非小细胞肺癌胸水细胞块ROS1融合基因检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌胸水细胞块在ROS1(c-ros oncogene 1,receptor tyrosine kinase)融合基因突变检测中的临床价值。方法：采用ARMS-PCR法检测215例非小细胞肺癌胸水细胞块和404例非小细胞肺癌组织块中ROS1基因融合的四种类型,并检测细胞块同时送检组织块的患者74例的一致性。结果：细胞块ROS1融合基因阳性7例,阳性率3.26%(7/215);组织块ROS1融合基因阳性8例,阳性率1.98%(8/404);74例有组织块对照的细胞块ROS1融合基因结果一致性有71例,一致率达95.95%(71/74),其中细胞块ROS1融合基因的阳性率2.70%(2/74),组织块阳性率6.76%(5/74)。结论：非小细胞肺癌胸水细胞块ROS1融合基因的阳性率略高于组织块;有恶性胸水的非小细胞肺癌患者原发灶组织发生ROS1融合基因阳性的概率较高。     

非小细胞肺癌胸水细胞块c-M ET基因扩增检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌胸水细胞块在间充质上皮转化因子受体(c-mesenchymal-epithelial transition,c-MET)基因扩增检测中的临床价值。方法：采用RT-PCR法检测215例非小细胞肺癌细胞块和404例非小细胞肺癌组织块中c-MET基因扩增,并检测细胞块同时送检组织块的患者74例的一致性。结果：细胞块c-MET基因扩增31例,扩增率14.42%(31/215);组织块c-MET基因扩增35例,扩增率8.66%(35/404);74例有组织块对照的细胞块c-MET结果一致性有68例,一致率达91.89%(68/74),其中细胞块c-MET基因扩增率12.16%(9/74),组织块扩增率17.57%(13/74)。结论：非小细胞肺癌胸水细胞块c-MET的扩增率略高于组织块;有恶性胸水的非小细胞肺癌患者原发灶组织发生c-MET扩增的概率较高。     

肺腺癌胸水细胞块EGFR基因突变检测分析

目的探讨肺腺癌胸水细胞块中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变检测的临床价值。方法采用ARMS-PCR法检测143例肺腺癌细胞块和269例肺腺癌组织块中EGFR的29种突变类型,并检测细胞块同时送检组织块的患者49例的一致性。结果细胞块EGFR突变型71例,阳性率49.65%(71/143);组织块EGFR突变型131例,阳性率44.26%(131/269);49例有组织块对照的细胞块EGFR结果一致性有36例,一致率达73.47%(36/49),其中细胞块EGFR的阳性率44.90%(22/49),组织块阳性率67.34%(33/49)。结论肺腺癌胸水细胞块EGFR的阳性率略高于组织块;有恶性胸水的肺腺癌患者原发灶组织发生EGFR突变的概率较高。     

非小细胞肺癌患者组织原发灶和转移灶中ROS1融合基因的研究

目的：研究晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)原发灶和转移灶ROS1融合基因阳性率,探讨其相关性。方法：收集2013年1月至2015年5月中国人民解放军北京军区总医院、军事医学科学院附属医院、浙江省肿瘤医院、大连大学附属中山医院和山西医学科学院山西大医院原发灶384例,其中配对转移灶246例,统计得出ROS1融合基因阳性率并分析原发灶与转移灶ROS1融合基因的一致性、ROS1融合基因阳性与临床基线资料间的关系。结果：ROS1融合基因阳性率原发灶为2.60%(10/384)。ROS1融合基因阳性率配对原发灶为2.85%(7/246),配对转移灶为1.63%(4/246),配对的246对原发灶、转移灶组织中,转移灶融合基因阳性而对应的原发灶融合基因阴性1例,原发灶融合基因阳性而对应的转移灶融合基因阴性4例,转移灶较原发灶检出ROS1融合基因阳性率高,两者差别有统计学意义(χ2=52.341,P=0.000);转移灶和原发灶ROS1融合基因阳性的一致率好(κ=0.536,P=0.000),通过转移灶判断原发灶融合阳性的情况,敏感性为42.86%(3/7),特异性为99.58%(238/239)。结论：非小细胞肺癌中转移灶可以预测原发灶ROS1融合基因情况,在难以取得原发灶的情况下转移灶可以作为ROS1融合基因测的备选手段。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因EGFR、KRAS、ALK、ROS1、c-Met和Her-2基因各亚型改变情况。方法：应用Taqman-ARMS方法检测273例非小细胞肺癌石蜡组织中EGFR基因、KRAS基因、ALK基因、ROS1基因、c-Met基因和Her-2基因改变情况。结果：非小细胞肺癌肿瘤组织中EGFR基因总突变率为36.26%(99/273),外显子18、19、20和21的突变率分别为0(0/273)、16.12%(44/273)、4.49%(15/273)和17.95%(49/273);EGFR基因各外显子之间双重突变共12例(4.40%);KRAS基因总突变率为4.76%(13/273);ALK融合基因总阳性率为9.16%(25/273);ROS1融合基因总阳性率为2.20%(6/273);c-Met基因总扩增率为3.66%(10/273);Her-2基因总突变率为0.73%(2/273);各驱动基因双突变共存型11例(4.03%),其中EGFR基因突变与ALK融合基因阳性共存型2例(0.73%),EGFR基因突变与KRAS基因突变共存型3例(1.10%),EGFR基因突变与c-Met基因扩增共存型6例(2.20%)。结论：非小细胞肺癌患者中EGFR基因19和21外显子突变和ALK融合基因均存在较高的突变率,基因突变亚型分类能指导精准医学的个体化靶向治疗,KRAS、ROS1、c-Met、Her-2基因改变以及驱动基因双突变共存型基因突变率虽低但不容忽视。     

肺鳞状细胞癌EGFR/ALK的基因状态

目的:探讨肺鳞状细胞癌各亚型中EGFR和ALK的基因状态.方法:应用ARMS方法检测肺鳞状细胞癌石蜡组织中EGFR基因突变和ALK融合基因情况.结果:218例肺鳞状细胞癌样本中,E GFR基因突变率为4.59％(10/218),19del和L858R各为2.29％(5/218).ALK融合基因阳性率为6.14％(7/114).结论:肺鳞状细胞癌存在一定比例EGFR基因突变和ALK融合基因阳性,肺鳞状细胞癌EGFR基因和ALK融合基因常规检测不可忽视.     

晚期非小细胞肺癌中ALK的表达及检测方法的比较

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达及与临床病理特征的关系,旨在开展易普及的筛查方法。方法采用Ventana全自动免疫组化技术检测421例晚期NSCLC患者中ALK的表达,并采用FISH法验证免疫组化检测的准确性,分析ALK表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果免疫组化检测421例NSCLC中Ventana ALK表达,阳性率为7.6%(32/421)。免疫组化检测阳性病例经FISH验证,ALK的阳性率为7.36%(31/421)。Ventana ALK的免疫组化检测与FISH检测结果吻合率达96.88%,两者具有较高的一致性(P0.05)。ALK表达在女性及腺癌中阳性率明显升高(PO.05);与患者年龄、取材部位、吸烟情况无关(P0.05)。结论 Ventana ALK全自动免疫组化检测准确性较高,实际操作流程更简便、易判读,可作为可靠的ALK筛查手段。     

RET基因融合阳性非小细胞肺癌患者的临床病理学特征

目的探讨RET基因融合阳性非小细胞肺癌患者的临床病理学特征及治疗与预后。方法选取2018年8月至2020年4月江南大学附属医院存档的非小细胞肺癌标本1 089例, 采用多种基因融合检测试剂盒(荧光PCR法)检测1 089例石蜡包埋组织标本中RET、表皮生长因子受体、间变性淋巴瘤激酶、ROS1、KRAS、BRAF和HER2等基因状态。采用免疫组织化学法检测患者组织标本中PD-L1和错配修复相关蛋白的表达。分析患者RET基因融合与年龄、性别、吸烟史、分期、分化程度、病理学类型以及PD-L1、错配修复蛋白等表达的相关性。结果 1 089例非小细胞肺癌患者中共发现RET基因融合阳性患者22例(2.02%), 男性和女性各11例, 中位年龄63.5岁。22例RET基因融合阳性患者有20例腺癌, 其中腺泡亚型11例, 实体亚型5例, 贴壁生长型4例;另有鳞状细胞癌(非角化型)和肉瘤样癌(多形性癌)各1例。临床分期Ⅰ～Ⅱ期6例, Ⅲ～Ⅳ期16例。伴有淋巴结转移16例, 远处转移11例。RET基因融合阳性患者中有1例伴HER2突变。RET基因融合阳性肺癌患者中PD-L1的阳性比例分数≥1%的占54.5...     

EGFR/ALK/ROS1三联检测在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨EGFR-TKI敏感突变、T790M耐药突变及ALK、ROS1融合基因突变在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的活检小标本中联合检测的检出率,筛选适合的靶向药物实现晚期NSCLC的精准治疗。方法收集经皮肺穿刺、经支气管镜活检、气管镜刷片、胸水富集细胞等肺癌小标本合计40例,采用荧光定量PCR法联合检测EGFR、ALK、ROS1基因状态,并分析敏感突变患者与靶向治疗疗效的相关性。结果 NSCLC小标本中,驱动基因的总突变率为42. 5%(17/40),EGFR敏感突变为35. 0%(14/40),EGFR耐药突变Exon20 T790M 2. 5%(1/40),ALK融合基因突变5. 0%(2/40),ROS1未检测到突变。临床随访资料表明,驱动基因敏感突变患者在应用TKI治疗后,临床客观缓解率达90. 0%(9/10)。结论利用荧光定量PCR对NSCLC的小标本中EGFR/ALK/ROS1突变进行联合检测,可以用于临床指导肺癌的靶向治疗。     

晚期非小细胞肺癌中c-MET、ALK、ROS1基因突变的相关性及临床意义

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中发生c-MET扩增、ALK和ROS1基因重排的阳性率、基因变异,及其与临床病理特征的相关性。方法采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测91例晚期NSCLC中c-MET、ALK、ROS1基因,分析发生c-MET扩增、ALK/ROS1基因重排的阳性率及其相互间发生变异的相关性。结果 NSCLC患者c-MET基因的阳性率为8.79%(8/91),女性c-MET扩增率显著高于男性(19.4%vs 1.82%,P=0.006);≥60岁患者c-MET扩增阳性率高于60岁(8.89%vs 7.5%);Ⅲ期患者阳性率高于Ⅳ期患者(9.62%vs 7.69%);腺癌患者c-MET扩增阳性率为9.2%,鳞癌患者中未发现c-MET扩增。NSCLC中ALK和ROS1融合的阳性率分别为10%和13.3%,且发现1例患者同时存在c-MET扩增和ROS1基因重排。结论 NSCLC中c-MET基因扩增阳性率与患者性别相关,女性患者发生率明显高于男性,而与患者年龄、病理类型和临床分期相关性不明显。c-MET基因扩增与ALK/ROS1基因重排的发生几乎无共存,但并非完全排斥;该实验首次发现1例患者同时存在c-MET扩增和ROS1基因重排。     

非小细胞肺癌患者ALK,EGFR及KRAS基因的检测及临床病理特征

目的:研究汉族非小细胞肺癌患者中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及Kirsten鼠肉瘤基因(Kirstenrat sarcoma,KRAS)突变的阳性率及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)的方法检测ALK融合基因异常表达,采用PCR检测EGFR基因和KRAS基因突变,采用x2检验及Fisher精确概率法进行数据分析.结果:共2 267例进行了ALK融合基因检测,其中1 655例同时进行了EGFR突变检测,951例同时进行了KRAS检测.ALK融合基因、EGFR基因及KRAS基因突变阳性率分别为7.28％(165/2 267)、48.58％(804/1 655)、11.40％(108/947).ALK基因突变多见于年轻、腺癌患者;EGFR基因突变多见于女性、腺癌患者;KRAS基因突变多见于老年、男性、腺癌患者.1 655例同时进行了ALK与EGFR检测的病例中,共6例存在双基因突变(0.36％);947例同时进行了ALK与KRAS检测,共4例存在双基因突变(0.42％);943例同时进行了EGFR与KRAS突变检测,未发现双突变病例.结论:非小细胞肺癌患者ALK,EGFR和KRAS基因的突变与患者的年龄、性别、组织学类型均存在相应的联系,个别病例可以出现ALK融合基因与EGFR或KRAS突变共存.     

多西他赛在控制晚期非小细胞肺癌恶性胸腔积液的 疗效和安全性评估

目的 研究多西他赛在控制晚期非小细胞肺癌恶性胸腔积液的疗效和安全性。方法 将2016年1月~12月本院接收的晚期非小细胞肺癌恶性胸腔积液患者152例,根据按照电脑随机分组原则分为两组,每组76例。两组均行胸腔穿刺术,对照组给予培美曲塞,观察组给予多西他赛治疗。将两组患者的临床疗效、不良反应发生情况和ECOG评分进行比对。结果 观察组晚期非小细胞肺癌恶性胸腔积液患者的临床总有效率89.47%,高于对照组的65.79%,差异有统计学意义（P＜0.05）;胃肠道反应、胸痛、肾毒性不良反应的发生率和治疗后ECOG评分均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 多西他赛应用在晚期非小细胞肺癌恶性胸腔积液患者中取得疗效确切,临床安全性较高。     

长链非编码RNAuc.339在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：分析uc.339在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：非小细胞肺癌新鲜标本及其癌旁肺组织各30例,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测uc.339在非小细胞肺癌组织及其癌旁肺组织中的表达,分析差异性及其与临床病理特征的关系。癌性胸腔积液及非癌性胸腔积液各20例,离心沉淀,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测uc.339在癌性胸腔积液及非癌性胸腔积液中的表达;免疫组织化学检测P53在非小细胞肺癌中的表达。结果：uc.339在非小细胞肺癌组织中的表达低于癌旁肺组织(P<0.05),与临床分期有相关性(P<0.05),与p53的表达呈负相关(P<0.05),而与肿瘤病理类型、年龄、性别无明显相关性(P>0.05);uc.339在癌性胸腔积液中的表达低于非癌性胸腔积液(P<0.05)。结论：uc.339可能作为一种抑癌因子作用于非小细胞肺癌的发生、发展中,其作用机制可能与p53信号通路有关,在作为肿瘤标志物、判断预后及靶向治疗等方面具有应用价值。     

恩度联合含铂类化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌胸腔积液急性发作的临床疗效观察

目的：观察恩度联合含铂类化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌胸腔积液急性发作的临床疗效。方法：选择2014年3月至2016年1月在我院接受治疗的晚期非小细胞肺癌胸腔积液急性发作患者100例,按照随机抽签的方式将其分为观察组和对照组,对照组患者给予单纯的含铂类化疗,观察组则给予恩度联合含铂类化疗,治疗结束后,观察两组的临床疗效。结果：治疗后,观察组的总缓解率为88%、生活质量总改善率为82%,明显的高于对照组的总缓解率56%、总改善率44%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组胸水VEGF、HIF-1α水平分别为(334.7±81.4) pg/mL、(42.7±3.9) ng/L明显的低于对照组胸水VEGF水平(451.7±93.2) pg/mL、HIF-1α水平(48.9±3.2) ng/L,且观察组的肿瘤标记物水平明显的低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);观察组在治疗期间总共发生69人次不良反应,对照组总共发生68人次不良反应,两组比较无显著差异(P>0.05)。结论：恩度联合含铂类化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌胸腔积液急性发作具有显著的临床效果,有效地降低患者胸水VEGF、HIF-1α水平,且不会增加不良反应的发生。     

Detection of EGFR mutation in supernatant,cell pellets of pleural effusion and tumor tissues from non-small cell lung cancer patients by high resolution melting analysis and sequencing

To determine epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation in advanced non-small cell lung cancer (NSCLC) patients and compare the detection efficiency between different sample resources, both high resolution melting (HRM) analysis and direct sequencing method were used to analyze 36 pleural effusion samples and 22 matched biopsy tumor tissues collected from NSCLC patients. For each pleural effusion sample, the supernatant and the cell pellets were examined separately. Among all the 36 cases of pleural effusion samples, 18 mutations of EGFR were found in cell-free supernatant while 13 mutations were found in the cell pellets as detected by HRM analysis. In the 22 matched samples, 13 cases of EGFR mutations were identified in paraffin-embedded biopsy tissue samples, 12 cases in the cell-free supernatant and 9 cases in the cell pellets of pleural effusion. EGFR mutations in 15 cases out of the total 36 pleural effusion samples detected by direct sequencing were also identified by HRM analysis, giving 100% efficiency for HRM method. The results established the important role of HRM as a reliable and efficient method to determine EGFR mutation status and indicated the feasibility of using pleural effusion in replacement of biopsy tissues in particular clinical cases. Furthermore, the cell-free supernatant of pleural effusion might be a better resource for mutation detection than cell pellets.     

克唑替尼在ALK阳性中晚期非小细胞肺癌中的疗效观察

目的：探讨克唑替尼治疗晚期间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因阳性中晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的近期疗效及毒副反应。方法：回顾性分析43例ALK阳性的中晚期NSCLC患者,服用克唑替尼治疗,服用至病情进展或出现不可耐受的毒副反应,随访12个月,观察疗效。结果：克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC的疾病控制率(disease control rate,DCR)为93%(3/43),客观缓解率(objective response rate,ORR)为62%(26/43),中位无进展生存时间(progression free survival,PFS)为7.0个月(95% CI,6.0~8.0月),不良反应主要为消化道症状,其次是谷丙转氨酶升高,视觉障碍,大部分为1~2级。结论：克唑替尼作为NSCLC患者的多靶点靶向治疗,具有良好的疗效及安全性,不良反应轻微。