定量测定抗链球菌溶血素“O”的检测分析

目的 探究定量测定抗链球菌溶血素“O”的检测效果。方法 选取2016年1月~2017年12月我院儿科收治的130例接受抗链球菌溶血素“O”测定的患儿作为研究对象,采用颗粒增强免疫比浊法检测抗链球菌溶血素“O”,比较不同性别和不同季度儿童抗链球菌溶血素“O”（ASO）检测的阳性率。结果 男性患儿抗链球菌溶血素“O”的阳性率为97.06%,高于女性患儿的29.03%,差异有统计学意义（P＜0.05）;第一季度和第四季度经过检测后抗链球菌溶血素“O”的阳性率分别为94.29%和96.88%,均高于第二季度和第三季度的41.18%和17.24%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 抗链球菌溶血素“O”阳性率与患儿自身性别以及季节可能有关,其中男性患儿以及冬春季节影响更甚。     

链球菌溶血素O提高细胞的通透性

背景：实验发现链球菌溶血素O引起的细胞通透在一定程度上是可逆的,链球菌溶血素O产生的孔道在Ca2+存在的情况下可以自然封闭。 目的：观察链球菌溶血素O是否可以使猪成纤维细胞的通透性发生改变,及不同质量浓度的链球菌溶血素O对细胞状态的影响。 方法：分别使用质量浓度为0,230,300,400 μg/L的链球菌溶血素O溶液处理猪成纤维细胞,孵育50 min后,加入PI染液,观察细胞的通透率。加入含Ca2+的培养液封闭细胞后,分别观察细胞的形态变化及增殖能力的变化。 结果与结论：随着链球菌溶血素O溶液质量浓度的增加,细胞的通透率只轻度提高。链球菌溶血素O处理细胞后,细胞的形态没有发生明显的改变。质量浓度为230 μg/L的链球菌溶血素O溶液对细胞的增殖能力无明显影响,而300 μg/L和400 μg/L的链球菌溶血素O溶液明显地降低了细胞的增殖能力。提示质量浓度为230 μg/L的链球菌溶血素O溶液可以提高细胞的通透性,并保持细胞正常的形态及增殖能力。     

全自动生化分析仪检测溶血指数的临床应用

目的 探究检验标本溶血的原因和针对性干预措施,优化分析前环节,提高检验质量.方法 选取2019年1月至2020年12月临床送检的98617例静脉血标本,采用VITROS 5600生化免疫分析仪自动检测溶血指数(HI),观察溶血标本的分布情况及构成比.利用实验室信息系统(LIS)调查溶血标本的相关信息,分析、总结影响标本...     

一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

目的 使用重叠PCR方法构建构建△A146Ply突变体,原核可溶性表达△A146Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)在不同血清型肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SPN)中的表达情况.方法 以SPN D39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体ply基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△A146ply突变体.通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况.结果 突变体基因测序结果显示,Ply146位密码子GCT 3个碱基被缺失,△A146ply突变体构建成功,并实现了△A146Ply的可溶性表达,得到纯度＞90 %的重组蛋白.△A146Ply蛋白浓度为100 000 ng/ml亦未表现出溶血活性.△A146Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性.Western印迹结果显示,△A146Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应.结论 △A146Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体.     

肺炎链球菌溶血素黏膜免疫抗定植保护作用的研究

目的 原核表达ΔA146 Ply蛋白,评价ΔA146 Ply黏膜免疫对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)在宿主鼻咽部定植的保护作用.方法 IPTG诱导、Ni-NTA树脂纯化获得纯化的ΔA146 Ply蛋白,经黏膜免疫BALB/C小鼠,制备其特异性抗血清;进行体内抗定植实验,观察小鼠...     

肺炎链球菌核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性研究

目的 研究肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,PN)核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性.方法 将肺炎链球菌溶血素全长基因和切去羧基端33个核苷酸的基因分别插入到质粒pVAX1载体中,构建成Ppn和Ppnd两种核酸疫苗.采用体内电转染初免结合相应蛋白质抗原加强的策略免疫恒河猴.结果 切去肺炎链球菌溶血素基因羧基端33个核苷酸.表达的重组截短溶血素蛋白保留了抗原性但去除了溶血活性,从而保证了疫苗的安全性.给恒河猴肌肉内注射500μg核酸疫苗加电转染能诱导出特异性抗体免疫应答,用相应蛋白质加强免疫后血清抗体几何平均滴度提高了约4倍.结论 采用电转染技术结合蛋白质加强免疫的策略,能增强肺炎链球菌溶血素核酸疫苗在恒河猴体内的特异性抗体水平.     

O型血伴血清IgG抗A(B)抗体效价轻度异常产妇致新生儿溶血的危险因素分析

目的 探索O型血伴血清免疫球蛋白G(IgG)抗A(B)抗体效价轻度异常产妇致新生儿溶血（HDN的危险因素。方法 回顾性分析2018年3月至2022年8月于海南省妇女儿童医学中心治疗的200例O型血伴IgG抗A(B)抗体效价轻度异常产妇作为研究对象,根据是否出现新生儿溶血分为2组：病例组和对照组,其中病例组52例,对照组148例。收集并记录每个产妇的年龄、孕次、孕周、分娩方式,以及新生儿性别、血型、身长、体质量、Apgar评分等临床资料。采用多因素Logistic回归筛选危险因素,进行相关性分析和敏感性分析。结果 单因素分析表明,新生儿身长、新生儿体质量、新生儿Apgar评分、产妇年龄、产妇孕次、孕周组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。将单因素分析中P<0.05的临床变量纳入多因素Logistic回归,筛选出的危险因素为新生儿身长、新生儿体质量、新生儿Apgar评分、产妇年龄、孕周（P<0.05）。最终的模型为Logit(P)=22.911-0.067×新生儿身长-0.890×新生儿体质量-0.584×新生儿Apgar评分+0.176×产妇年龄-0.453×孕周...     

抗李斯特菌溶血素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的: 研制抗李斯特菌溶血素(LLO)的单克隆抗体(mAb).方法: 通过诱导重组大肠杆菌BL21(pGEX-6p-1-hly), 以SDS-PAGE分离菌体蛋白, 切割目的蛋白LLO-GST条带, 研磨粉碎后免疫BALB/c小鼠, 取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合.利用亲和层析法纯化目的蛋白, 作为检测抗原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定腹水效价, Dot-ELISA、 Western blot分析mAb的特异性.结果: 获得3株稳定分泌抗LLO mAb的杂交瘤细胞株3B6、 4D1、 5D10, 其Ig亚类均为IgG1.3B6、 4D1、 5D10腹水的ELISA效价分别为1:2×105、 1:2×105、 1∶1×105.Western blot试验中, 3株mAb均能与融合蛋白LLO-GST发生反应出现特异性条带, 而与纯化蛋白GST不反应.在Dot-ELISA试验中, 3株mAb均能与表达LLO的细菌发生特异性反应.结果表明, mAb 3B6、 4D1、 5D10是针对LLO的特异性mAb.结论: 成功地制备了抗LLO的mAb, 为进一步研究LLO的生物学特性、产单核细胞李斯特菌的致病机制, 以及建立产单核细胞李斯特菌(LM)快速检测技术奠定了基础.     

某国产肌酐试剂在日立生化分析仪上检测的性能评价

目的评价某国产酶法肌酐试剂在日立7600全自动生化分析仪上的分析性能。方法对该试剂进行相关性能验证,并与迈瑞配套肌酐试剂进行比对。结果批内精密度(CV)为0.93%、0.47%,实验室内不精密度(CV)为2.18%、0.78%;正确度验证相对偏倚小于6%;线性范围为13.16~8206.5μmol/L(R2=0.999≥0.95),最大稀释倍数为16;临床可报告范围为13.16~131304.00μmol/L;与迈瑞BS-800M比对肌酐检测结果具有良好的一致性。结论该国产酶法肌酐试剂在日立7600全自动生化分析仪上的分析性能良好,可满足临床应用需求。     

抗球蛋白试验及抗体放散试验在脐带血检验的应用研究

为了早期诊断新生儿溶血病 (HDN) ,本文随机对本院妇产科的 90 8例新生儿脐带血做了抗球蛋白 (coombs)试验和抗体放散试验。结果 :在母子ABO血型不相配合的 2 2 2例新生儿脐带血中 ,有 2 5例直接Coombs试验或抗体放散试验阳性 ,以母子血型O -A(B)组合为主。经跟踪检验 ,这 2 5例阳性的患儿中有 15例 (6 0 % )发生高胆红素血症 ,直接Coombs试验(DAT)和抗体放散试验与间接Coombs试验 (IAT)在HDN诊断方面有很好的相关性。结论 :脐带血Coombs试验和抗体放散试验是早期诊断HDN的有效方法 ,应进一步推广使用     

叉头框蛋白O1介导的自噬途径在抗阻训练缓解低氧诱导大鼠肌萎缩中的作用

目的：探究抗阻训练对缓解低氧诱导大鼠肌萎缩的作用,以及该过程中叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FoxO1)介导的自噬途径的调节机制。方法：40只SD大鼠随机分为常氧安静（normoxic control,N）组、常氧训练（normoxic resistance training,R）组、低氧安静（hypoxic control,H）组和低氧训练（hypoxic resistance training,HR）组,每组10只。低氧各组生活在氧浓度为12.4%的低氧房中,训练各组隔天进行递增负重爬梯训练,干预4周。期间记录大鼠的摄食量与体重;干预结束后,测量大鼠体成分;称量趾长伸肌（extensor digitorum longus,EDL）湿重;HE染色观察肌纤维形态并测量纤维横截面积（fiber cross-sectional area,FCSA）;自噬PCR芯片检测自噬相关基因（autophagy-related genes,ATGs）的表达,分析差异基因的功能富集,并与FoxO1进行互作分析,筛选差异基因进行芯片准确性验证;Western blot测试...