A Study on Preparation of Anti-helicobacter Pylori Egg Yolk IgY and Its Biological Activity

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY.方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度.结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90％以上,含量为6.25 g/L.结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体.     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白IgY的制备及生物活性的研究

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY。方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度。结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90%以上,含量为6.25 g/L。结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体。     

抗HLA-A*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。     

抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础.方法 制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200 μg,初次免疫后28 d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10 d.水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化.结果 免疫后55 d的每个鸡蛋能提取40~55 mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35 ku和60 ku,即IgY的轻链和重链.初次免疫后10 d左右出现抗体,至免疫后50~55 d为高峰,效价达到1 ∶ 10 000以上.IgY与人血清抗体均可识别30 ku处钩虫抗原.结论 十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础.     

抗哇巴因抗体IgY的制备及其应用

目的 制备高度特异性的抗哇巴因多克隆抗体,并将其应用于组织中内源性哇巴因的免疫学检测.方法 采用哇巴因.牛血清蛋白耦联物作为免疫原免疫母鸡.免疫后1周收集鸡蛋.鸡蛋黄采用PEG-6000方法进行纯化分离,并采用12%SDS-PAGE分析其纯度.酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价.然后应用IgY的竞争性酶联免疫吸附法检测哇巴因水平,并将IgY应用于大鼠肾上腺组织中内源性哇巴因的检测.结果 IgY抗体效价在第二次免疫后迅速升高,最高效价达到1:10240,并持续至少4周左右.竞争性酶联免疫吸附法检测哇巴因的批内差异及批间差异分别为2.03%、2.34%.免疫组化结果显示内源性哇巴因主要分布于大鼠肾上腺皮质的网状带,髓质未见明显阳性颗粒.结论 免疫母鸡简单、快速,并且高效价抗体持续时间较长.同时本研究结果提示IgY抗体可用于常规免疫学检测.     

抗HPV16L1 IgY抗体的制备及活性检测

目的 制备出高特异性的抗HPV16L1 IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法.方法 用纯化HPV16 L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性.结果 3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10 240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1 结合.结论 采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据.     

抗白念珠菌鸡卵黄抗体的制备及温度对其效价的影响

目的:制备抗白念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)并检测其生物学性能.方法:白念珠菌标准菌株10231灭活后作为抗原免疫25周龄产蛋海蓝鸡,从水溶法提取鸡卵黄IgY抗体.用考马斯亮蓝染色法测定IgY抗体提取液的蛋白浓度.用Tris-tricine电泳测定提取蛋白的相对分子质量、纯度,Western blot确定蛋白来源.以免疫组织化学检验抗白念珠菌IgY抗体与白念珠菌结合的特异性.ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的抗菌效价.结果:IgY抗体液中蛋白浓度为7.9 g/L,IgY抗体的纯度达到91.5%.提取的IgY抗体与鸡血清和正常鸡IgY抗体具有同源性.提取的IgY抗体可与白念珠菌发生特异性结合. ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的效价达到1:12 000.结论:研究得到的IgY,产量和纯度高,效价好,体温条件下48 h效价没有降低.在体外能够特异性地与白念珠菌结合.     

含抗幽门螺杆菌特异性抗体免疫牛奶的制备

目的 :寻求幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的防治方法。方法 :应用空肠弯曲菌选择培养基对胃镜取出的胃粘膜组织进行Hp培养及细菌学检查 ,用该菌免疫牛 ,采用 0、15、30、4 5天四次接种免疫 ,制备含高效价的抗Hp抗体的牛奶。 结果 :在牛被免疫 4 5天时 ,经琼脂免疫双扩散法检测 ,牛血中抗Hp抗体效价为 1:32 ,牛奶中抗Hp抗体的效价为 1:16。牛被免疫 5 0天时 ,琼脂免疫双扩散法检测 ,牛血和牛奶中抗Hp抗体效价均可达 1:32 ;酶联免疫试验 (ELISA)法检测 ,牛被免疫 5 0天时 ,牛血中抗Hp抗体效价可达 1:5 12 0 0 ,牛奶中抗Hp抗体的效价为 1:10 2 4。结　论 :经幽门螺杆菌免疫后的奶牛 ,在免疫 4 5天后即可获得高效价的抗Hp抗体牛奶。该方法为Hp感染的特异性防治开辟了美好的前景。     

乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体HBsAg-IgY的制备及体外中和作用

目的:制备特异性的乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体(HBsAg-IgY),探索抗体检测条件并进行体外中和作用试验。方法:用重组酵母乙型肝炎疫苗(HBsAg)免疫产蛋母鸡,收集鸡蛋,用鸡卵黄抗体IgY提取系统提取鸡卵黄抗体IgY;用改进的ELISA法检测抗体IgY含量,探索最佳检测条件;采用ELISA法研究IgY对Hepg2.2.15细胞系分泌HBsAg的中和试验。结果:在免疫后第1～3周,鸡卵黄抗体IgY含量开始上升,第6周达到高峰,并可持续2个月。抗HBsAg IgY可中和HepG2.2.15细胞系分泌的HBsAg,抗体在稀释度为1∶200时中和作用最强。结论:采用重组酵母乙型肝炎疫苗免疫母鸡,可持续性获得特异性抗HBsAg IgY;体外实验证实,抗HBsAg-IgY对HepG2.2.15细胞HBsAg具有中和作用。     

抗脂蛋白脂酶卵黄抗体IgY的制备

目的:用人脂蛋白脂酶制备鸡卵黄抗体,并研究其应答持久性、稳定性.方法:用纯化的人脂蛋白脂酶免疫生蛋鸡,琼脂糖免疫扩散法测定IgY抗体效价变化.PEG法结合Sephadex-150凝胶过柱提取抗体;ELISA法测抗体对酸、碱、酶的稳定.结果:免疫后大约3～4周抗体效价达到高值,此高效价可持续3个月;抗体含量为8.11mg/ml蛋黄;IgY在70℃以下基本不失活;在pH4～10时活性无明显变化;胃蛋白酶处理90min后IgY活性稳定.结论:用人脂蛋白脂酶免疫鸡可制备高效价的特异抗体IgY,抗体应答时间持久、稳定性好.