人肝癌细胞敲低Rab27 B后的差异蛋白质组初步研究

目的：通过分析敲低Rab27B后肝癌细胞蛋白质表达的变化,研究其在肿瘤细胞中的作用及可能的分子机制。方法在人肝癌细胞系MHCC97H中利用Tet-on系统和RNA干扰（RNAi）技术敲低Rab27B 表达,利用iTRAQ定量蛋白质组学技术比较敲低前后肿瘤细胞蛋白表达的差异,并对其进行亚细胞定位、生物过程和分子功能等生物信息学分析。结果 MHCC97H细胞敲低Rab27B后共鉴定到448种差异蛋白[比值（｜Ratio｜）＞1．21, P＜0．05],其中表达趋势与Rab27B正相关的蛋白229种,负相关的蛋白219种。差异蛋白主要涉及囊泡运输、大分子定位、胞内应激等生物过程,有26种差异蛋白分布于8个肿瘤相关信号通路中,其中11种集中在黏着斑（ focal adhesion）信号通路。结论对Rab27B敲低前后MHCC97H细胞全蛋白的iTRAQ分析表明,Rab27B不仅能影响肿瘤细胞的外泌体分泌,还能引起与细胞增殖和迁移等相关的信号通路中重要蛋白的变化,提示Rab27B确实具有调控肿瘤细胞增殖和迁移的分子基础。     

VEGF、P27蛋白在胆管癌中的表达、CT及临床意义

目的：探讨VEGF、P27蛋白在胆管癌组织中的表达以及临床意义。方法：采用免疫组化法检测46例胆管癌组织及30例正常胆管组织中VEGF、P27蛋白的表达。结果：46例胆管癌中VECF、P27蛋白的阳性表达率分别为63．1％（29／46）和36．9％（17／46）,而在正常胆管组织中分别是16．6％（5／30）和73．3％（22／30）,差异均有统计学意义（P〈0．05）。胆管癌中VEGF、P27蛋白的表达与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤部位无关（P〉0．05）,而与肿瘤分化程度和淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论：胆管癌中VEGF的高表达和P27蛋白低表达可能与胆管癌的发生、发展、转移有关,联合检测对胆管癌的预后判断提供帮助。     

喉鳞癌与癌旁组织中垂体肿瘤转化基因（PTTG）和活素蛋白表达的相关性

目的探讨喉鳞癌组织中垂体肿瘤转化基因（PTTG）和活素蛋白（1ivin）的表达及其作为喉鳞癌诊断标志和基因治疗靶点的可能性。方法采用免疫组化sP法检测PTTG和活素蛋白在52例喉鳞癌患者癌组织和相应癌旁组织中的表达,并分析PTTG和活素蛋白阳性表达与喉鳞癌分化程度、临床分期和淋巴结转移等的相关性。结果与结论在喉鳞癌组织中,PTTG和活素蛋白的阳性表达率分别为71．2％和73．1％,均显著高于癌旁组织的阳性表达率（分别为38．5％和9．6％,P〈0．01）。PTTG和活素蛋白阳性表达率分别与喉鳞癌的分化程度、临床分期和淋巴结转移相关（P〈0．05）,与喉鳞癌组织临床分型、肿瘤大小以及患者性别、年龄和吸烟量无相关性（P〉0．05）;同时,PTTG蛋白与活素蛋白在喉鳞癌组织的表达呈正相关（r=0．676,P=0．002）。PTTG和活素蛋白在喉鳞癌组织中均高表达,二者有望成为喉鳞癌诊断标志和基因治疗新靶点。     

胰腺导管癌组织中VEGF表达和肿瘤微血管计数的临床意义

目的探讨胰腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达、肿瘤微血管(MVD))计数与肿瘤临床病理学特征,研究胰腺肿瘤的预后因素。方法选择病理证实为胰腺导管腺癌且资料完整的48例石蜡切块标本,应用免疫组织化学的方法进行VEGF蛋白检测及MVD计数,与正常胰腺组织及癌旁组织对照,并结合病人临床病理资料进行分析。结果胰腺癌组织中VEGF表达阳性率为64．58％(31／48)。MVD计数为10～34个,中位数为21。VEGF蛋白表达与MVD计数有明显相关性(P＜0．01)。VEGF蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移和肿瘤TNM分期都有相关性,肿瘤≥2cm比＜2cm的VEGF表达阳性率高(P＜O．05)。有淋巴结转移者VEGF表达阳性率高(P＜0．01)。肿瘤TNM分期Ⅲ～Ⅳ期比Ⅰ～Ⅱ期VEGF表达阳性率高(P＜0．05)。COX分析显示,VEGF蛋白表达及MVD计数与病人生成时间有关。VEGF表达阳性,死亡危险度大;MVD个数多者,死亡危险度大。结论血管生存在胰腺癌的发生、发展和转移过程中起着重要的作用,VEGF和MVD可作为评价胰腺癌预后的指标之一,抗血管治疗可能成为胰腺癌的一种新的治疗手段。     

大肠癌APE1的表达特点及临床意义

目的 探讨脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶（APE1）在大肠癌发生、发展中的作用。方法 应用免疫组化SP法检测125例大肠癌、72例大肠腺瘤、60例癌旁大肠黏膜和40例正常大肠黏膜中APE1的表达情况,并分析APE1与大肠癌临床病理之间的关系。结果 正常大肠黏膜APE1呈胞核表达,大肠腺瘤和大肠癌组织APE1表达特征发生改变,呈胞核表达、单纯胞质表达或核浆共同表达。APE1胞质异位表达率大肠癌组织为73．6％,大肠腺瘤组织为83．3％,二者无显著性差异（P〉0．05）,但均显著高于癌旁大肠黏膜（10％）和正常大肠黏膜（0％,P〈0．01）。APE1胞质异位表达与大肠癌临床分期和淋巴结转移有关（P〈0．01,P〈0．05）。结论 APE1胞质异位表达可能在大肠癌的发生、发展中起重要作用。     

Fas/APO-1基因表达与食管鳞状细胞癌分级的相关性及意义

目的：探讨Fas/APO-1基因蛋白的表达与食管鳞状细胞癌发生发展的关系。方法：应用免疫组织化学方法，对78例人食管鳞状细胞癌及20例癌旁组织标本的Fas/APO-1蛋白的表达分别进行了检测。结果：在78例食管鳞癌组织中，Fas/APO-1基因蛋白阳性表达率为47．4％（37／78），与癌旁正常组织（阳性表达率为5％）相差显著（P＜0．05）。其中I、Ⅱ、Ⅲ期阳性率分别为18．2％、48．3％及55．3％，Fas/APO-1的表达同食管癌TNM分期存在相关趋势（P＜0．05）。结论：Fas/APO-1基因可能在食管癌的发生发展中起重要作用，对判断食管癌的预后有一定的价值。     

子宫颈癌多层螺旋CT灌注成像研究

目的：分析子宫颈癌（cervical cancer）CT灌注参数的特点及其临床应用价值。方法：分析临床诊断子宫颈癌的31例患者行子宫颈CT灌注扫描,所有患者均经手术病理证实,将癌旁相对正常宫颈组织15例作为对照。根据灌注所得图像得到时间-密度曲线,分析的灌注参数包括灌注值（PF）、血容量（BV）、强化峰值时间（TTP）和强化峰值（PEI）,并结合病理结果作分组灌注参数分析。结果：宫颈癌灌注时间-密度曲线TDC特点为速升速降型．短时间达峰值,峰值高于癌旁对照组织。肿瘤组的PF、BV、PEI值分别为（42．70±27．48）ml／min·100g、（39．94±21．35）ml／100g、（37．28±13．00）HU,癌旁对照组织PF、BV、PEI值分别为（8．03±3．22）ml,／min·100g、（27．68±14．53）ml／100g、（26．17±7．75）HU,肿瘤组的TTP值为（30．51±20．79）s,癌旁对照组织TTP值为（76．11±2．91）s,各组间差异有显著性意义（P〈0．05）。PEI值腺癌组（46．49±17．01）HU高于鳞癌组（35．83±10．36）HU,淋巴结转移组（53．94±17．83）HU高于无淋巴结转移组（34．08±9．27）HU,TTP值淋巴结转移组（18．43±2．14）s低于无淋巴结转移组（32．08±21．98）s,各组差异有显著性意义（P〈o．05）。结论：子宫颈癌为高血流灌注肿瘤,CT灌注参数反映肿瘤的血流特点和肿瘤内部的灌注情况,肿瘤CT灌注参数不同于癌旁对照组织的灌注参数,肿瘤的分期不同、分化程度不同、病理分型不同、有无淋巴结转移均有部分灌注拳数的改变,因此CT灌注对肿瘤的分期和预后估计有意义。     

Grp-94在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的研究葡萄糖调节蛋白94（Grp-94）在子宫内膜癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法应用免疫组化S—P法检测50例子宫内膜癌组织中Grp-94表达,同时回顾性研究了表达与子宫内膜癌发生、浸润及转移等临床病理学参数的关系。结果在50例子宫内膜癌组织中,Grp-94的阳性表达率为68．0％（34／50）,对照组织中Grp-94的阳性表达率为6．0％（3／50）,子宫内膜癌组织中的阳性表达率高于对照组织的阳性表达率,两组间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。不同分化程度高分化、中分化、低分化Grp-94的阳性表达检出率分别为56．5％、70．0％和82.4％。三者比较,r=6．0．P〈0．05．统计学差异有显著性,随着分化程度的恶化,Grp-94的阳性表达增高。无淋巴结和有淋巴结转移Grp-94的阳性表达检出率分别为40．0％和86．7％,统计学检验显示,χ^2=24．0,P〈0．05,Grp-94的阳性表达在子宫内膜癌组织的表达升高与淋巴结转移明显相关。临床分期T Ⅰ～Ⅱ和TⅢ～ⅣGrp-94的阳性表达率分别为69．4％、64.3％,两者比较,χ^2=0．4,P〉0．05,统计差异无显著性。结论Grp-94与子宫内膜癌的发生发展关系密切,可成为子宫内膜癌转移及预后的标志物,与临床分期关系不密切。     

Survivin在胰腺癌组织中的表达及其与p53的相关性研究

目的 :探讨凋亡抑制蛋白survivin在胰腺癌组织中的表达和p5 3表达的关系。方法 :用免疫组织化学方法Envision法对 5 1例胰腺导管癌survivin和p5 3的表达进行检测。结果 :胰腺导管癌中survivin蛋白的表达率为 80 .4 % ,p5 3的表达率为 6 0 .8% ;二者在 11例癌旁非肿瘤胰腺组织中均未发现阳性表达。survivin的表达与组织学分级有关 (P <0 .0 1) ,而与临床分期和淋巴结转移关系不大 (P >0 .0 5 ) ;P5 3的表达与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,而与组织学分级和临床分期关系不大 (P >0 .0 5 ) ;sur vivin的表达与p5 3的表达密切相关 (P <0 .0 1)。结论 :Survivin和p5 3突变对凋亡抑制的协同作用可能在胰腺癌的发生发展过程中起关键作用。     

p21ras和VEGF在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测胰腺癌组织中的p21ras和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况，并探讨其与肿瘤临床病理因素的关系。方法选择48例病理证实为胰腺导管腺癌患者的手术切除石蜡切块标本，应用EnVision显色系统免疫组织化学方法进行p21ras和VEGF蛋白检测。结果胰腺癌组织中p21ras蛋白表达率为60．4％，其表达与胰腺癌患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤分期无明显火系；VEGF蛋白表达率为64.6％，其表达与肿瘤大小及TNM分期有关。p21ras表达阳性组的VEGF表达明显高于其阴性组（P〈0．05）。结论p21ras和VEGF在胰腺癌组织中均呈高表达，p21ras表达与VEGF蛋白表达有相关性，提示K-ras基因突变可上调VEGF表达。     

HER-2、Syk在胃癌中的表达及其临床意义

 目的 探讨人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)、脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)在胃癌中的表达及与胃癌的相关关系.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SP免疫组化技术,检测62例胃癌及癌旁组织中HER-2、Syk表达状况,与胃癌临床病理检测结果进行相关性统计分析.结果 胃癌组织中HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性率分别是11.29%和30.65%,均高于癌旁组织(P＜0.05);Syk mRNA、Syk蛋白阳性率分别为27.42%和22.58%,均低于癌旁组织(P＜0.05).淋巴结转移的胃癌组织中,HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移组(P＜0.05),Syk mRNA、Syk蛋白阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P＜0.05).HER-2表达与胃癌患病年龄、性别、肿瘤大小、部位均无相关性(P＞0.05),与肿瘤浸润深度、病理分期相关(P＜0.05),Syk表达与胃癌上述临床病理结果均无相关性(P＞0.05).HER-2蛋白与Syk蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关.结论 胃癌发生和转移与HER-2表达和Syk表达密切相关.检测HER-2、Syk对胃癌的治疗及其预后评估具有指导意义.     

肺癌MMP-9和VEGF的表达及意义

目的探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其意义。方法采用免疫组化S-P法检测20例癌旁正常肺组织、84例肺癌组织中MMP-9和VEGF的表达。结果肺癌组织MMP-9和VEGF表达显著高于癌旁正常肺组织（P〈0.01）。小细胞肺癌和腺癌MMP-9表达高于鳞癌（P〈0.01）。肺癌MMP-9表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P〈0.01）,Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期（P〈0.05）。肺癌VEGF表达有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P〈0.05）,Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期（P〈0.05）。肺癌MMP-9和VEGF的表达呈正相关（P〈0.05）。结论MMP-9和VEGF表达与肺癌侵袭转移密切相关。     

HIF-1α与E-cadherin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）及上皮钙依赖黏附蛋白（E-cadherin,E-cad）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测42例肺癌,23例癌旁组织中HIF-1α与E-cad的表达,并分析与NSCLC的预后关系。结果NSCLC中HIF-1α在肺癌组织内的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,有淋巴结转移组的表达高于无淋巴结转移组（P〈0.05）,并且在T3、T4期组中的表达高于T1、T2期组中的表达（P〈0.05）;E-cad在癌旁组织内表达显著高于癌组织（P〈0.01）,且与NSCLC淋巴结转移和TNM分期有关（P〈0.05）。结论HIF-1α与E-cad的表达与NSCLC的侵袭和转移相关。     

HIF-1α,VEGF-C在胃腺癌中表达及与淋巴结转移的关系

目的：研究缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子-C在胃腺癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系。方法：用免疫组化染色（S-P）法检测44例胃腺癌组织,20例胃正常组织中HIF-1α、VEGF-C的表达。结果：HIF-1α在胃腺癌组织标本中阳性率为59.01%（26/44）,正常胃粘膜组织标本中表达阳性率25.00%（5/20）,两组差异显著（P〈0.05）;VEGF-C在胃腺癌组织标本中阳性表达率为52.27%（23/44）,正常胃粘膜组织标本中表达阳性率20.00%（4/20）,两组差异显著（P〈0.05）;HIF-1α,VEGF-C在低分化腺癌中阳性率最高,但与癌组织分化程度间差异无显著意义（P〉0.05）,而在T1、2,T3、4表达差异显著（P〈0.05）,在淋巴结转移组与无淋巴结转移组表达差异显著（P〈0.05）;两者在年龄、性别、肿瘤部位方面无显著差异;在HIF-1α、VEGF-C共同表达组,淋巴结转移率显著高于非共同表达组;HIF-1α、VEGF-C在胃腺癌组织表达成正相关（rs=0.85,P〈0.05）。结论：HIF-1α、VEGF-C在胃腺癌组织中表达上调,其阳性表达可能在胃腺癌发生、发展和淋巴结转移过程中起重要作用;胃腺癌组织中HIF-1α和VEFG-C蛋白阳性表达成正相关;HIF-1α和VEFG-C联合检测对预测胃腺癌淋巴结转移,可能有一定的价值。     

肿瘤干细胞标记物CD133和CD44在肺癌原发灶及转移淋巴结中的表达情况

目的研究肿瘤干细胞标记物CD133和CD44在肺癌原发灶及转移淋巴结中的表达情况,及其与肿瘤生物学特征的关系。方法采用免疫组化法检测CD133和CD44在42例肺癌患者的肿瘤原发灶及转移淋巴结中的表达,并分析其表达情况与肿瘤大小、组织学分型、细胞分化程度、淋巴结转移情况的关系。结果 42例肺癌组织中,淋巴结转移占64.3%（27/42）。原发灶CD133阳性率73.8%（31/42）;CD44阳性率59.5%（25/42）。转移淋巴结CD133阳性率92.6%（25/27）,CD44阳性率81.5%（22/27）。CD133阳性组淋巴结转移率为74.2%（23/31）,较阴性组的27.3%（3/11）高。CD44阳性组淋巴结转移率为76.0%（20/25）,较阴性组的41.2%（7/17）高。原发灶CD133和CD44表达与转移淋巴结CD133和CD44表达呈正相关。肺癌组织中CD133与CD44的表达之间呈正相关性。CD133阳性组患者3 a生存率明显低于CD133阴性组（P〈0.05）。CD44阳性组患者3 a生存率明显低于CD44阴性组（P〈0.05）。结论肿瘤干细胞标志物CD133和CD44在肺癌的原发灶及转移淋巴结中的表达状态与肿瘤生物学特征密切相关,并影响患者的预后,对分析和预测肺癌临床表现具有较为重要的意义。     

抑癌基因PTEN、血管内皮生长因子的表达在胃癌进展和预后中的相互关系

目的 评价胃癌组织中微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）、抑癌基因PTEN的表达以及它们之间的相互关系,探讨它们与胃癌生物学行为及预后的关系,寻找判断预后和疗效的生物学指标。方法 用免疫组化法将我院1997年1月-2001年12月经病理诊断证实的胃癌手术标本进行微血管密度、VEGF、PTEN检测,并作临床随访和资料统计分析。结果 ①微血管密度、VEGF的表达与胃癌患者的性别、年龄无关;与肿瘤的大小、Borrmann分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期呈正相关（P〈0.05,P〈0.01）;与患者的术后生存时间呈负相关。②胃癌组织中PTEN的阳性表达率为46.7%,与患者的术后生存时间呈正相关。③PTEN的表达与VEGF的表达无显著相关性（P〉0.05）;VEGF和PTEN双因素组合,对胃癌患者预后有不同的影响。结论 MVD、VEGF、PTEN的表达与胃癌的生物学行为及患者的预后有密切关系;VEGF、PTEN的共同作用影响胃癌患者的预后。     

结肠癌组织Med-19的表达及临床意义

 目的 检测Med-19在结肠癌组织中的表达水平及与病理学特征的相关性。 方法 利用免疫组织化学法检测Med-19在115例结肠癌及癌旁组织中的表达情况。 结果 结肠癌组织Med-19的阳性表达率明显高于相应的癌旁组织（ P <0.01）;在Dukes C+D期及淋巴结转移情况下,Med-19基因表达水平均明显高于相对应组别( P <0.05或 P <0.01);Med-19表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度均无明显相关性（ P ＞0.05）。 结论 Med-19在结肠癌组织中高表达,其表达水平与结肠癌生物学行为密切相关。     

食管鳞癌淋巴结转移与CT灌注参数及血管生成的关系

目的:探讨食管鳞癌淋巴结转移与其CT灌注参数及血管生成的关系。方法:50例食管癌患者行MSCT灌注扫描,采用免疫组织化学SP法检测术后标本中MVD及VEGF的表达。分析食管癌淋巴结转移与CT灌注参数中血容量(BV)、血流量(BF)、平均通过时间(MTT)、表面通透性(PS)及MVD、VEGF表达之间的关系。结果:食管鳞癌CT灌注参数中BF、BV、MTT值在有和无淋巴结转移组中分别为(128.81±50.05)和(105.55±43.18))ml/(100g.min)、(7.64±3.11)和(6.33±1.71)ml/100g、(5.62±1.97)和(7.16±3.32)s,差异均无统计学意义(P>0.05),而PS值在有和无淋巴结转移组分别为(18.32±5.39)和(9.66±2.46)ml/(100g.min),差异有高度统计学意义(P<0.01);以PS值>10ml/(100g.min)为阈值预测淋巴结转移的敏感度、特异度、阳性及阴性似然比分别为95.8%、65.4%、2.77和0.06;VEGF及MVD值与食管鳞癌淋巴结转移有显著正相关关系(r值分别为0.752和0.384,P<0.01)。结论:CT灌注成像有助于食管鳞癌淋巴结转移的术前诊断,其中PS值是最有价值的诊断指标。