4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的 探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制.方法 将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50 μmol/L4-HNE作用4 h组,观察4-HNE作用4 h后的细胞凋亡情况.Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况.结果 细胞经30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变.对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50μmol/L 4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45.30 μmol/L和50 μmol/L 4-HNE组与对照组及10 μmol/L 4-HNE组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10 μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 30、50 μmol/L 4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡.     

单细胞蛋白质组图谱鉴定3,3′-二吲哚甲烷诱导乳腺癌的干细胞特性

目的 3,3’-二吲哚甲烷（DIM）是一种由吲哚-3-甲醇转化而来的二聚体化合物，被认为在乳腺癌化学预防药物具有应用前景。本研究首次从单细胞水平探讨了DIM诱导乳腺癌干细胞（CSC）的可塑性。方法 采用MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪检测MCF-7细胞周期分布和凋亡情况。采用单细胞质谱流式技术（CyTOF）检测DIM诱导的MCF-7细胞的单细胞蛋白质组学特征及其对CSCs的可塑性。结果 DIM呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖。当DIM浓度为10、20、30μmol/L时，DIM分别诱导7%、11.3%和15%的细胞凋亡，S期细胞比例分别由16.6%降至15.1%、14%和8.5%，流式细胞仪检测结果显示，DIM处理后MCF-7细胞CD133+Nanog+亚群比例明显增加。SPADE分析显示DNA损伤和凋亡阳性细胞主要发生在干性标志表达相对较低的类群中。通过t-SNE分析，DIM诱导的信号通路蛋白在非CSC样细胞和CSC样细胞中的变化模式有显著差异。结论 上述结果提示DIM在抑制MCF-7细胞增殖的诱导肿瘤干细胞的可塑性。     

4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制。方法将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用4h组,观察4-HNE作用4h后的细胞凋亡情况。Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况。结果细胞经30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变。对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45。30μmol/L和50μmol/L4-HNE组与对照组及10μmol/L4-HNE组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol/L、50μmol/L4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P<0.01)。结论30、50μmol/L4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡。     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的探讨吲哚-3-甲醇（13C）对人肝癌细胞株SMMC．7721的增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的13C（100、150、200、250、300、350Ixmol／L）处理细胞48h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测凋亡相关蛋白。结果13C能够抑制SMMC．7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250μmol／L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol／L时,大量细胞凋亡。13C浓度高于200μmol／L时CytC、Cleavedcaspase．9和Cleavedcaspase．3蛋白表达明显增加,且随着13C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加。结论13C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC．7721增殖并诱导其发生凋亡。     

Caspase-3抑制剂抑制长春碱诱导的人乳腺癌细胞凋亡及IκΒ-α降解

目的： 本实验通过阻断caspase-3途径,观察长春碱诱导的肿瘤细胞凋亡及胞浆内IκΒ-α蛋白降解的影响,以探索长春碱诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径。方法: 用二甲基亚砜对照、100 μmol/L caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)预处理乳腺癌Bcap37细胞3 h后,加入不同浓度的长春碱,以MTT法检测肿瘤细胞增殖能力,以细胞DNA片段分析及PI染色法检测肿瘤细胞凋亡,以蛋白免疫印迹法检测pro-caspase-3和IκΒ-α蛋白的变化。结果: 蛋白免疫印迹法证实长春碱可诱导pro-caspase-3蛋白的降解。经MTT法、DNA凋亡梯状条带法及流式细胞仪PI染色法证实,DEVD-CHO能减弱由长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡。两组的IC50分别为56.8 μmol/L和87.4 μmol/L。蛋白免疫印迹实验表明,DEVD-CHO能抑制由长春碱所诱导的IκΒ-α蛋白磷酸化降解。结论: 在长春碱诱导肿瘤细胞凋亡过程中,NF-κΒ/IκΒ信号转导途径起着重要作用,caspase-3途径参与调节。阻断该途径将减弱长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡和IκΒ-α磷酸化降解。     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

一氧化氮在吲哚昔酚抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察吲哚昔酚 (Idoxifene)对血管平滑肌细胞增殖的影响 ,并探讨平滑肌源性一氧化氮 (NO)在其中的作用。方法利用大鼠血管平滑肌细胞作为模型 ,采用血管平滑肌细胞培养、NO释放的测定、细胞计数和MTT测定等技术。评价吲哚昔酚对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果吲哚昔酚(0.01～10μmol/L)处理48h剂量依赖性的促使血管平滑肌细胞NO的释放。吲哚昔酚对血管平滑肌细胞增殖有抑制作用 ,10μmol/L吲哚昔酚能明显抑制10%胎牛血清 (FCS)和0.1μmol/L的ET-1诱导的细胞增殖。吲哚昔酚的抑制作用可被一氧化氮合酶抑制剂L -NAME(100μmol/L)和鸟苷酸环化酶 (guanylatecyclase,GC)抑制剂美蓝 (methyleneblue,MB)(10μmol/L)明显减轻。结论吲哚昔酚能抑制血管平滑肌细胞增殖 ,这种抑制作用和血管平滑肌细胞的NO释放密切相关 ,其中可能有NO -GC -cGMP通路的参与     

吲哚丙酸抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤

背景：吲哚丙酸被证明可减轻糖尿病所致的中枢神经系统炎症,但其能否抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤,目前仍缺乏相关研究。目的：通过细胞实验及动物实验探究吲哚丙酸抑制小胶质细胞M1极化治疗脊髓损伤的机制。方法：(1)体外实验：CCK8法检测BV2细胞活性并筛选最佳的吲哚丙酸使用浓度;然后将BV2细胞分为对照组、单纯给药组(50μmol/L吲哚丙酸)、脂多糖组(100 ng/mL脂多糖)、治疗组(100 ng/mL脂多糖+50μmol/L吲哚丙酸),采用Griess法检测一氧化氮含量;实时荧光定量PCR、Western Blot检测促炎相关因子的mRNA和蛋白的表达;细胞免疫荧光染色检测诱导型一氧化氮合酶的表达;Seahorse实验检测BV2细胞糖酵解压力水平。(2)体内实验：将30只SD大鼠随机分成3组：假手术组、脊髓损伤组、吲哚丙酸组。采用BBB评分与斜板实验评估大鼠脊髓损伤后功能恢复情况;免疫荧光染色检测脊髓组织中小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶的表达情况;ELISA检测脊髓组织中促炎因子白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α蛋白表达水平。结果与结论：(1)体外实验：当吲哚丙酸浓度> 50...     

丙泊酚通过抑制 JNK / ERK1 / 2 通路抑制鼻咽癌 C666-1 细胞的增殖、 迁移和侵袭 #br#

目的 探讨丙泊酚对鼻咽癌 C666-1 细胞的作用及机制。 方法 C666-1 细胞分为 4 组: 对照组、丙泊酚 22、 33、 44 μmol / L 组。 CCK-8 实验、 流式细胞术、 Transwell 实验分别检测细胞活力、 凋亡、 侵袭和迁移能力; Western 印迹检测凋亡和侵袭相关蛋白表达。 JNK 抑制剂 SP600125 或 ERK1 / 2 抑制剂 U0126与丙泊酚 (44 μmol / L) 单独或联合处理细胞后, Western 印迹检测 JNK 和 ERK1 / 2 蛋白磷酸化, CCK-8 检测细胞活性。 构建裸鼠移植瘤, 免疫组化检测瘤组织中 p-JNK、 p-ERK1 / 2 和 Ki67 的表达, TUNEL 检测瘤 组织细胞凋亡。 结果 与 0 μmol / L 组比较, 丙泊酚 33 μmol / L 及以上浓度明显抑制 C666-1 细胞活力 ( P<0. 05)。 与对照组比较, 丙泊酚 33 和 44 μmol / L 组 C666-1 细胞中凋亡相关蛋白表达升高 ( P< 0. 05), 细胞凋亡数增加 (P< 0. 05); 细胞侵袭和迁移数减少 (P< 0. 05), 侵袭相关蛋白及 JNK 和 ERK1 / 2 磷酸化水平显著降低 (P< 0. 05), SP600125 或 U0126 与丙泊酚单独或联合组均降低细胞存活率 ( P< 0. 05)。 丙泊酚显著抑制移植瘤生长并促进凋亡 (P< 0. 05)。 结论 丙泊酚通过抑制 JNK / ERK1 / 2 通路诱导鼻咽癌 C666-1 细 胞凋亡, 抑制增殖、 侵袭和移植瘤生长。     

细胞自噬在Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞中的作用

目的:探究β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经细胞损伤作用是否与调节细胞自噬相关,并基于Akt/mTOR通路对其作用机制进行初步探究。方法:5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L和25μmol/L的Aβ_(25-35)与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞共同孵育24 h,MTT法检测细胞活力,Western blot检测细胞内微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-I)、微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。选用合适浓度的Aβ_(25-35),观察自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别与Aβ_(25-35)联用后上述指标的变化。结果:各浓度Aβ_(25-35)均能引起SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力下降。Aβ_(25-35)能够增加自噬标志蛋白LC3-II蛋白表达,提高LC3-II/LC3-I水平,下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平(P0.05)。与自噬诱导剂Rapa联用,细胞活力未见明显变化,而细胞内LC3-II蛋白表达升高,LC3-II/LC3-I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P0.05);与自噬抑制剂3-MA联用,LC3-II蛋白表达和LC3-II/LC3-I水平有下降趋势,p-Akt/Akt水平明显下降(P0.05)。结论:Aβ_(25-35)可能通过下调Akt和mTOR蛋白磷酸化水平而诱导SH-SY5Y细胞自噬状态及损伤。     

羧胺三唑抑制大鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达和NF-κB活化

目的探讨羧胺三唑(CAI)对多种炎性相关因子的体外调节作用及机制。方法利用MTT法观察5~40μmol/L的CAI对细胞活力的影响。将上述浓度的CAI加入巨噬细胞中共同培养18 h,同时加入脂多糖(LPS)诱导上述细胞活化。分别用硝酸还原法和TNF-αELISA检测试剂盒测定培养基上清中NO的含量和TNF-α的水平,用Western blot法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB活化。结果浓度在5~40μmol/L范围内的CAI对正常大鼠腹腔巨噬细胞的细胞活力没有影响,但20和40μmol/L的CAI能够剂量依赖性地降低LPS诱导的NO释放(P<0.01和P<0.001)以及TNF-α分泌(P<0.05和P<0.01),且明显抑制LPS引起的iNOS蛋白表达和NF-κB活化。结论CAI对与炎性反应相关的调控因子iNOS蛋白表达和NF-κB活化具有抑制作用,该机制与抑制IκBα磷酸化和降解相关。     

PPARγ激动剂抗呼吸道合胞病毒感染作用的体外研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂的体外抗呼吸道合胞病毒(RSv)感染作用.方法 以细胞存活率和病毒抑制率为指标,应用细胞病变效应(CPE)法,观察不同浓度PPARγ激动剂对人肺腺癌(A549)细胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测PPARγ激动剂对A549细胞的毒性作用和RSV感染后细胞存活率和病毒抑制率的影响.结果 5～25μ mol/L15-脱氧前列腺素J2( 15 d-PGJ2)和10～50μmol/L罗格列酮干预的A549细胞未显示明显CPE,MTT比色法也显示以上浓度范围15 d-PCJ2和罗格列酮的A值明显高于RSV感染组(P＜0.01),但两种药物相比差异无统计学意义.15d-PGJ2和罗格列酮最适浓度分别为5μmol/L和10 μmol/L.结论 PPARγ激动剂既可减轻RSV感染后A549细胞的CPE,又可提高细胞存活率,具有体外抗RSV感染作用.     

全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin基因表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin表达的影响,为ATRA的临床应用提供理论依据.方法 应用流式细胞仪检测经不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的ATRA作用不同时间(24、48、72 h及第5、9、15天)后结肠癌LoVo细胞的周期变化.将细胞分为AT...     

Effects of hydrogen peroxide on infections of cryptosporidium parvum in vitro

Effects of hydrogen peroxide on infections of cryptosporidium parvum in vitro     

Manumycin通过诱导细胞凋亡抑制人胰腺导管癌细胞Panc-1活性

目的：观察manumycin对人胰腺导管癌细胞Panc-1的抑制效应，并探讨其诱导细胞凋亡是否经p38MAPK介导。 方法： 用MTT法检测manumycin对Panc-1细胞的抑癌作用。用caspase-3活性检测试剂盒定量检测manumycin诱导细胞凋亡的水平及评估特异性的p38MAPK抑制剂SB203580对它的影响。 结果： 经manumycin(6 μmol/L、18 μmol/L、54 μmol/L)处理Panc-1细胞24 h,对Panc-1细胞生长具有明显的抑制作用，其抑制率分别为8.9%、21.9%和67.0%，其中后二者的细胞活性与对照组相比有显著差异(P<0.01)，呈量效关系。用药24 h的IC50为34.7 μmol/L。同时，此药物可明显增加caspase-3的活性，且这一效应可部分地被p38抑制剂SB203580阻断。 结论： Manumycin可通过诱导Panc-1细胞凋亡而产生抑癌作用，p38MAPK是manumycin诱导细胞凋亡的通路之一。     

LCL161联合Z-VAD-FMK对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂小分子(Smac)类似物LCL161联合天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK诱导细胞发生坏死性凋亡对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响。方法:体外培养MCF-7、MDA-MB-231细胞株。噻唑蓝(MTT)法检测2种细胞株空白对...     

两种新型联合血液净化方案治疗中晚期重型乙型肝炎

目的 探讨血浆置换(PE)联合连续白蛋白净化系统(CAPS)或连续性血浆滤过吸附(CPFA)治疗中、晚期重型乙型肝炎临床疗效.方法44例重型乙型肝炎患者随机分为PE+CAPS组、PE+CPFA组与对照组,前两组在内科保守治疗基础上予PE+CAPS或PE+CPFA治疗,对照组仅给予内科保守治疗.比较3组临床效果及总存活率.结果 PE+CAPS组及PE+CPFA组单次治疗后血总胆红素(TBil)较治疗前分别下降42.82%和35.53%.丙氨酸转氨酶(ALT)在PE+CAPS组由(169.5±142.7)U/L降至(73.4±49.8)U/L;在PE+CPFA组由(181.3±76.7)U/L降至(95.4±523)U/L.胆汁酸(TBA)在PE+CAPS组由(122.9±49.3) μmol/L降至(64.0±30.3) μmol/L;在PE+CPFA组由(119.9±52.7) μmol/L降至(9.9±28.4)μmol/L.上述差异均有统计学意义(P值均＜0.01).治疗前后白蛋白、电解质均无显著改变.CAPS治疗后血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血氨均显著下降(P＜0.01).PE+CAPS组总存活百分比为61.5%,PE+CPFA组为53.3%,均较对照组总存活百分比(25.0%)显著提高.结论 PE+CAPS及PE+CPFA是治疗中、晚期重型乙型肝炎安全而有效的方法 ,能明显提高患者存活百分比.     

Effect of multiple doses of endotoxin on production of nitric oxide by endothelial cells

Effect of multiple doses of endotoxin on production of nitric oxide by endothelial cells     

β-淀粉样蛋白25-35对培养的大鼠隔区神经元存活和生长的影响

目的：探讨β－淀粉样蛋白对隔区神经元的作用。方法：采用神经细胞培养技术、ＭＴＴ法、免疫细胞化学及图像分析技术,观察“老化”及正常的β－淀粉样蛋白２５－３５片段对隔区神经元存活、生长及胆碱能神经元胞体中胆碱乙酰转移酶活性的影响。结果：“老化”的β－淀粉样蛋白２０ｕｍｏｌ／Ｌ组的隔区神经元光密度值及突起长度比对照组,１０ｕｍｏｌ／Ｌ组及未“老化”的２０ｕｍｏｌ／Ｌ组均明显;胆碱能神经元的突起长度及胞体     

雌激素对豚鼠心室肌细胞的非基因组效应研究

目的研究雌激素对豚鼠心室肌细胞的非基因组作用.方法方法采用全细胞膜片钳技术.结果17β-雌二醇1 μmol/L和3 μmol/L在1～2 min内快速抑制INa峰值,抑制率分别13.25%±4.71%,32.46%±4.82%.1 μmol/L 17β-雌二醇亦可影响INa的电流-电压(I-V)曲线,使INa电流密度值在-30mV～+30 mV膜电位下显著降低.在-20 mV处,INa电流密度值由-120.48±7.05 pA/pF降至-101.91±11.00pA/pF(P＜0.01).在+30 mV处,INa电流密度值由-39.55±10.50pA/pF降至-29.88±6.21pA/pF(P＜0.05).17β-雌二醇的抑制效应被DNA转录抑制剂-放线菌素D所阻断.且抑制效应与豚鼠的性别无关.结论雌激素通过推测的非基因组效应快速抑制豚鼠心室肌细胞钠电流(INa),且该效应不被放线菌素D所阻断.