限（第三象限）探索时间百分比及穿越平台次数显著降低（P<0.01）,ELISA结果显示血清中IL-10水平显著降低（P<0.01）,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,Western blot结果显示大鼠脑、肺组织IL-10蛋白表达显著降低（P<0.01）,TNF-α蛋白表达显著升高（P<0.01）,免疫组化法检测结果显示大鼠脑、肺组织IL-10表达显著降低（P<0.01）,TNF-α表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,西药组及中药组大鼠睡眠分期NREM期和REM期时间明显增加（P<0.05,P<0.01）,觉醒期时间缩短（P<0.05）,平台探索总时间及总距离显著降低（P<0.01）,目标象限（第三象限）探索时间百分比及穿越平台次数明显增加（P<0.05,P<0.01）,ELISA结果显示血清中IL-10水平显著升高（P<0.01）,血清中TNF-α水平显著降低（P<0.01）,Western blot结果示脑、肺组织IL-10蛋白表达显著升高（P<0.01）,TNF-α蛋白表达显著降低（P<0.01）,免疫组化法检测结果示脑、肺组织IL-10表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,TNF-α表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 桂枝加龙骨牡蛎汤能够通过改善肺不藏魄型不寐大鼠脑、肺组织IL-10及TNF-α的表达,延长睡眠时间,进而达到改善失眠的作用,其机制可能与改善炎症因子表达水平有关。