补阳还五汤和依达拉奉联用对小鼠急性脑缺血损伤后脑保护机制的研究

目的探讨补阳还五汤和依达拉奉联用对急性脑缺血损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其可能的脑保护机制。方法将60只小鼠随机分假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组以及补阳还五汤+依达拉奉组,每组12只。采用改良线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,给予补阳还五汤及依达拉奉药物干预。分别于再灌注后1d和7d,采用TUNEL法观察小鼠脑皮质缺血区神经细胞凋亡率,采用免疫组化方法观察小鼠脑皮质缺血区B淋巴细胞瘤2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的阳性细胞数。结果与假手术组比较,模型组小鼠脑皮质缺血区凋亡指数升高(P0.01),且bcl-2、bax和caspase-3表达的阳性细胞亦均升高(P0.01);经补阳还五汤和(或)依达拉奉干预后,各药物组小鼠脑组织的凋亡指数及bax和caspase-3阳性细胞均较模型组下降(P0.01),而脑组织bcl-2阳性细胞均较模型组增加(P0.01),且补阳还五汤+依达拉奉联合用药组较单一用药组改变明显(P0.05)。结论补阳还五汤与依达拉奉联用能抑制脑缺血再灌注损伤后脑细胞中促凋亡蛋白bax、caspase-3的表达;促进具有神经元保护作用的bcl-2蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,协同发挥脑保护作用。     

中药补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4表达的影响

目的探讨中药补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法 55只雄性SD大鼠随机分为假手术组(5只)、脑出血模型组(25只)和补阳还五汤治疗组(25只)。采用自体血注入法制作右侧纹状体出血大鼠模型。假手术组不注入自体血。补阳还五汤治疗组于术前给予1 ml/100 g补阳还五汤浓缩液灌胃3 d,假手术组和脑出血模型组同期给予等量生理盐水替代。在相应时间点分别对大鼠进行神经功能缺损评分后处死大鼠。采用免疫组化法检测脑组织AQP4蛋白的表达,采用原位杂交法检测脑组织AQP4 mRNA的表达。结果补阳还五汤治疗组及脑出血模型组大鼠神经功能缺损评分明显高于假手术组(均P<0.05)。补阳还五汤治疗组大鼠术后3 d和7 d时神经功能缺损评分明显低于脑出血模型组(均P<0.05)。补阳还五汤治疗组及脑出血模型组大鼠脑组织AQP4蛋白和mRNA表达水平明显高于假手术组(均P<0.05)。补阳还五汤治疗组大鼠术后3 d和7 d时脑组织AQP4蛋白和mRNA表达水平明显低于脑出血模型组(均P<0.05)。各组大鼠均未见明显不良反应。结论补阳还五汤可抑制脑出血大鼠脑组织中AQP4的表达,并有助于其神经功能恢复。补阳还五汤治疗脑出血有效可能与其抑制AQP4的表达,减轻脑水肿有关。     

骨骼肌细胞线粒体通透性转换孔及bcl-2和bax mRNA表达与运动

背景：运动影响骨骼肌细胞的凋亡,而线粒体途径是介导细胞凋亡的一个重要途径。 目的：研究运动对大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔、凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响。 方法：将24只成年雄性SD大鼠随机分为3组：对照组正常饲养,6周游泳训练组进行6周的游泳训练,每周6次,一次性游泳力竭组于第6周进行一次力竭性游泳运动。应用紫外分光光度仪检测各组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放情况,应用RT-PCR测定大鼠骨骼肌bcl-2和bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,6周游泳训练组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放程度变化不明显,bcl-2 mRNA的表达显著增加,bax mRNA的表达显著减少,bcl-2/bax mRNA比值显著增大(P < 0.01)。与对照组比较,一次性游泳力竭组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔开放程度明显增加(P < 0.01),bcl-2 mRNA的表达显著减少,bax mRNA的表达显著增加,bcl-2/bax mRNA比值显著减小(P < 0.01)。说明运动训练可通过改变线粒体通透性转换孔的开放、调节bcl-2/bax表达,调控骨骼肌细胞凋亡。     

补阳还五汤对脑出血大鼠脑内整合素α_1β_1和α_1亚基表达的影响

目的通过观察中医益气活血方补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围整合素α1β1和整合素α1亚基表达的影响,探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法第一部分:150只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组及益气活血(补阳还五汤)组,向脑内苍白球注入100μl新鲜自体动脉血建立脑出血模型。假手术组和模型组以蒸馏水灌胃,余各组灌服补阳还五汤益气组分、活血组分及全方药物。免疫组化方法检测各组术后3、7、14、21、28 d各时间点血肿周围整合素α1β1和α1亚基的表达。第二部分:18只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血组,蛋白免疫印迹法检测各组术后14 d血肿周围整合素α1亚基的表达。结果免疫组化结果显示,除假手术组,各组整合素α1β1和α1亚基的表达趋势大致相近,14 d时各组表达达到高峰,21、28 d时高峰持续,益气活血组各时点的表达较模型组增高(P<0.05)。蛋白免疫印迹结果也显示14 d时益气活血组整合素α1亚基的表达水平高于模型组(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过促进脑出血大鼠血肿周围整合素α1β1和α1亚基的表达,参与血管新生调节,从而促进损伤脑组织的修复。     

大鼠局灶性脑缺血预处理的抗细胞凋亡作用机制的研究

目的研究大鼠短暂局灶性脑缺血预处理对再次脑缺血神经细胞凋亡的保护作用,及bcl-2、bax与脑缺血耐受的关系.方法用开颅方法阻断大鼠大脑中动脉(MCA)20分钟,3天后再次阻断6小时.观察大鼠脑梗死体积及组织病理学改变,采用TUNEL法观察神经细胞凋亡状况,采用免疫组织化学方法观察bcl-2、bax蛋白表达的改变.结果与假预处理组和缺血组相比,预处理后缺血组梗死灶体积明显减小(均P＜0.01),半影区凋亡细胞数明显减少(P＜0.01),bax蛋白表达下降(P＜0.05),bcl-2蛋白表达显著上升(P＜0.01).结论 20分钟局灶性脑缺血预处理能够通过bcl-2表达增加及bax表达下降对再次脑缺血神经细胞起保护作用.     

大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布

目的观察脑损伤后凋亡相关基因bcl-2、bax在脑组织中的表达特点。方法SD大鼠12只,随机分为假手术组(n=4)和液压打击脑损伤组(n=8)。采用侧方液压打击制作颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交法及计算机显微图像分析技术,观察SD大鼠脑损伤后12h脑内bcl-2、bax蛋白和mRNA阳性细胞的分布。结果侧方液压打击伤后,bcl-2、bax基因在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,挫裂伤组织内血肿周边的bcl-2、bax基因表达亦明显增强,阳性细胞表达强度受打击能量和颅内血肿影响而呈梯度分布。结论大鼠侧方液压脑损伤后,bcl-2和bax基因表达受打击能量和颅内血肿的影响,由高到低逐渐递减。这一现象为认识脑损伤后迟发性神经元死亡提供了帮助。     

PTZ诱导孕鼠痫性发作对胎鼠海马中bax、bcl-2、capase-3表达的影响

目的探讨母鼠孕期痫性发作对胎鼠海马中bax、bcl-2、capase-3表达的影响。方法将雌性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、盐水组(NS组)和癫痫组(PTZ组),采用戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致痫模型,PTZ组大鼠每天给予腹腔下注射PTZ 35 mg/kg,点燃成功后将雌性SD大鼠与雄性SD大鼠合笼;发现阴栓记为孕0d,孕鼠继续孕前处理至孕20d。NS组腹腔注射相应剂量的生理盐水,NC组不做任何处理。Western Blot方法测定胎鼠海马组织中bax、bcl-2及caspase-3蛋白表达变化。结果 PTZ组胎鼠海马caspase-3蛋白(2.57±0.08)较NC组(0.53±0.13)明显升高(P<0.05);PTZ组胎鼠海马bax蛋白(3.24±0.32)较NC组(1.55±0.11)明显升高(P<0.05);PTZ组子鼠海马bcl-2表达水平(1.42±0.074)较NC组(2.45±0.07)明显降低(P<0.05)。结论孕期痫性发作使胎鼠海马促凋亡蛋白bax表达增加,抑凋亡蛋白bcl-2表达降低,凋亡执行蛋白caspase-3表达增加,推测孕期痫性发作可能使胚胎海马神经元凋亡增加。     

银杏达莫对创伤性脑出血大鼠的神经保护机制研究

目的探究银杏达莫对创伤性脑出血(TICH)大鼠的神经保护机制。方法 SD大鼠被随机分为3组(n=10),即对照组、TICH组和银杏达莫组。TICH组和银杏达莫组大鼠通过击打的方法建立TICH模型。银杏达莫组注射银杏达莫,0.4 mL·kg~(-1)x3 d。通过磁共振(MRI)检测脑出血情况;分别通过改良神经功能缺损程度评分(mNSS)和干湿测重法评估神经缺损情况和脑组织含水量;使用TUNEL染色检测脑组织中神经元凋亡情况;Western blot检测蛋白水平。结果 MRI可以清晰的看出建模后TICH组和银杏达莫组脑组织的出血情况。干预后,TICH组大鼠的m NSS评分显著高于对照组(P0.05),银杏达莫组的m NSS评分显著低于TICH组。TICH组大鼠的脑组织含水量显著高于对照组(P0.05),银杏达莫组的脑组织含水量显著低于TICH组(P0.05)。TICH组大鼠的脑组织神经元凋亡率高于对照组(P0.05),银杏达莫组的脑组织神经元凋亡率显著低于TICH组。TICH组大鼠的脑组织中TLR4和MyD88蛋白显著高于对照组(P0.05),银杏达莫组的脑组织中TLR4和MyD88蛋白显著低于TICH组(P0.05)。结论银杏达莫可能通过抑制TLR4/MyD88通路中蛋白的表达抑制炎性反应,并减少脑水肿和神经元的凋亡,从而对TICH大鼠的神经功能发挥保护作用。     

普罗布考对血管性痴呆大鼠行为学及海马区bcl-2和bax蛋白表达的影响

目的观察普罗布考对血管性痴呆大鼠认知功能及海马区bcl-2、bax蛋白表达的影响。方法选取健康雄性SD大鼠,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、普罗布考组,每组12只。给药8 w后,采用Morris水迷宫实验,对各组大鼠进行行为学测试。用western blot方法和免疫组织化学方法测定海马区bcl-2和bax蛋白的表达变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期时间延长,穿越平台次数减少,海马区bcl-2蛋白表达明显下降,bax蛋白表达明显上升;给予普罗布考后,与模型组相比,普罗布考组大鼠逃避潜伏期时间缩短,穿越平台次数增多,海马区bcl-2蛋白表达明显上升,bax蛋白表达明显下降。结论普罗布考可以改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达有关。     

补体分子调控TGFβ1/smad通路减少蛛网膜下腔出血后神经元凋亡的作用及机制

目的 探讨补体分子对蛛网膜下腔出血（SAH）后神经元凋亡的影响及可能的机制。方法 将90只大鼠随机分为假手术组、SAH模型组、SAH模型+补体分子组,每组30只。采用枕大池单次注射自体血的方法建立SAH模型,SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后,称取脑组织湿质量和干质量,计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线,评估血-脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况,蛋白质免疫印迹法（WB）检测各组补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达情况,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果 与假手术组相比,SAH模型组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均降低,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均增加,小胶质细胞活化程度增强,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平升高,神经元凋亡率增加（P<0.05）。与SAH模型组相比,SAH模型+补体分子组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均升高,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均降低,小胶质细胞活化程度减弱,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平降低,神经元凋亡率减少（P&l...     

Effects of green tea polyphenols on caveolin-1 of microvessel fragments in rats with cerebral ischemia

Abstract

Objective: This study was designed to investigate the effects of green tea polyphenols (GTPs) on the permeability of blood–brain barrier (BBB), and the expression of caveolin-1 and extracellular signal-regulated kinase ½ (ERK1/2) after cerebral ischemia.

Methods: Cerebral ischemia was established by middle cerebral artery occlusion (MCAO). Rats were randomly divided into control and GTP groups, and both included four time points of interest: MCA occluded for 0 hour, 1 hour, 2 hours, and 4 hours groups. After ischemia, triphenyltetrazolium chloride staining and Longa's score were used to determine the infarct volume and neurological deficit. Evans blue (EB) content in the brain tissue was measured to observe the BBB permeability. RT-PCR, immunohistochemistry, and western blot assessment were used to detect expression of caveolin-1 in microvessel fragments of cerebral ischemic tissue. Western blot was also used to examine ERK1/2.

Results: GTPs significantly reduced infarct volume, ameliorated the neurological deficit, and reduced the permeability of BBB. GTPs also obviously reduced the levels of caveolin-1 mRNA and protein expression as well as the expression of phosphorylated ERK1/2 in microvessel fragments of cerebral ischemic tissue, which were enhanced by cerebral ischemia.

Discussion: These data were the first to show that GTPs can decrease the elevated BBB permeability in the ischemic region, and the protective effects for cerebral injury may be related to the reduced expression of caveolin-1 and phosphorylated ERK1/2.     

Mitogen activated protein kinase signaling pathways participate in the active principle region of Buyang Huanwu decoction-induced differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells

Our preliminary studies confirmed that an active principle region of Buyang Huanwu decoction, comprising alkaloid, polysaccharide, aglycon, glucoside and volatile oil, can induce bone marrow mesenchymal stem cell differentiation into neurons. Mitogen-activated protein kinase signaling was identified as one of the key pathways underlying this differentiation process. The present study shows phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase and phosphorylated p38 protein expression was increased after differentiation. Cellular signaling pathway blocking agents, PD98059 and SB203580, inhibited extracellular signal-regulated protein kinase and p38 in mitogen-activated protein kinase signaling pathways respectively. mRNA and protein expression of the neuronal marker, neuron specific enolase, and neural stem cell marker, nestin, were decreased in bone marrow mesenchymal stem cells after treatment with the active principle region of Buyang Huanwu decoction. Experimental findings indicate that, extracellular signal-regulated protein kinase and p38 in mitogen-activated protein kinase signaling pathways participate in bone marrow mesenchymal stem cell differentiation into neuron-like cells, induced by the active principle region of Buyang Huanwu decoction.     

GM_1对大鼠脑缺血再灌注后bcl-2、bax表达的影响

目的:探讨神经节苷脂GM_1对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤后凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法:用线栓法制成大鼠大脑中动脉(MCA)闭塞及再通模型,利用免疫组化,观察一侧MCA缺血30分钟,再灌注5小时后病变侧海马CA1区bcl-2、bax表达的情况以及GM_1对其表达的影响。结果:假手术对照组海马区CAI可见bcl-2及少量bax表达。缺血/再灌注后,该区bcl-2及bax表达增加(分别P<0.01),且以bax表达明显占优势,bax染色阳性细胞以小体积,核固缩的凋亡细胞为主。应用GM_1后bcl-2表达进一步增加(P<0.01),而bax蛋白水平变化不明显,bcl-2与bax蛋白比值增加,bax染色阳性细胞胞体趋于正常,但核仍大而圆。结论:GM_1确实可以通过调节脑局灶性缺血/再灌注后bcl-2、bax表达而发挥神经保护作用。     

Buyang Huanwu decoction enhances cell membrane fluidity in rats with cerebral ischemia/reperfusion

After bilateral carotid artery occlusion for 30 minutes and reperfusion for 2 hours, distinct pathological changes presented in the cerebral cortex and cerebellum of rats. Compared with normal rats, nerve cell membrane fluidity significantly decreased in ischemia/reperfusion rats as detected by spin-labeling electron spin resonance, consistent with order parameter S and rotational correlation time τc measurements. Brain nerve cells from rats with ischemia/reperfusion injury were cultured with 1-100 mg/mL Buyang Huanwu decoction. Results showed that Buyang Huanwu decoction gradually increased membrane fluidity dose-dependently to normal levels, and eliminated hydroxide (OH˙) and superoxide (O2˙) free radicals dose-dependently. These findings suggest that Buyang Huanwu decoction can protect against cell membrane fluidity changes in rats with ischemia/ reperfusion injury by scavenging free radicals.     

穴位配伍与脑区激活的关系：一项fMRI研究

临床上,穴位常配伍使用,但目前以健康人穴位穴位配伍针刺后进行脑功能成像的研究报道较少。实验运用功能性磁共振成像观察穴位配伍针刺后各脑区的不同激活现象。选用外关穴（SJ5）为主穴,针刺同名同经穴--支沟穴（SJ6）、表里经穴--内关穴（PC6）、同名异经穴--阳陵泉(GB34)以及非穴配穴（sham point）,并实时进行fMRI脑部扫描,分析比较各组脑区的激活概率、激活数量以及激活强度。结果证实,不同的穴位配伍对于脑区的激活有所不同,单纯针刺外关穴,能较为集中激活右侧小脑,配伍其他穴位后,能不同程度地激活不同脑功能区,此激活作用与不同穴位配伍组合有关。     

补阳还五汤预处理脑缺血再灌注沙鼠海马组织微血管的变化

补阳还五汤是防治缺血性脑血管病的经典方剂。实验应用补阳还五汤预处理脑缺血再灌注长爪沙鼠,通过激光多普勒监测、单宁酸-氯化铁媒染以及电镜等方法观察微血管变化。结果发现,补阳还五汤预处理脑缺血再灌注损伤沙鼠海马微血管应激能力增强,微血管密度及微血管面积比增加,通过防止微血管闭塞,增强微血管再通能力,增加了脑组织血流量,抑制神经元损伤。