c-IAP1蛋白与肺癌细胞辐射敏感性关系研究

目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)水平与肺癌细胞辐射敏感性间的关系.方法 采用噻唑蓝(MTT)和细胞克隆形成实验检测6种人肺癌细胞系(A549、H460、H1299、H358、HCC827、H1650)的存活率和增殖水平;彗星实验检测辐射对肺癌细胞的DNA损伤效应;Western Blot和实时定量PCR分别测定c-IAP1蛋白水平及其mRNA表达.结果 MTT和克隆形成实验结果表明,不同肺癌细胞的辐射敏感性亦不同,其中H358和H460细胞的辐射敏感性最强,H1650和HCC827细胞次之,而H1299和A549细胞最弱.彗星实验结果显示,经辐射处理后,6种肺癌细胞均受到不同程度的DNA损伤,且H358细胞受损最明显.Western Blot和实时定量PCR结果证明,c-IAP1蛋白水平与肺癌细胞的辐射敏感性呈负相关,c-IAP1蛋白水平越高,细胞的辐射敏感性越弱,且敏感性亦受线粒体促凋亡蛋白(Smac)蛋白水平的影响.结论 c-IAP1是肺癌细胞保持高辐射抗性的原因之一,此结论对于肿瘤细胞的耐辐射机制和肿瘤辐射增敏研究具有重要的现实意义.     

转酮酶样蛋白1在人类鼻咽癌细胞生长增殖中的作用

目的:探讨转酮酶样蛋白1(TKTL1)在体外培养的人类鼻咽癌细胞生长增殖中的作用.方法:构建针对TKTL1 mRNA 的干扰RNA质粒,转染人类鼻咽癌细胞(CNE细胞系);检测转染前后CNE细胞中转酮酶活性的变化;实时定量RT-PCR检测转染前后CNE细胞转酮酶基因家族(TKT、TKTL1、TKTL2)mRNA表达水平的变化;通过流式细胞术和MTT实验检测转染前后CNE细胞增殖和细胞周期的改变.结果:实验组CNE细胞中转酮酶活性(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)明显低于质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和空白对照组(未转染细胞);实时定量RT-PCR结果显示转染前后CNE细胞中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平均无显著差异.然而,实验组细胞中TKTL1的表达水平明显低于对照组,且实验组CNE细胞增殖明显被抑制,癌细胞被阻滞在G0/G1期.结论:转酮酶蛋白TKTL1在人类鼻咽癌细胞的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗研究的新靶点.     

层粘连蛋白受体单克隆抗体对人肺癌细胞生长状态的影响

观察了层粘连蛋白受体单克隆抗体对高转移能力的人肺巨细胞癌系体外培养细胞生长状态的影响。结果显示ＭｃＢ１能明显降低ＰＧ瘤细胞的生长速度。提示肿瘤细胞体外生长的调控与层粘连蛋白（ＬＮ）及层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）的作用密切相关。     

EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）     

高尔基体磷酸化蛋白2对人结直肠癌细胞放射敏感性的影响

目的观察人结直肠癌细胞的放射敏感性及辐射对其高尔基磷酸化蛋白2表达的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞株HCT116、SW480及正常结直肠细胞株FHC,检测GOLPH2基因转录及蛋白表达。选取指数生长期人结直肠癌细胞进行0、2、4、6、8、10 Gy照射,计数细胞克隆形成率,制备细胞存活曲线。应用RT-PCR和Western blotting检测2种结直肠癌细胞株在不同剂量照射时GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达情况。应用Transwell侵袭实验观察不同照射剂量对人结直肠癌细胞株HCT116、SW480迁移能力的影响。结果随着照射剂量在一定范围内增高时,人结直肠癌细胞株HCT116、SW480克隆形成率逐渐下降,两种细胞株中GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达水平均逐渐下降。不同X射线照射剂量对人结直肠癌细胞株HCT116、SW480迁移有抑制作用,并且在8Gy、10Gy时对人结肠癌细胞株迁移能力抑制最明显。结论 X射线对人结直肠癌细胞株HCT116和SW480的增殖及迁移能力均有抑制作用,可降低人结直肠癌细胞株HCT116和SW480中GOLPH2基因mRNA转录水平及GOLPH2蛋白表达水平。     

一种跨膜蛋白--闭锁蛋白的研究现状

紧密连接存在于上皮细胞的连接复合体中,有屏障功能和保持细胞极性的作用,已证实闭锁蛋白、Claudin和JAM位于紧密连接处,其中闭锁蛋白在维持紧密连接的功能方面有重要作用.闭锁蛋白与质膜下蛋白有密切的联系,其功能受到多方面因素的调控.     

Aquaporin 1在中国人肺鳞癌细胞的表达

目的研究Aquaporin 1(AQP1)对中国人肺鳞癌细胞分化过程的影响。方法采用HE染色和AQP1免疫组织化学法对高、中、低分化的人肺癌细胞进行染色,光学显微镜观察并显微摄影。结果AQP1在高、中分化的肺鳞癌细胞呈阳性表达,在低分化的肺鳞癌细胞呈阴性表达;在高分化鳞癌中,角化珠旁的癌细胞呈较强阳性表达,癌巢周围的癌细胞呈阴性表达。结论AQP1参与人肺麟癌细胞的分化,其表达可能同分化程度相关。     

胰岛素样生长因子1对β样淀粉蛋白引起的神经元凋亡和tau 蛋白磷酸化的作用

本研究的目的是阐明胰岛素样生长因子1(IGF-1)对β样淀粉蛋白(Aβ)引起的神经元凋亡的保护作用,以及tau蛋白磷酸化的作用。用MTT(四甲基偶氮唑盐)方法检测细胞活性,用流式细胞学结合Annexin V-FITC和PI(碘化丙锭)双染的方法检测早期凋亡和晚期凋亡/坏死,用Hoechst 33342染色观察凋亡细胞形态学,用免疫细胞化学的方法检测tau蛋白磷酸化。IGF-1阻止了Aβ25-35引起的培养的大鼠海马神经元的毒性,MTT值显著增加,从54.51%增至61.8%,Hoechst 33342阳性细胞的百分比从30.77%减少到22.81%。Aβ25-35孵育使Annexin V单标记细胞(Annexin V+/PI-)以及Annexin V/PI双标记细胞(An-nexin V+/PI +)的百分比显著增加(分别为3.41%和19.47%),应用100 ng/ml的IGF-1可显著减少Annexin V单标记细胞和Annexin V/PI双标记细胞的百分比分别至2.98%和15.16%。Aβ25-35可增加tau蛋白磷酸化,AT8阳性细胞占41.84%,而IGF-1则可抑制这一效应。我们的结果表明IGF-1可保护神经元,降低Aβ的细胞毒性,减少早期和晚期凋亡/坏死细胞的比例,抑制tau蛋白磷酸化,这可能是IGF-1神经保护作用的细胞机制。     

蛋白酶激活受体-1促进肺癌细胞侵袭和转移功能的研究

目的研究蛋白酶激活受体1（PAR-1）对人类肺癌细胞侵袭和转移功能的影响。方法采用阳离子脂质体介导法,将正义和反义PAR-1重组质粒“pC／PARls”和“pC／PARlas”分别转染至人肺巨细胞癌低转移株（PLA801C）和高转移株（PLA801D）细胞中;采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹检测转染后PAR-1基因和蛋白表达水平变化;通过MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、细胞-基质黏附和Transwell细胞侵袭实验检测PAR-1对肺癌细胞转移相关功能的影响。结果转染正义和反义PAR-1分别明显上调和下调了PLA801C和PLA801D的PAR-1 mRNA和蛋白表达水平。转染正义PAR-1对细胞的生长和克隆形成具有促进作用;并可明显增强细胞对细胞外基质的黏附和侵袭能力（与空载体对照组比较均P〈0．01）。相反,转染反义PAR-1对细胞模型的生长和克隆形成具有抑制作用;能明显降低细胞的S期和G2／M期（与空载体对照组比较分别为P〈0．05、0．01）、升高G0／G1期所占比例（P〈0．01）;还可使细胞对细胞外基质的黏附力（P〈0．05）和侵袭力明显降低（P〈0．01）。结论正义和反义PAR-1基因能够分别上调和下调PAR-1的表达水平;PAR-1能够影响肺癌细胞的生长和增殖、黏附和侵袭特性。抑制PAR-1的表达可能是一种治疗肺癌的途径。     

MSX1 gene and nonsyndromic oral clefts in a Southern Brazilian population

Nonsyndromic oral clefts (NSOC) are the most common craniofacial birth defects in humans. The etiology of NSOC is complex, involving both genetic and environmental factors. Several genes that play a role in cellular proliferation, differentiation, and apoptosis have been associated with clefting. For example, variations in the homeobox gene family member MSX1, including a CA repeat located within its single intron, may play a role in clefting. The aim of this study was to investigate the association between MSX1 CA repeat polymorphism and NSOC in a Southern Brazilian population using a case-parent triad design. We studied 182 nuclear families with NSOC recruited from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre in Southern Brazil. The polymorphic region was amplified by the polymerase chain reaction and analyzed by using an automated sequencer. Among the 182 families studied, four different alleles were observed, at frequencies of 0.057 (175 bp), 0.169 (173 bp), 0.096 (171 bp) and 0.67 (169 bp). A transmission disequilibrium test with a family-based association test (FBAT) software program was used for analysis. FBAT analysis showed overtransmission of the 169 bp allele in NSOC (P=0.0005). These results suggest that the CA repeat polymorphism of the MSX1 gene may play a role in risk of NSOC in populations from Southern Brazil.     

唇腭裂的遗传及环境致病因素分析

目的研究唇腭裂的遗传及环境致病因素的作用.方法对384 例唇腭裂患者的临床资料进行详细的调查分析.结果单纯唇裂78例,单纯腭裂102例,合并唇腭裂204例.有遗传史者30例,有服药史者(孕早期)132例,男性∶女性为1.56∶1. 结论唇腭例的病因是复杂的,而遗传因素和母亲孕早期感染、服药、接触毒物等特定环境因素作用是其致病的危险因素.     

Polo-like激酶l反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的： 探讨Polo-like激酶1（Plk1）基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法： 培养肺腺癌细胞株A549，构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1，通过脂质体介导转染A549细胞，采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达，细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡，MTT法检测长春瑞宾（NVB）对各组细胞的生长抑制率。结果： A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24 h，Plk1 mRNA及蛋白表达均下降；细胞变圆、漂浮、增殖减慢；S期细胞百分数（BrdU标记指数）显著低于对照组（P<0.05）；转染后48 h A549细胞出现G₂/M期阻滞（P<0.05）并发生凋亡；等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组（P<0.05），转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著（P>0.05）。结论： pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达，抑制A549细胞增殖，诱导凋亡，并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

窖蛋白-1在肺癌中的表达及意义

目的 探讨窖蛋白-1（caveolin-1）在不同类型肺癌组织中的表达及其与微血管密度（MVD）和临床病理因素之间的关系。方法 对154例原发性肺癌、相应癌旁正常肺组织及36例淋巴结转移癌行caveolin-1免疫组织化学染色;对154例原发性肺癌行CD34免疫组织化学（SP法）染色并进行微血管密度计数;Western印迹法检测其中50例新鲜肺癌组织及其癌旁正常肺组织中caveolin-1的表达情况。结果 caveolin-1为膜／质表达蛋白,在正常支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率为100％。在肺癌组织中的阳性率为59．1％（91／154）,低于癌旁正常肺组织,P＜0．01;Western印迹结果进一步证实caveolin-1在肺鳞癌、肺腺癌组织中的表达均显著低于癌旁正常肺组织,P＜0．01。caveolin-1在小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC）中的阳性率分别为7．1％和64．3％,二者间差异有统计学意义,P＜0．01。NSCLC中,有淋巴结转移组caveolin-1表达高于无淋巴结转移组（P=0．005）;Ⅲ、Ⅳ期组caveolin-1表达显著高于Ⅰ、Ⅱ期组（P=0．042）,caveolin-1表达与NSCLC的其他临床病理因素及MVD值无关（P＞0．05）。结论caveolin-1其作为一种肿瘤抑制因子的同时,可能还具有促进NSCLC进展和转移的活性。     

Novel truncating PPM1D mutation in a patient with intellectual disability

Truncating mutations in the last and penultimate exons of the PPM1D gene were recently described as a cause for mild to severe intellectual disability in fourteen patients. Feeding difficulties, periods of fever and vomiting as well as a high pain threshold were described as additional characteristic features and the disorder was subsequently termed “intellectual developmental disorder with gastrointestinal difficulties and high pain threshold (IDDGIP)” in the OMIM database (MIM # 617450). Here we report on an additional patient carrying a novel de novo truncating mutation NM_003620.3: c.1535del, p.(Asn512Ilefs*2) in the last exon of PPM1D. While the patient showed features overlapping with the reported phenotype, such as a short stature and small hands and feet, he also presented with additional features like cleft lip and palate and an aberrant right subclavian artery. Notably, the patient did not have any gastrointestinal difficulties or periods of fever, indicating variability of the phenotype of patients with PPM1D mutations.     

非小细胞肺癌中窖蛋白1基因的蛋白表达和甲基化及其意义

目的 检测窖蛋白1(Car-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的蛋白表达以及启动子的甲基化状况,探讨Cav-1基因在NSCLC中的作用及其临床意义.方法 应用免疫组织化学(sP法)和量子点Qd600染色检测123例NSCLC组织、17例良性病变肺组织中Cav一1蛋白表达和亚细胞定位.亚硫酸氢钠处理DNA,甲基化特异性PCR(MSP)检测Cav-1基因启动子区域的甲基化水平.结果 Cav-1蛋白在肺支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞的胞质和胞膜高表达.癌旁组织(对照)组和肺癌组中Cav-1蛋白的阳性率分别为17/17、43.1%(53/123),两组间差异有统计学意义(P=0.001);Cav-1蛋白在NSCLC不同的组织学类型(P=0.552)和分化程度(P=0.160)中差异均无统计学意义.Cav-1蛋白阳性率与NSCLC的TNM分期(P=0.001)以及淋巴结转移(P=0.001)均相关.在40例Cav-1蛋白表达为阴性的肺癌组织和12例癌旁肺组织,MSP法均未检测到Cav-1因启动子区域的甲基化.结论 Cav-1蛋白失表达的机制可能与启动子区是否甲基化无关.Cav-1蛋白高表达预示NSCLC恶化进展和高侵袭性.     

单侧完全性唇腭裂胎儿颌面部血供的应用解剖

目的为单侧完全性唇腭裂胎儿宫内手术修复提供解剖学基础。方法制作和观察21～32周正常和单侧完全性唇腭裂胎儿头颈部血管铸型标本,比较它们颌面部血供的来源及吻合情况。结果①正常胎儿颌面部血供主要来源于面动脉、颏下动脉、下唇动脉、上唇动脉、鼻翼下缘动脉、鼻翼动脉、鼻外侧动脉、鼻背动脉、眶下动脉及面横动脉等,这些动脉及其分支构筑颌面部组织丰富的血管网;②单侧完全性唇腭裂胎儿患侧上唇动脉沿裂缘向上至鼻翼基底部与鼻翼下缘动脉等相吻合,患侧部分腭骨缺损暴露的腭大动脉穿过骨残端与患侧鼻腔内的血管相吻合。结论对单侧完全性唇腭裂胎儿颌面部进行宫内修复手术,重点在鼻部和上唇部的血供,主要以上唇动脉、鼻翼下缘动脉和腭大动脉为主。     

单侧完全性唇腭裂胎儿宫内手术修复的解剖学基础

目的　为单侧性唇腭裂胎儿宫内手术修复提供解剖学基础。 方法 制作和观察21～32周正常和单侧完全性唇腭裂胎儿头颈部血管铸型标本,比较他们唇腭部血供的来源及吻合情况。 结果 ①正常胎儿唇腭部的血供主要由上唇动脉、鼻翼下缘动脉和腭大动脉组成。两侧上唇动脉在中线附近吻合成上唇动脉弓,并在鼻中隔前下部形成浅深两层血管网,且上唇动脉鼻中隔支也与腭大动脉穿支相互吻合;②单侧完全性唇腭裂胎儿唇腭部血供由于患侧裂隙的阻隔,导致左右上唇动脉不能吻合成弓,患侧腭大动脉穿过骨残端与患侧鼻腔内的血管相吻合。 结论 单侧完全性唇腭裂胎儿唇腭部血管非常丰富,尤以上唇动脉和腭大动脉为血供主干。