多发性硬化患者外周血单个核细胞IL—2,IFN—γ和TNF—αmRN…

应用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）和狭缝印迹分子交发技术，研究１７例多发性硬化（ＭＳ）患者外周血单个核细胞ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ表达。结果发现存３种细胞因子的ｍＲＮＡ表达的高于健康对照组，治疗后病程处于稳定期的ＭＳ患者ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ表达恢复正常水平，但ＩＬ－２ｍＲＮＡ仍保持高水平，此结果表明炎性细胞因子（ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α）参与ＭＳ发病过程，并可作为     

多发性硬化患者外周血单个核细胞IL-2、IFN-γ和TNF-α mRNA表达水平

应用逆转录／聚合酶链反应（RT／PCR）和狭缝印迹分子杂交技术，研究17例多发性硬化（MS）患者外周血单个核细胞IL-2、IFN-γ和TNF-α的mRNA表达。结果发现3种细胞因子的mRNA表达均高于健康对照组;治疗后病程处于稳定期的MS患者IFN-γ和TNF-α的mRNA表达恢复到正常水平，但IL-2mRNA仍保持高水平。此结果表明炎性细胞因子（IFN-γ和TNF-α）参与MS发病过程，并可作为MS病情缓解、复发的临床指标。     

脐血单个核细胞IL—12和IFN—γ表达的观察

本文探讨新生和脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）白细胞介素１２（ＩＬ－１２）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）基因表达水平；观察重组ＩＬ－１２地ＣＢＭＣＩＦＮγ基因表达的影响。采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ＿ＰＣＲ）测定８例新生儿ＣＢＭＣＩＬ－１２ｐ４９ＲＮＡ和ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，用ＥＬＩＳＡ法测新一儿ＣＢＭＣ细胞培养上清液中ＩＦＮ－γ浓度。结果显示：新生儿ＣＢＭＣ一外受刺激后表达的Ｉ国２ｐ４０ｍＲＮＡ、Ｉ     

miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达

目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平,通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA,RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现,SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加,miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3,上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。     

冻存增强人外周血单个核细胞产生IL—2的机理初探

作者用ＥＬＩＳＡ法研究了冻存对人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生白介素２（ＩＬ－２）的影响。结果表明，冻存后ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力明显增强；去除ＣＤ８＾＋细胞或加入消炎痛后，ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２能力增强，且与ＰＢＭＣ冻存后产生ＩＬ－２水平相同。研究提示：冻存过程中可能通过抑制ＰＧＥ２分泌细胞及使ＣＤ８＾＋细胞失活，使ＰＢＭＣ增加ＩＬ－２的产生。     

喉癌病人外周血单个核细胞中MMP-9 mRNA的表达

①目的　探讨喉癌病人外周血单个核细胞 (PBMC)中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)mRNA的表达情况。②方法　提取PBMC中的总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 8例喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达 ,并以 2 0例正常人作为对照。③结果　不同分期喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达均明显高于对照组 ,差异有极显著性 (F =187.75 ,q =6 .13～ 33.38,P <0 .0 1) ,并随临床分期及病理组织分级增加而表达增强 (F =187.75、193.12 ,q=8.94～ 30 .95 ,P <0 .0 1)。④结论　喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达水平可作为喉癌预后的一项预测指标     

脂多糖对人单个核细胞白细胞介素-6基因表达的影响

目的：探讨脂多糖(LPS)对人单个核细胞表达白细胞介素-6(IL-6)mRNA的影响。方法：抽取人外周静脉血，经EDTA抗凝，LPS刺激培养，分离单个核细胞并提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，然后用IL-6引物进行热启动PCR扩增。扩增产物热变性后与IL-6检测探针、捕获探针进行夹心杂交，最后加入亲和素-辣根过氧化物酶及其底物，显色检测杂交信号。IL-6引物及探针用Primer Premier 5．0软件设计。结果：LPS可在转录水平上诱导IL-6 mRNA表达，其作用强度与LPS剂量呈正相关；IL-6 mRNA表达丰度有时间效应，刺激4h后，IL-6 mRNA的表达最高。结论：LPS能显著增强人单个核细胞表达IL-6 mRNA。     

哮喘患者外周血淋巴细胞IL-5、IL-3、GM-CSFmRNA表达

目的 :探讨哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)IL 5、IL 3、GM CSFmRNA表达以及与慢性支气管炎患者的差异。方法 :选哮喘患者13例 (哮喘组 ) ,平均年龄(31.8±8.5)岁。慢性支气管炎患者9例 (慢支组 ) ,平均年龄(64.8±4.7)岁。健康献血员9例 (对照组 ) ,平均年龄(32.8±5.2)岁。抽取静脉血分离单个核细胞 ,用斑点印迹杂交法检测IL 5、GM CSF和IL 3mRNA的表达。结果 :哮喘组PBMCIL 5、GM CSF和IL 3mRNA表达的相对含量明显高于慢支组和对照组(P<0.01) ,慢支组与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论 :哮喘IL 5、GM CSF和IL 3mRNA表达明显增高 ,可能在哮喘发病中起重要作用。     

IL-10 inhibits inducible expression pattern of beta-defensin-2 in human peripheral blood cells]

OBJECTIVE: To investigate the effect of IL-10 on the inducibility of human beta-defensin 2 (hBD-2) in human peripheral blood cells. METHODS: Peripheral blood samples were collected from 22 healthy individuals and co-cultured with 0 ng/ml lipopolysaccharide (LPS), 100 ng/ml LPS, 10 ng/ml IL-10, or 100 ng/ml LPS plus 10 ng/ml IL-10 at 37 degree for 6 h. Total RNA was extracted from peripheral blood cells and the mRNA level of hBD-2 was detected by relative quantitative real-time PCR.. RESULT: No detectable level of hBD-2 mRNA was found in normal peripheral blood cells with stimulation of 0 ng/ml LPS or 10 ng/ml IL-10. The mRNA level of hBD-2 was increased to 166.9 +/- 35.14 after 100 ng/ml LPS challenge, while the mRNA level of hBD-2 was decreased to 30.40 +/- 9.18 after the co-stimulation of 100 ng/ml LPS plus 10 ng/ml IL-10; which was significantly lower than that with LPS alone (P<0.05). CONCLUSION: The expression of hBD-2 gene can be induced by LPS.IL-10 inhibits the inducible expression of hBD-2.     

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的：构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在真核细胞中表达，以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究。方法：应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2／Fc，回收后克隆到中间pGEM—T：Easy TA克隆载体，得到合适的酶切位点后，用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3．1中，得到真核重组载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc。然后用脂质体法转染SP2／0细胞。结果：对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析，证明连接正确；经ELISA检测证实，该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。结论：成功构建了真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在SP2／0细胞中有效表达。     

The Gene Expression Patterns of Peripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Systemic Lupus Erythematosus

This study examined the gene expression patterns of peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) in patients with systemic lupus erythematosus(SLE) by using serial analysis of gene ex-pression(SAGE) technology.Following the construction of serial analysis of gene expression(SAGE) library of PBMCs collected from 3 cases of familial SLE patients,a large scale of tag sequencing was performed.The data extracted from sequencing files was analyzed with SAGE 2000 V 4.5 software.The top 30 expressed genes of SLE patients were uploaded to http://david.niaid.nih.gov/david/ease.htm and the functional classification of genes was obtained.The differences among those expressed gene were analyzed by Chi-square tests.The results showed that a total of 1286 unique SAGE tags were identified from 1814 individual SAGE tags.Among the 1286 unique tags,86.8% had single copy,and only 0.2% tags had more than 20 copies.And 68.4% of the tags matched known expressed sequences,41.1% of which matched more than one known expressed sequence.About 31.6% of the tags had no match and could represent potentially novel genes.Ap-proximately one third of the top 30 genes were ribosomal protein,and the rest were genes related to metabolism or with unknown functions.Eight tags were found to express differentially in SAGE li-brary of SLE patients.This study draws a profile of gene expression patterns of PBMCs in patients with SLE.Comparison of SAGE database from PBMCs between normal individuals and SLE pa-tients will help us to better understand the pathogenesis of SLE.     

半定量RT-PCR检测细胞因子表达的研究

目的：建立一种客观、敏感的检测IL-2／IL-4细胞因子基因表达变化的方法。方法：采用TRIzol试剂提取免疫排斥／免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA，分光光度计法定量。取2μg总RNA．采用RT—PCR法逆转录-扩增IL-2、IL-4和内参照β-actin cDNA。扩增产物经电泳分离后。用凝胶图像分析仪照相和扫描分析，检测其相对表达量。结果；RT—PCR产物经电泳后。β-actin、IL-2和IL-4分别在226bp、342bp和332bp处出现明显条带，与预定条带大小相一致；免疫耐受组IL-4与免疫排斥组IL-2的表达有明显差异．在免疫耐受组中IL-4表达增高，而在免疫排斥组中IL-2表达增高，内参照β-actin扩增条带亮度在两组中相同，PCR产物量与扩增初始模板量之间存在良好的对应关系。结论：半定量RT—PCR检测是-种从少量细胞中快速、简便、可靠地检测特异基因mRNA表达的方法。     

体外培养的人脐血单个核细胞MAP2及τ蛋白mRNA的表达

目的:探讨脐血单个核细胞(MNCs)体外培养前后微管相关蛋白2(MAP2)和τ蛋白mRNA的表达.方法:用密度梯度离心法分离脐血MNCs,分组培养.对照组不加任何细胞因子,细胞因子组加入EGF和bFGF,终浓度均为20μg/L,每3 d半量换液1次,共14 d.倒置显微镜下观察培养过程中细胞形态的变化,RT-PCR法检测脐血MNCs培养前后τ蛋白及MAP2 mRNA的表达.结果:培养前,脐血MNCs胞体小呈圆形.培养后细胞因子组细胞胞体较大,有粗长突起形成,类似神经元;对照组细胞胞体较小,突起较短、较细,形似星形细胞.培养前脐血MNCsτ蛋白mRNA阴性表达,而MAP2 mRNA表达阳性;培养后2者均表达阳性,且细胞因子组2者阳性表达强于对照组(P＜0.05).结论:脐血MNCs表达MAP2 mRNA,经培养后同时表达τ蛋白mRNA,细胞因子能增强2者的表达.     

子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1、Th2型细胞因子功能变化研究

目的研究子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子功能变化.方法子痫前期患者29例,正常妊娠妇女15例,分离外周血单个核细胞,体外培养72小时,ELISA方法检测培养上清液中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平.结果子痫前期组PBMC培养上清液中,Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平(259.4±90.5)pg/mL,(452.0±122.6)=pg/mL与正常妊娠组(140.3±73.2)pg/mL,(307.5±106.4)pg/mL相比,显著升高,分别为P＜0.01,P＜0.05;Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平(28.8±7.7)pg/mL,(178.9±98.6)pg/mL与正常妊娠组(41.9±11.4)pg/mL,(316.1±284.6)pg/mL相比,显著下降,分别为P＜0.01,P＜0.05.结论子痫前期患者外周血单个核细胞分泌Th1型细胞因子功能增强,分泌Th2型细胞因子功能减弱.     

MUC4 mRNA在胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的研究MUC4 mRNA在人胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义.方法采用逆转录实时PCR法检测20例胰腺癌、12例慢性胰腺炎患者及8例健康志愿者外周血单个核细胞中MUC4 mRNA的表达.结果MUC4 mRNA在慢性胰腺炎患者及健康志愿者外周血单个核细胞中无表达,20例胰腺癌患者中有12例表达,其阳性表达率(60%)明显高于慢性胰腺炎组及健康对照组(P均＜0.01).MUC4 mRNA阳性表达率有随胰腺癌临床分期增加而逐渐增高的趋势,在临床TNM Ⅲ～Ⅳ期中的阳性表达率(76.92%)明显高于Ⅰ～Ⅱ期(28.57%)(P＜0.05).结论胰腺癌患者外周血MUC4 mBNA的表达与临床分期具有高度相关性,可用于胰腺癌的早期诊断和鉴别诊断.