2型糖尿病脑梗塞与血小板α-颗粒膜糖蛋白水平

在许多血栓性疾病中，血小板活化起着非常关键的作用。活化血小板与静止血小板相比，质膜糖蛋白常发生显著变化，尤其存在于a颗粒膜上的GMP-140在血小板表面大量表达。GMP-140是由内皮细胞和血小板合成的一种粘附分子(P选择素)，能介导血小板和内皮细胞、白细胞和内皮细胞之间的粘附，在血小板和内皮细胞受到刺激时表达增加，故GMP-140     

细胞相互作用和阿托伐他汀对内皮细胞与系膜细胞PAF及其受体基因表达的影响

目的探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对血小板活化因子（PAF）产生、系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R）基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖＋高溶血卵磷脂组、阿托伐他汀干预组,采用实时荧光定量检测系膜细胞PAF-R mRNA表达、酶联免疫吸附法检测PAF含量。结果共培养组和单培养组在高糖高溶血卵磷脂条件下,PAF和系膜细胞PAF-R mRNA表达均升高（P〈0.05）,单培养PAF均较共培养下降（P〈0.05）;阿托伐他汀可抑制高糖高溶血卵磷脂引起的PAF和系膜细胞PAF-R mRNA表达上调（P〈0.05）。结论系膜细胞和内皮细胞在高糖高溶血卵磷脂培养下,存在相互作用,并促进PAF产生和系膜细胞PAF-R基因表达。阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用,减少PAF的产生及下调系膜细胞PAF-R基因表达。     

P-选择素研究进展

P-选择素是相对分子质量为140 000的糖蛋白,存在于血管内皮细胞的Weibel-Palade小体膜上及血小板α颗粒膜上,在受到组织胺、凝血酶、佛波酯和钙离子载体A23187的刺激后,其迅速在质膜上表达,缺氧/再氧化或氧自由基也可诱导表达.P-选择素凝集素样区是配体结合部位的关键序列,其配体是唾液酸化路易斯（S-Lewisx）,高亲和力的配体是P-选择素糖蛋白配体1（P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1）,主要表达于中性粒细胞和单核细胞,因此P-选择素主要介导粒细胞和单核细胞在内皮细胞表面的滚动、粒细胞和单核细胞与血小板的黏附.……     

甘糖酯抗实验性内皮细胞损伤作用的研究

给大鼠、家兔灌服甘糖酯（ＰＧＭＳ）后，有抗去中肾上腺素、组胺致血管内皮损伤的作用，表现为主动脉壁摄入伊文思蓝减少，内皮依赖的乙酰胆碱（Ａｃｈ）松弛血管平滑肌作用改善，扫描电镜示动脉内皮细胞受去甲肾上腺素损伤减轻。提示甘糖酯有预防动脉粥样硬化发病的作用，可能与其保护了血管内皮细胞有关。     

腺苷二磷酸在凝血酶信号传递过程中的作用

目的比较腺苷二磷酸（ADP）在两类凝血酶受体活化过程中对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物表达的影响,探讨ADP在凝血酶信号传递机制中的作用。方法分别以凝血酶受体（PAR）活化肽PAR1-AP与PAR4-AP诱导血小板活化,观测腺苷三磷酸双磷酸酶（Apyrase,ADP抑制剂）ⅤⅡ作用过程中血小板聚集以及血小板膜表面糖蛋白（GP）Ib与P-选择素的改变。结果两类凝血酶受体都能诱导血小板活化,产生完全的聚集波,血小板膜GPIb则呈现先进行性减少后逐渐回升的可逆性变化,P-选择素水平持续升高。ApyraseⅤⅡ作用后,PAR1-AP诱导的血小板聚集反应受到部分抑制,而PAR4-AP诱导的血小板聚集反应未有明显改变。ApyraseVⅡ加速PAR1途径GPIb回复细胞表面,对PAR4途径中GPIb的改变则没有显著影响。两种活化途径中P-选择素的表达都不受ApyraseVⅡ的影响。结论ADP在凝血酶信号传递过程中发挥重要作用,其中PAR1途径与ADP参与密切相关．     

反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,探讨反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 .方法 :通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ,用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体ODNs 抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ,用Western -Blot检测反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 .结果 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 0 5 ) ,明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 .结论 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,其抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 ,特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达来完成 .     

高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的：探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用。方法：建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型，分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36h后，应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果：高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1 mRNA表达，其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞，茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF--β1 mRNA表达，且效果优于单独培养。结论：(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞问存在相互作用，这种作用能促进两种细胞TGF-β1 mRNA高表达。(2)茶多酚通过对TGF-β1 mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用。     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞胶原蛋白合成的影响.方法:采用培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞,应用3H-脯氨酸掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对3种细胞胶原蛋白合成的影响.结果:血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成分别在30 ng/ml和40 ng/ml时达到高峰,血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.在30 ng/ml的血小板衍生生长因子-BB作用下,成纤维细胞和平滑肌细胞分别在36 h和48 h时胶原蛋白合成达到高峰.结论:血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞和成纤维细胞的胶原蛋白的合成,对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.     

活化血小板、白细胞粘附分子与急性缺血性脑血管病关系

在动物实验中已发现，脑缺血急性期，血小板表面P-选择素(CD62p)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，TBP)、血小板源内皮细胞粘附分子(CD31)、白细胞表面细胞间粘附分子(ICAM-1)和血管细胞粘附分子(VCAM-1)等表达增加，参与脑缺血发病。但在脑缺血患者急性期血中血小板和白细胞表面的上述分子物的变化尚不清楚，我们采用流式细胞术检测活化血小板、白细胞粘附分子，     

胰岛素对全血血小板膜P-选择素表达影响的研究

目的探讨胰岛素对血小板膜P-选择素表达的影响。方法建议全血血小板膜P-选择素表达的流式细胞术(FCM)测定方法，观察健康青年人胰岛素在静止和活化状态下对血小板膜P-选择素表达的影响。结果胰岛素对正常人静息血小板膜P-选择素表达无明显影响；而显著抑制凝血酶、胶原活化的血小板膜P-选择素的上调表达，且该效应呈剂量和时间依赖性。结论胰岛素可抑制活化血小板膜P-选择素的表达。     

阿司匹林抑制急性心肌梗死患者血小板与白细胞的粘附

目的　研究阿司匹林（乙酰水杨酸,ＡＳＡ）对急性心肌梗死（ＡＭＩ）患者血小板与白细胞粘附的影响及其作用机制。方法　采用体外玫瑰花结形成实验检测血小板与白细胞粘附,观察ＡＳＡ 对两者粘附的作用;用１２５Ｉ标记的单克隆抗体测定血小板表面α颗粒膜蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的表达,观察ＡＳＡ对凝血酶诱导的血小板表面ＧＭＰ１４０ 表达的影响。结果　ＡＭＩ患者血小板与白细胞间粘附率增高,凝血酶通过诱导血小板表面ＧＭＰ１４０ 的表达促进血小板与白细胞粘附;阿司匹林（５００、５ ０００μｇ／ｍ ｌ）抑制ＡＭＩ患者血小板与白细胞间的粘附,抑制凝血酶诱导的正常人血小板与白细胞间的粘附以及凝血酶诱导的血小板表面ＧＭＰ１４０ 的表达。结论　ＡＳＡ一方面通过抑制ＧＭＰ１４０ 的表达,另一方面可能通过影响配体间的结合抑制血小板与白细胞之间的粘附,揭示了ＡＳＡ 抗栓作用的另外一种机制     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

人脐带间充质干细胞培养上清液对甲状腺乳头状癌细胞诱导人脐静脉内皮细胞血管形成的影响

目的: 探讨人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）血管形成的作用。方法: 使用不同浓度的hUCMSCs培养上清液（hUCMSC-CM）刺激甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1;采用基质胶小管形成实验检测经hUCMSC-CM作用后的TPC-1细胞对HUVEC血管形成的影响;CCK-8法检测hUCMSC-CM对TPC-1细胞增殖能力的影响;实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测经hUCMSC-CM作用后的TPC-1细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的mRNA和蛋白表达及其培养上清液中VEGF的含量。结果： 与对照组相比,hUCMSC-CM可显著抑制TPC-1细胞的增殖（P<0.05和P<0.01）;经hUCMSC-CM刺激后的TPC-1细胞诱导HUVEC血管形成能力显著下调（P<0.001）,且TPC-1细胞中VEGF的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.001）,其培养上清液中VEGF含量显著降低（P<0.05）。结论： hUCMSC-CM可显著下调TPC-1细胞中VEGF的表达及分泌,抑制TPC-1细胞诱导HUVEC血管形成的能力。     

烟曲霉醇联合健择抑制人肺腺癌细胞和脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达

目的研究烟曲霉醇（TNP-470）联合健择（Gem）对人肺腺癌细胞（A549）和人脐静脉内皮细胞（ECV-304）血管内皮生长因子（VEGF）及其受体FLT-1、KDR表达的抑制作用。方法不同浓度的Gem（10^6-10^-4mg／m1）和TNP-470（10^-3mg／ml）单用或联合处理A549和ECV-304细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测药物对细胞的毒性及增殖的影响，用半定量RT-PCR法和蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测药物对细胞VEGF及其受体FLT-1和KDR的基因及蛋白表达的影响。结果Gem和TNP-470对两种细胞的增殖活性均有抑制作用（Gem的IC50为10^-4mg/ml；TNP-470的IC50为10^-2mg／ml），Gem联合TNP-470能明显抑制两种细胞VEGF及受体的mRNA和蛋白表达水平。结论TNP-470联合Gem能显著抑制A549、ECV-304细胞的VEGF、FIX-1和KDR的核酸和蛋白的表达，具有协同抗肿瘤作用。     

Polysaccharide sulfate 916 inhibits neutrophil-endothelial adhesion

Objective To study the effect of polysaccharide sulfate 916 (PS916) on neutrophil-endothelial cell adhesion.Methods Cell adhesion was evaluated by testing neutrophil myeloperoxidase activity.Expression of adhesion molecule in human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) was measured by ELISA.The neutrophil activation rate induced by N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP) was tested by nitroblue tetrazolium (NBT) reduction.Results Tumor necrosis factor alpha (TNFα, 50-800 U/ml) increased the adherence of neutrophil to TNFα-stimulated HUVEC in a concentration and time dependent manner.PS916 (0.01-1.0 mg/ml) dose-dependently inhibited the adherence of neutrophils to TNFα-stimulated HUVEC.fMLP increased the activation rate of neutrophils independent of concentration.PS916 also inhibited the adherence of fMLP-activated neutrophils to HUVEC.Moreover, PS916 inhibited adhesion molecule expression in TNFα-stimulated HUVEC.Conclusions PS916 inhibited neutrophil-endothelial adhesion.The mechanism of its action was partially related to suppressing the expressions of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and vascular adhesion molecule-1 (VCAM-1)     

NAC对体外循环血清诱导的多形核粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响

目的 观察N－乙酰－L－半胱氨酸（NAC）对体外循环（CPB）血清诱导的培养血管内皮细胞细胞间粘附分子1（ICAM－1）的表达及对多形核粒细胞（PMN）粘附的影响,探讨NAC对体外循环后全身炎症反应的作用及机制。方法 以CPB血清加NAC处理培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用中性粒细胞－血管内皮细胞粘队模型研究HUVEC对PMN的粘附作用,以免疫组化方法观察培养血管内皮细胞表达ICAM－1的表达。结果 NAC加入CPB血清共同处理HUVEC,能抑制CPB血清诱导的HUVEC对PMN的粘附增加,下调CPB血清诱导的HUVEC表面ICAM－1表达的增高。结论 NAC通过抑制内皮细胞表达ICAM－1的表达,可抑制体外循环诱导的PMN与血管内皮细胞的粘附,从而可能在体外循环后全身炎症反应的防治中发挥作用。     

Shh在血管瘤中的表达及意义

目的 测定音猬因子(sonic hedgehog,Shh)在血管瘤内皮细胞(Hemangioma endothelial cells,HEC)和脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中的表达,探讨Shh与血管瘤及人脐静脉的关系.方法 采用实时荧光定量PCR方法,对临床收集的18例手术切除的新鲜增生期血管瘤病变标本和18例新鲜脐静脉标本,进行实时荧光定量PCR检测Shh表达水平.结果 Shh表达水平在增生期血管瘤明显升高,与脐静脉比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Shh可能促进血管瘤的生长,可能对血管瘤的病理发生过程发挥作用,但对脐静脉无作用.     

内毒素对培养人脐静脉内皮细胞高能磷酸合成的影响

目的 探讨内毒素（LPS）对血管内皮细胞高能磷酸合成的影响及其分子基础。方法 通过抑制消减杂交克隆培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）LPS刺激6h后差异表达的基因，测序后得到一个下调表达的203bp序列，与线粒体ATP合酶同源，扩增该序列并标记为探针，进行Northern杂交验证；测定胞内高能磷酸含量。结果 LPS刺激后，HUVEC内线粒体ATP合成酶基因表达下调，胞内ATP含量和能荷值显著降低。结论 LPS通过调控内皮细胞线粒体ATP合酶基因的表达，抑制线粒体呼吸功能，致细胞能量合成减少而影响细胞功能。     

肿瘤坏死因子对培养内皮细胞影响的实验研究

本文以原代培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)为材料,研究了肿瘤坏死因子(TNF)对其产生组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性的影响,并观察了细胞的形态变化。结果表明,100、250和500U/ml的TNF可以刺激HUVEC产生较高的PAI活性,但2500U/ml TNF则能明显抑制PAI活性,并可造成HUVEC的损伤和形成与循环内皮细胞(CEC)极为相似的细胞形态。提示TNF可以刺激HUVEC产生PAI活性,并且,高浓度TNF可造成HUVEC功能和结构的损害。     

人碱性成纤维细胞生长因子腺病毒表达载体的构建及其在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的:构建人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast cell growth factor,bFGF)腺病毒载体,并观察其在体外血管内皮细胞中的表达.方法:采用同源重组的方法,构建重组腺病毒Ad5-bFGF.携有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)的Ad5腺病毒转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),检测最佳转染复数.Ad5-bFGF体外转染HUVEC,免疫细胞化学法、Western印迹法检测bFGF蛋白的表达.结果:Ad5转染HUVEC的最佳转染复数为200,转染率为90%.免疫细胞化学法和Western印迹结果显示bFGF基因以Ad5为载体可以在HUVEC的胞质和胞核表达,并且表达量较未转染的HUVEC明显增加.结论:成功构建了携带bFGF基因的腺病毒载体,体外可以成功表达,为bFGF基因治疗及肿瘤发病机制的研究奠定了基础.