聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。     

哈蟆油的真伪鉴别

目的：正确区分哈蟆油、青蛙油和蟾蜍油．从而为哈蟆油的鉴别扣应用提供安全有效的依据。方法：用性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别和膨胀度实验来鉴别哈蟆油、青蛙油和蟾蜍油。结果：哈蟆油与青蛙油、蟾蜍油在性状、显微、薄层色谱、膨胀度上均有较大的差别。结论：此方法简单易行,研究结果可为鉴别哈蟆油提供科学依据和理论基础。     

哈蟆油与蟾蜍输卵管的鉴别

目的：为鉴别哈蟆油与蟾蜍输卵管提供方法。方法：对哈蟆油与蟾蜍输卵管进行性状、显微、薄层色谱、膨胀度的鉴别、比较。结果：两者存在较大差异．结论：建议增加《中国药典》哈蟆油的鉴别方法，增强鉴别的专属性。     

蛤蟆油的真伪鉴别

本文通过对蛤蟆油的来源、基原及品质等方面鉴别真伪.常见的蛤蟆油伪品有黑龙江林蛙油、蟾蜍油、青蛙油等.     

对中国药典用1-甲基海因鉴别哈蟆油方法的商榷

目的检测哈蟆油及林蛙各组织中1-甲基海因（1-methylhydantoin,1-MID）。方法采用GC-MS法测定哈蟆油及林蛙各组织中1-MID。结果哈蟆油及林蛙其他组织均可检出1-MID。结论建立了哈蟆油中1-MID测定的方法;在林蛙的有关组织中均检测到含量不等的1-MID,用1-MID作为哈蟆油真伪鉴别的专属性有待研究。     

哈蟆油和哈蟆皮脂肪酸成分的比较分析

目的：比较分析哈蟆油和哈蟆皮脂肪酸成分。方法：分别用不同的方法处理哈蟆油和哈蟆皮，并采用气相色谱技术对其进行分析。结果：共检出25种脂肪酸。其中7种饱和脂肪酸，11种多不饱和脂肪酸（PUFA），7种单不饱和脂肪酸。对于哈蟆皮主要以棕榈酸、棕榈烯酸、油酸、亚油酸、次亚油酸、花生四烯酸（AA）、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）为主，哈蟆油主要以棕榈酸、棕榈烯酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、次亚油酸、AA、EPA为主。结论：哈蟆皮中的多不饱和脂肪酸相对含量高于哈蟆油。     

哈蟆油的研究进展

目的对哈蟆油研究进展进行综述,为哈蟆油的进一步研究奠定基础。方法查阅相关文献,对近期的30篇文献从其化学组成、药理作用、质量评价方法以及临床应用等方面对哈蟆油的研究进展进行综述。结果与结论哈蟆油中主要含有蛋白质和氨基酸、脂肪酸、激素等成分;其具有提高机体免疫功能和应激性能、抗氧化和抗衰老、调节血脂、影响生长发育和性功能、耐缺氧和抗焦虑、抗疲劳、镇咳祛痰、调节运动失调等药理活性;质量控制和鉴定方法主要有光谱法、色谱法、生物化学方法等;在临床上也有广泛的应用。     

蛤蟆油与混淆品癞蛤蟆油的鉴别

目的探索蛤蟆油与混淆品癞蛤蟆油的有效鉴别方法。方法采用来源与动物形态鉴别区分;性状鉴别;水试与膨胀度测定;显微鉴别的方法进行对此鉴别。结果正品与混淆品在动物形态性状、水试、膨胀度测定、显微鉴别中具有明显不同的鉴别特征、能有效别别蛤蟆油与混淆品癞蛤蟆油。结论实验方法简便而又准确,用于喻蟆油的购进检查验收实用性强,能有效确保药材质量的稳定性。     

星点设计-效应面法优化哈蟆油腺嘌呤提取工艺

目的采用星点设计-效应面法优选哈蟆油中腺嘌呤的提取工艺。方法采用HPLC测定腺嘌呤含量,以Inertsil ODS-SP Extend C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm)为色谱柱,流动相甲醇-水,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长260 nm,柱温25℃,进样量10μL。以腺嘌呤为考察指标,通过星点设计-效应面法考察甲醇浓度、提取时间、提取温度对哈蟆油腺嘌呤提取工艺的影响。结果腺嘌呤对照品进样量在17.73~110.33μg/mL呈良好线形关系,回归方程为Y=0.104 5 X+0.100 1,R2=0.999 6,平均回收率为97.84%,RSD为1.76%(n=6)。最佳提取工艺为甲醇浓度73%,提取时间68 min,提取温度61℃,哈蟆油得率为465.30μg/g。结论优选的哈蟆油腺嘌呤提取工艺简便、稳定。     

哈蟆油的检查及薄层方法初探

本文用改进的水试法和薄层方法对真伪哈蟆油进行了检查和鉴别，方法准确、易行、重现性好．     

Authentication of oviductus ranae and its original animals using molecular marker

Two pairs of diagnostic primers, IHm01-L/IHm01-H and IHm02-L/IHm02-H, for distinguishing the Chinese crude drug Oviductus Ranae from its substitutes were designed based on sequences of Cyt b gene fragment of the original animals of the drug and substitutes. Total DNAs were extracted from crude drugs purchased from five drugstores in different regions, as well as from original animals of the drug, Rana chensinensis, and seven species of related ranid species. Diagnostic polymerase chain reactions (PCRs) were performed using the two pairs of primers with the total DNAs of the original animals as a template. The result showed that a 240 bp DNA segment was clearly amplified from all templates of Rana chensinensis using primers IHmO1-L and IHm01-H, whereas no DNA band appeared from other templates. While using primers IHm02-L and IHm02-H, we got a clear 140 bp DNA band from all the templates of R. huanrenensis and 3 oviducts of the same species, no PCR product was observed from the other samples. A set of PCR reactions was employed to identify crude drugs from the five drugstores using the two pairs of primers together with HsmL1 and HsmH1 reported in our previous study. The results show that only 20% of the Oviductus Ranae currently sold in markets are qualified products and the rest are not.     

干蟾皮药材质量标准研究

本文旨在完善干蟾皮药材的质量标准.采用显微鉴别法、薄层色谱法鉴别干蟾皮;按《中国药典》规定方法检测干蟾皮的水分和醇溶性浸出物;用高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.初步建立了干蟾皮显微鉴别法、薄层色谱方法及HPLC含量测定方法;制定了水分、醇溶性浸出物的限度.本研究为干蟾皮药材质量标准的提高提供参考.     

哈蟆油中免疫活性部位的提取工艺与药效学研究

目的:研究哈蟆油中免疫活性部位的最佳提取工艺,并通过药效学实验验证其免疫调节作用。方法:采用正交试验,以酶解液的水解度、收率为指标,利用酶法对哈蟆油中蛋白质进行提取;并通过腹腔注射不同剂量的环磷酰胺复制免疫低下和免疫增强模型小鼠,以脏器指数、吞噬指数为指标,验证哈蟆油中免疫活性部位的免疫调节作用。结果:哈蟆油中蛋白质分2次水解出,第1次水解的最佳工艺为加木瓜蛋白酶2000u·g-1,调pH值至6.0,在45℃下提取4.5h;第2次水解的最佳工艺为固液比为1∶20(V/V),调pH值至6.0,在40℃下提取4.5h;药效学实验证明0.1g·kg-1哈蟆油提取物对免疫低下模型小鼠免疫功能有显著增强作用(P<0.01);0.2g·kg-1哈蟆油提取物对免疫增强模型小鼠免疫功能有显著抑制作用(P<0.01),并对免疫器官有一定的保护作用。结论:所选工艺合理、可行,提取的蛋白质有一定的免疫调节作用。     

中华大蟾蜍耳后腺全长cDNA文库的构建

目的构建中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)耳后腺全长cDNA文库。方法采用TRIzol法提取耳后腺总RNA,经亲和色谱纯化获得总mRNA。以总mRNA为模板,利用In-FusionSMART-erTMDirectional cDNA Library Construction Kit获得初始文库,测定文库滴度、重组率及插入片段长度。随机选取211个克隆进行测序。结果初始文库的滴度为1.3×109cfu.L-1,重组率90%,插入片段大小分布为0.4～4.0 kbp,平均片段大小约为1.1 kbp。共获得180个表达序列标签(ex-pressed sequence tag,EST)。结论此方法所构建文库各项指标均符合要求,为从功能基因组水平研究中华大蟾蜍耳后腺的基因表达及其功能奠定基础。     

哈蟆油延缓衰老的作用机制研究

目的：研究哈蟆油抗衰老的作用机制。方法：实验分为空白对照、衰老/免疫低下模型与哈蟆油高、中、低剂量（0.4、0.2、0.1g·kg-1）组。采用皮下注射D-半乳糖复制小鼠衰老模型,测定肾脏丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量和髓过氧化物酶（MPO）、黄嘌呤氧化酶（XOD）的活性;采用深部X射线照射复制小鼠免疫低下模型,以气相色谱法测定小鼠血液中脂肪酸的含量。结果：与空白对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏MDA含量显著上升,XOD活性显著升高,NO、GSH含量显著下降,MPO活性显著下降（P〈0.01或P〈0.05）;与衰老模型组比较,哈蟆油高、中、低剂量组小鼠MDA含量显著降低,XOD活性显著减弱,MPO活性显著增强（P〈0.01或P〈0.05）,哈蟆油低剂量组NO含量显著升高（P〈0.01）。与空白对照组比较,免疫低下模型组二十碳五烯酸（EPA）/二十碳四烯酸（AA）、EPA、脂肪酸总量、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸（PUFA）含量显著降低（P〈0.05或P〈0.01）;与免疫低下模型组比较,哈蟆油高、中、低剂量组二十二碳六烯酸（DHA）、EPA、脂肪酸总量、n-3系PUFA、单不饱和脂肪酸、PUFA含量显著增加（P〈0.05或P〈0.01）,哈蟆油中、低剂量组EPA/AA显著降低（P〈0.01）,蛤蟆油低剂量组DHA/AA、饱和脂肪酸含量显著减少（P〈0.05或P〈0.01）。结论：哈蟆油具有显著的抗氧化作用,可以增加免疫力低下小鼠体内不饱和脂肪酸含量,这些可能是其延缓衰老的机制之一。     

干蟾皮炮制前后两种毒性成分的含量比较

目的:测定干蟾皮饮片(生品)和制干蟾皮饮片(砂炒)中2种主要毒性成分含量,分析炮制对毒性成分的影响.方法:收集10批干蟾皮饮片,8批制干蟾皮饮片,采用HPLC-DAD法测定样品中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.结果:在干蟾皮中华蟾酥毒基的含量均值为0.51(0.14～1.74)mg·g-1;脂蟾毒配基的含量均值为0.75 (0.02～3.16)mg·g-1;在制干蟾皮中华蟾酥毒基的含量均值为0.17(0.02～0.41)mg·g-1;脂蟾毒配基的含量均值为0.22(0.004～0.87)mg·g-1.结论:炮制品中2种毒性成分的含量低于干蟾皮药材;华蟾酥毒基和脂蟾毒配基成分的含量下降是经炮制而减毒的.     

林蛙油的成分及药理研究进展

对林蛙油的成分、药理作用和展望作了综述。药理作用主要有抗疲劳、增强机体免疫力、镇咳祛痰、抗衰老作用、滋阴养颜、调节血脂、抗缺氧、调节机体免疫功能和应激性及抗焦虑等。     

哈蟆油的化学成分

利用气相色谱／质谱法，对哈蟆油石油醚提取物分离出的脂肪酸进行分析，检定出１６种经甲酯化处理的脂肪酸及６种脂肪酸乙酯．