人抗甲肝噬菌体抗体重链可变区基因的序列分析

目的：对人抗甲肝病毒噬菌体抗体阳性克隆５９７和６４６，进行重链ＤＮＡ序列分析，方法：用Ｓａｎｇｅｒ末端终止测定序列，计算机软件进行分析。结果：经同源性分析，这两个克隆的同源基因均来源于人免疫球蛋白重链基因序列，氨基酸序列推导可知，克隆６４６重链Ｆｄ基因和克隆５９７重链可变区基因均为单一开放读框，各编码２２５个氨基酸和１１９个氨基酸，２株克隆重链可变区含有明确的四个框架区和３个抗原决定互补区，结论：     

抗CD_3鼠/人嵌合抗体基因的构建及表达 I.CD_3单抗重链可变区基因的克隆及序列测定

以人工合成的小鼠免疫球蛋白重链可变区(V_H)基因特异的寡核苷酸片段为引物,用PCR法成功地进行了HIT_3a(抗CD_3单克隆抗体)V_H基因的扩增,并将扩增片段克隆进了pGEM-7Zf(+)质粒DNA中,重组质粒序列测定的结果表明,片段大小为353 bp,基因重排方式为VDJ_4。     

抗乳腺癌单抗CDI 315B可变区基因的序列分析

目的：克隆抗乳腺癌ＣＤＩ３１５Ｂ单抗可变区基因,并对其进行序列分析。方法：利用前导肽序列设计引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＣＤＩ３１５Ｂ分离克隆了抗体轻重链可变区基因,用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定扩增的ＣＤＩ３１５Ｂ单抗的ＶＫ和ＶＨ基因的序列,对其进行序列分析。结果：和国际标准的小鼠Ｋａｂａｔ分类体系进行对比分析,ＣＤＩ３１５Ｂ单抗的ＶＫ属于第４或第５组的     

抗人黑色素瘤单抗重链可变区基因的克隆和序列测定

我们已报道了抗人黑色素瘤单克隆抗体Leo Mel3的轻链可变区基因序列。作者现报道该抗体重链可变区基因的克隆和序列分析结果。1 材料和方法 同文献[1]。2 结果 PCR之后进行琼脂糖凝胶电泳,见扩增     

抗人黑色素瘤单抗HB8759轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

获得新的鼠抗人黑色素瘤单Ｒ抗ＨＢ８７５９轻，重链可变区基因，以便对其进行基因工程改造。方法：采用反转录－ＰＣＲ从杂交瘤细胞中扩增抗体轻，重链可变区基因，测定ＤＮＡ序列，输入计算机分析，并在大肠杆菌中表达。结论：ＶＨ，ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的：获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因，方法：用一步法提取总RNA，逆转录形成cDNA，设计并合成一套扩增小鼠重，轻链可变区的通用引物，通过PCR扩增基因，分别克隆入pMD18-T载体中，作核苷酸序列分析。结果：用重链引物扩增获得长约350bp的片段，用轻链引物扩增获得长约330bp的片段，序列测定获得它们的DNA序列，结论：克隆的重链可变区基因长度为348bp，属于小鼠H链可变区IA亚组；克隆的轻链可变区基因长度为336bp ，属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。     

鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获得长约350bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论克隆的重链可变区基因长度为348bp,属于小鼠H链可变区IA亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336bp,属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。     

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

用聚合酶链反应制备抗端粒酶蛋白重链和轻链可变区基因

目的：为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因,方法：采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的E-coli JM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT,并免疫小鼠,从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA,逆转录成cDNA,以逆转录合成的cDNA第一条链为模板,分别用VH和VL引物,通过PCR进行,结果：PCR扩增反应产生350bp大小的抗hTERT重链和轻链可变区基因,VH和VL基因片段的获得为进一步制备抗hTERT单功能区抗体（dABs)和单链抗体ScFv奠定了实验基础。结论：提示该方法具有稳定性好,易于重复,扩增后VH和VL量较高的优点。     

抗HBsAg人源噬菌体抗体重链基因的序列分析

应用噬菌体抗体库技术筛选抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体重链基因，并用基因序列分析技术对其进行序列分析。结果：筛选出抗ＡＢｓＡｇ人源噬菌体抗体并发现其重链基因序列与人免疫球蛋白重链基因序列同源性可达９５％以上，且与人免疫球蛋白第Ⅲ家族的框架区基因序列同源性均可高达９７％。结论：筛选的抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体的重链基因属于人免疫球蛋白基因第Ⅲ家族成员     

SZ—63单链抗体的基因构建、表达及免疫性研究

目的：基因构建与表达SZ-63单链抗体(SZ-63scFv)，降低单克隆抗体对人体的免疫源性。方法：运用基因工程手段通过一段小分子连接肽(Gly4Ser)3将SZ-63抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因连接，构建成pET22b-63scFv表达载体，并导入大肠杆菌BL21（DE3）plys中进行表达，同时进行表达特性的研究。结果：pET22b-63scFv在BL21（DE）3plys中经IPTG诱导后，SZ-63scFv以包涵体形式存在，经复性处理后具有与纤维蛋白D—二聚体结合的活性，其表达量占菌体总蛋白的18％，SZ-63scFv具有13mg／g湿菌的表达量。结论：成功地获得了SZ-63scFv单链抗体并保留了与亲本抗体同一的抗体结合特性。     

聚合酶链反应扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因

目的利用二次聚合酶链反应(PCR)扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,并将其克隆到T载体进行测序验证。方法收集50例动脉粥样硬化患者外周动脉血标本,密度梯度离心法分离淋巴细胞,TR Izol法提取总RNA,用逆转录-PCR扩增轻链可变区基因(包括VK和Vλ)和重链可变区基因(VH),分别酶切后克隆到T载体上,随机挑取2个克隆进行测序验证。结果总RNA的纯度和完整性都较好,经过2次PCR成功扩增出了抗体全套轻、重链可变区基因。测序结果与已有的人抗体基因的序列高度同源。结论该方法成功扩增出了人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,为下一步噬菌体单链抗体库的构建和筛选奠定了基础。     

抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化

提取抗２型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞ｍＲＮＡ和ＤＮＡ反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＰＣＲ扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区（ＶＨ）基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果;该ＶＨ基因约４５０ｂｐ。实验证明,上述两种方法均是分离和扩增ＶＨ基因的有效方法,但提取ＤＮＡ后进行ＰＣＲ较提取ｍＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ经济,简单。     

可溶性白细胞介素—6受体基因的扩增,克隆及序列分析

从Ｈｅｌａ细胞中提取总ＲＮＡ，以此总ＲＮＡ为模板，应用反转录ＰＣＲ方法扩增可溶性白细胞介素－６受体基因，把得到的基因片段重组到质粒ＰＵＣ１９上，经转化、筛选和鉴定得到含有可溶性白细胞介素－６受体基因的克隆。测定其全部９９９ｂｐ核苷酸顺序，测出的核苷酸顺序与文献报道的顺序有二处不同，据此推导出的氨基酸顺序有二处变化。     

抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备和初步鉴定

目的探讨抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备并对其进行初步鉴定。方法用人胰腺癌细胞株Patu8988作为免疫原,利用杂交瘤技术制备抗人胰腺癌单克隆抗体,应用流式细胞术和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果成功获得一株能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系SZ-121,该抗体与胰腺癌组织呈阳性反应,与胰腺良性病变组织呈弱阳性反应。结论单抗SZ-121对胰腺癌的早期诊断可能具有一定的潜在价值。     

鼠抗CD4抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

为获得鼠抗人T细胞分化抗原4分子单抗的轻链及重链可变区基因。采用RT－PCR技术，从WuT4细胞总RNA中扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析，发现RT－PCR扩增出来的两条轻链和一条重链可变区基因分别为400bp左右，构建的pMD18T-VL和pMD18T-VH重组克隆载体，酶切与预期结果相符。测序得到它们的DNA序列。结果表明，克隆的两条轻链可变区基因序列一致，长度均为324bp，属于鼠轻链Ⅳ亚类。克隆的重链可变区基因长度为375bp，属于鼠重链Ⅱ(C)亚类。     

应用聚合酶链反应扩增HIV—1gag基因序列

作者设计了一对DNA引物,用于扩增1型人免疫缺陷病毒(HIV—1)gag基因的一段保守序列。应用聚合酶链反应(PCR)技术,采用含有ARV-2gag基因的亚克隆质粒pAG423作模板,可以使靶基因片段数目增加1×10~7倍以上,经电泳染色后,扩增产物清晰可辨。实验结果表明,这种方法的敏感性极高,足以检测到6.5个拷贝的HIV-1基因。用特异性DNA探针打点杂交证实扩增产物为特异性gag基因片段。实验还表明,经过30～35次PCR循环可以得到最佳扩增效果,而且应用PCR和打点杂交方法还可以对HIV-1基因进行定量分析。因而PCR是一种可以取代病毒分离的常规测定HIV-1感染的简便方法。     

聚合酶链反应用于人巨细胞病毒B基因编码区段的体外扩增

作者采用聚合酶链反应(PCR)成功地从含人巨细胞病毒B基因的重组质粒pBH_2DNA中扩增及分离了B基因编码区段及其产物糖蛋白52kd抗原编码区段。0.2μg的模板DNA经过30次循环,目的基因片段的扩增量达到10μg,足以用于酶谱分析及克隆的构建。