喉癌及喉咽癌颈部淋巴结微转移的检测及临床意义初探

目的 比较半连续切片H&E染色及免疫组化染色两种方法,用于检测喉及喉咽部鳞形细胞癌患者颈部常规病理学阴性淋巴结中微转移的检出率,并初步探讨其与临床病理因素及早期复发的关系。方法 对13例喉及喉咽部鳞型细胞癌患者经常规病理检查为阴性的15侧326个淋巴结, 采用50μm半连续切片苏木精－伊红染色法及细胞角蛋白CK(AE1/ AE3)免疫组化EnVison两步法行微转移灶检测, χ2 检验用于检验两种不同方法的阳性检出率。统计所有病例的各临床病理因素（年龄、性别、临床分型、pT 分期、肿瘤分级、原发灶浸润深度）,随访11～56个月（中位时间31个月）,采用χ2 检验分析各临床病理因素与微转移之间的相关性以及微转移与早期复发的相关性。结果 ①全部75个蜡块经半连续切片后免疫组化和苏木精－伊红染色切片各750张,免疫组化组中经CK(AE1/ AE3) 单克隆抗体标记后,共40张切片（5.33%）分别对应5 例(38.46 %) 患者中的7 个淋巴结(2.14 %)呈阳性反应。而相应的苏木精-伊红染色切片,若不与免疫组化对照,其阳性切片数为24张（3.20%）,分别对应2例患者的3个淋巴结。两组间阳性切片数的检出率差异有统计学意义（Ρ<0.05）;②除年龄外的各临床病理因素与微转移之间差异无统计学意义( Ρ>0.05) ;有微转移和无微转移患者的早期复发率差异无统计学意义(Ρ>0.05) 。结论 对于喉及喉咽鳞癌的颈部淋巴结微转移,单纯的苏木精－伊红染色切片,即使是连续或半连续切片,有经验的病理科医师仍然会有一定的漏检率,而免疫组化方法可提高其检出率。微转移与临床病理因素及预后间的可能相关性尚有待大样本和长期随访资料的进一步探讨。     

声门上型喉癌N0颈淋巴结微灶转移的免疫组化检测

提高声门上型喉癌颈癌转移淋巴结微小转移灶的检出率。方法应用抗细胞蛋白单克隆抗体,ＩＳＡＢ免疫组化法对４６例常规临床病理颈部淋巴结阴性的颈深上淋巴结进行监测。     

免疫组化和连续切片在检测头颈鳞癌颈淋巴结微转移中的意义

目的〓〖HTK〗探讨应用连续切片EnvisionTM法检测角蛋白表达对判断头颈鳞状细胞癌淋巴结微转移的效果及微转移对肿瘤预后的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗术中淋巴结标本行快速EnvisionTM法检测角蛋白CKAE1/AE3,与常规冰冻病理对淋巴结微转移检出率比较。对14例下咽癌、声门上型喉癌淋巴结标本连续病理切片,比较常规病理检测与EnvisionTM法对淋巴结微转移检出率。〖HTW〗结果〓〖HTK〗快速EnvisionTM法可检出2粒常规冰冻病理不能检出的淋巴结微转移,连续切片应用EnvisionTM法可检出5粒常规病理阴性的淋巴结（5/216）存在微转移灶。〖HTW〗结论〓〖HTK〗EnvisionTM法检测角蛋白CKAE1/AE3表达可快速判断头颈部鳞状细胞癌淋巴结微转移,存在多粒淋巴结微转移的患者预后可能较差。     

颈淋巴结连续切片cytokeratin免疫组化染色法在诊断头颈部癌微灶转移的应用

目的 :研究一种检测头颈部恶性肿瘤微灶转移的方法。方法 :对 5 1例临床诊断颈淋巴结阴性 (c N0 )的头颈部恶性肿瘤病人颈廓清标本同时用常规病理切片和连续切片免疫组化染色 (抗细胞角蛋白 ,cytokeratin,CK)比较其微灶转移检查结果 ,进行统计学分析。结果 :常规病理切片其颈淋巴结病理阳性 (p N+ )为 2 9.4 1% ;而连续切片抗 CK阳性率为4 9.0 2 % ,二者卡方检验有显著性差异 (P <0 .0 5 )。发现 5 1例 c N0 病人中 ,常规病理检查有 36例为 p N0 ,经组化 CK染色这 36例中又有 10例被证实为颈淋巴微灶转移 (2 7.78% )。结论 :对于头颈肿瘤的颈淋巴隐匿性病理转移的诊断 ,应用连续切片的免疫组化染色法有一定优势 ,是一种检测微灶转移较为敏感的方法。     

颈淋巴结连续切片cytokeratin免疫组化染色法在诊断头颈部癌微灶转移的应用

目的：研究一种检测头中恶性肿瘤微灶转移的方法。方法：对51例临床诊断颈淋巴结阴性（cN0)的头颈部恶性肿瘤病人颈廓清标本同时用常规病理切片和连续切片免疫组化染色（抗细胞角蛋白，cytokeratin,CK)比较其微灶转移检查结果，进行统计学分析。结果：常规病理切片其颈淋巴结病理阳性（pN^ )为29．41％；而连续切片抗CK阳性率为49．02％，二者卡方检验有显著性差异（P＜0．05）。发现51例cN0病人中，常规病理检查有36例为pN。经组化CK染色这36例中又有10例被证实为颈淋巴微灶转移（27．78％）。结论：对于头颈肿瘤的颈淋巴隐匿性病理转移的诊断，应用连续切片的免疫组化染色法有一定优势，是一种检测微灶转移较为敏感的方法。     

头颈癌患者淋巴结普通组织学检查的假阴性

头颈部鳞癌最终通常会转移至颈部淋巴结 ,普通病理学检查为阴性的淋巴结可能已发生微转移。微转移的发生率对诊断、治疗及预后判断意义重大 ,故淋巴结转移灶的准确监测至关重要 ,但亚临床阳性淋巴结的监测极为困难。据报道 ,免疫组化染色法的应用已将HE染色法为阴性的乳癌和食管鳞癌淋巴结微转移的检出率分别提高达 2 9%和 31.7%。最近 Dowlatshohi等也比较了免疫组化法及 HE染色法对 52例乳癌患者前哨淋巴结转移灶的检出率 ,分别为 58% (30 / 52 )及12 % (6 / 52 ) ,这表明隐性转移的发生率很高。Brennan等检测了因头颈部鳞癌接受手术的…     

头颈部鳞状细胞癌颈部淋巴结微转移灶的研究进展

颈部淋巴结转移的正确评估对头颈部鳞状细胞癌的预后判断及治疗有十分重要的意义。除了术前的颈部触诊和影像学检查外,术后颈清扫标本中淋巴结病理学检查也是正确评估的组成部分。近年由于免疫组织化学和PCR等分子生物学实验技术的应用,已能够检测到常规病理检查阴性的淋巴结中的微转移灶,但这些微转移灶在整个淋巴结转移评估中的地位,仍存在争议。本文复习近年有关颈部淋巴结微转移灶检测方面的文献,综述如下。     

喉鳞状细胞癌颈淋巴结微小转移灶与早期复发及预后的关系

目的 研究喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)患者存在颈部淋巴结微小转移灶与患者的预后以及生存率之间的关系.方法 对126例喉鳞癌患者择区性(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区)颈淋巴清扫标本进行HE染色,将HE染色阴性的淋巴结连续6次切片,3张行HE染色,3张行细胞角蛋白(cytokeratin,CK)AE1/AE3抗体免疫组化染色;对HE染色阳性的淋巴结再次行CK AE1/AE3抗体免疫组化染色.本组患者随访24 ～ 184个月,平均随访6.3年,复发与转移计入随访.Kaplan-Meier法计算生存率.结果 126例喉鳞癌患者接受喉部手术与颈部择区性淋巴清扫术,41例患者淋巴结HE染色阳性,85例患者HE染色阴性.85例HE染色阴性患者中,33例CK染色阳性,52例阴性.15例HE染色阳性、14例CK染色阳性和4例CK染色阴性患者在随访中发生复发或转移.本组患者的5年生存率79.8％,10年生存率60.5％.CK染色阳性患者的10年生存率为52.1％,低于CK染色阴性患者的81.2％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CK免疫组化染色是一种寻找喉鳞癌患者淋巴结微小转移灶的有效方式.CK AE1/AE3染色阳性与喉癌患者的预后有关.     

005头颈部肿瘤患者常规组织学检查中假阴性淋巴结

头颈部肿瘤患者中常规临床和组织学检查中颈淋巴结阴性者,经淋巴结连续切片、免疫组化研究或分子生物学研究可发现常规检查无法发现的微灶转移。     

Detection of occult cervical micrometastases in patients with head and neck squamous cell cancer

OBJECTIVE: The incidence of occult nodal metastases associated with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) and the clinical significance of nodal micrometastases by cytokeratin immunohistochemical analysis are examined. STUDY DESIGN: In all, 1012 lymph nodes from 50 patients treated between 1992 and 2001 at the University of Colorado Health Sciences Center (Denver, CO) were evaluated retrospectively for micrometastases. METHODS: Serial sectioning in 5-to 6-microm interval specimens stained either with hematoxylin and eosin (H&E) or immunostaining for cytokeratins using the monoclonal antibody cocktail AE1/AE3 was performed in 21 N0, 11 N1, and 14 N2 patient cases. Cases that showed scattered cells with suspect staining qualities but without morphological features consistent with HNSCC were further evaluated by epithelial membrane antigen (EMA) immunohistochemical analysis. RESULTS: H&E-stained and cytokeratin-stained sections revealed occult nodal micrometastases in 3.8% of N0 and 5% of N1 cases. Overall, 26 micrometastases were identified in N0 and N1 patients, causing 29% of N0 patients and 45% of N1 patients to be upstaged. Cytokeratin immunostaining detected micrometastases in eight cases that were negative on H&E serial sectioning. Serial sectioning by H&E alone identified three additional micrometastases. Negative EMA immunostaining confirmed the absence of malignant cells in lymph node sections that were equivocal on cytokeratin staining. CONCLUSIONS: The use of serial sectioning with H&E and cytokeratin immunohistochemical analysis increases the detection of micrometastases that are often elusive by routine processing in patients with HNSCC. Improved methods of detecting micrometastases may provide a basis for improved planning of postoperative therapy for patients already at risk for tumor recurrence.     

喉癌颈部淋巴结微转移与早期复发及预后关系探讨

目的分析pN0喉鳞状细胞癌患者颈部淋巴结微转移与早期复发和预后的相关性。方法收集本院2005年7月～2009年4月诊治的喉鳞状细胞癌患者中行颈廓清术后经常规病理学HE染色切片检查pN0癌病例31例的临床及病理资料;石蜡包埋的颈廓清术淋巴结标本行半连续切片HE染色,经多名有经验的病理科医师重新阅片,证实有无微转移灶。采用χ2检验分析微转移与早期复发的相关性,Kaplan-Meier曲线用于描述有无微转移两组患者的无瘤生存(disease-free survival)曲线分布。结果全部31例418枚淋巴结蜡块标本中发现微转移8例,除年龄、分化程度外的各临床病理因素与微转移之间均无相关性,微转移与早期复发之间无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier曲线用于描述有、无微转移两组患者的无瘤生存(disease-free survival)曲线分布,两组患者的无瘤生存率无明显分离趋势(P>0.05)。结论本研究表明pN0喉鳞型细胞癌患者中,颈淋巴结中微转移灶的存在与复发和预后无关。     

Micrometastases from squamous cell carcinoma in neck dissection specimens

Summary The incidence of micrometastases in cervical lymph nodes from squamous cell carcinomas of the head and neck was studied using routine histopathological examination. Micrometastases were found in 66 lymph nodes in 41 of the 92 tumor-positive neck dissection specimens. The detection of these micrometastases influenced postoperative treatment in 3 of the 77 patients with neck node metastases. The value of additional sectioning for detecting micrometastases was thus assessed. Sectioning at a deeper level in 600 originally histopathologically negative lymph nodes from 64 patients revealed 7 additional micrometastases in 5 patients. Antikeratin staining with a mixture of two monoclonal antibodies (AE1 and AE3) revealed 4 micrometastases in 739 originally histopathologically negative lymph nodes in 3 of 13 patients studied. Because of the unknown prognostic significance of micrometastases and the consequent arbitrary consequences for postoperative treatment, present findings show that the extra workload of immunostaining and deeper sectioning does not warrant their routine use in clinical practise.     

X染色体灭活方式检测在诊断头颈鳞状细胞癌颈淋巴微转移中的作用

目的探讨X染色体灭活检测肿瘤细胞克隆来源在诊断头颈鳞癌颈淋巴结微转移中的作用。方法对20例临床N0M0头颈部鳞癌包括10例术后病理诊断明确的颈淋巴结微转移癌和10例可疑颈淋巴结微转移癌，通过组织显微切割和蛋白酶K消化技术获得肿瘤组织DNA，在限制性酶切和PCR扩增后观察肿瘤细胞雄激素受体在X染色体上的标志，明确X染色体灭活情况；通过比较原发癌和转移灶或可疑微转移灶细胞的检测结果鉴定转移部位细胞与原发癌肿瘤细胞的克隆同源性，进而对颈淋巴转移情况做出正确诊断。结果10例不同程度表达肿瘤细胞表面标志、病理诊断明确的颈淋巴结转移癌与其对应的原发癌均为单克隆来源，并且具有相同的X染色体灭活方式，提示两者之间具有相同的克隆来源，证明颈淋巴结转移癌来自原发癌；10例原发灶不同程度地表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）和角蛋白，但颈淋巴结内可疑微转移灶不表达EGFR和角蛋白的可疑颈淋巴结微转移癌，X染色体灭活分析发现6例可疑转移灶细胞与原发癌细胞具有克隆同源性，证实为颈淋巴结内微转移；其余4例两者间不具有相同的细胞克隆来源，排除淋巴结转移癌。结论采用x染色体灭活法检测肿瘤细胞的克隆来源对诊断头颈肿瘤颈淋巴结微转移具有很好的应用前景和潜在临床实用价值。     

喉及下咽部鳞状细胞癌中血管内皮生长因子-c及其受体FLT-4表达与淋巴结转移的相关研究

目的：研究喉及下咽部鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）及其受体VEGFR-3（FLT-4）的表达情况,以及它们在肿瘤淋巴转移、微转移中的作用和意义。方法：采用免疫组织化学SP法及图像分析技术,检测49例喉及下咽部痛组织中VEGFC、FLT-4及淋巴结中VEGF-C蛋白表达和相对含量。结果：喉及下咽部癌组织中VEGF-C的表达与病理分级密切相关（均P〈0．05）,与淋巴结转移之间存在相关关系（均P〈0．05）,与临床T分期无关。FLT-4表达与VEGF-C阳性表达呈同向性改变,与淋巴结转移相关（均P〈0．05）;喉及下咽部癌组织中,FLT-4阳性脉管数与病理分级及临床T分期差异无统计学意义（均P〉0．05）。喉及下咽部癌组织中淋巴结微转移组,VEGFC、FLT-4表达与无转移组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：VEGFC在喉及下咽部癌组织中,通过其特异性受体FLT-4导致淋巴管增生,促进肿瘤淋巴转移,从而影响患者的预后;检测VEGF-C、FLT-4,对肿瘤诊断、判断患者预后具有重要临床价值。