鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５′和３′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的基因的克隆；利用英国病毒株Ｓ１全基因核酸探针与流行株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因５′端高变区核苷酸序列分析鉴定后，采用ＨａｅⅢ、ＰＶＵⅡ和ＸｂａⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株Ｓ１基因ｃＤＮＡ。结果表明，我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为６个主要的基因型；试验发现除与Ｍ４１和澳大利亚Ｔ株相近基因型毒株之外，我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异，这与病毒血清型鉴定的结果一致，鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因Ｓ１的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。     

抗HFRS病毒McAb 1A8可变区基因的克隆及序列分析

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ１Ａ８可变区基因的克隆及序列分析阎岩徐志凯姜绍谆尹文吴兴安王海涛薛小平（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）基因工程小分子抗体由于分子小，免疫原性弱，穿透力强，易于抵达抗原“峡谷”位点，因此对于研究病毒及肿瘤分子的结构...     

新疆出血热病毒S基因片段的测序和分析

目的　认识新疆出血热（ ＸＨＦ） 病毒不同分离株基因区别的本质,从分子水平揭示其基因结构与功能的关系,寻找传播及流行的原因。方法　对１９６５ 年自我国首例病人及１９８４ 年自蜱分离的两株ＸＨＦ 病毒进行了Ｓ 基因片段的克隆测序和分析。结果　两株病毒核苷酸序列同源性为９６ ．７ ％ ,与已经发表的１９６８ 年分离自我国蜱（ＨＹ１３） 和羊（Ｃ６８０３１） 的两株病毒核苷酸序列同源性均较高（９６ ．７ ％ ～９９ ％ ） ;与其它ＣＣＨＦ 病毒相比Ｓ 基因同源性为７７ ．４ ％ ～９２ ．７ ％ 。结论　计算机绘出的系统发生树状图显示我国分离的４ 株病毒形成一单个群体并进一步分为三组,提示流行源自我国。     

HIV-1型中国株E、B亚型gag基因的克隆与表达

目的 克隆和表达人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）Ⅰ型中国株Ｅ、Ｂ亚型代表株的结构基因ｇａｇ。方法 在分子流行病学调查的基础上，选择１份经部分ｇｐ１２０基因测序判定为Ｅ亚型和１份经部分ｇｐ１２０基因测序判定为Ｂ亚型的代表性样品。利用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增外周血中的前病毒。获得了结构基因ｇａｇ全长片断，并先后克隆到ｐｌｉｎ８Ｐｒ５５和ｐＦａｓｔＢａｃｌ载体中，我们首次克隆到全长的中国株Ｅ亚型ｇａｇ基     

我国2型登革病毒NS1基因的克隆及部分碱基序列的测定

将我国登革２型病毒株ＮＳ１基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段直接克隆到Ｔ－载体ＤＮＡ中。用限制性内切酶分析经蓝／白斑筛选和ＰＣＲ鉴定的阳性克隆的ＤＮＡ，证明插入片段与扩增的ＮＳ１片段的大小一致。用双脱氧链末端终止法测序结果表明，ＮＳ１基因扩增片段５’端的部分碱基序列并未发生改变。     

我国登革病毒分离株NS1基因的扩增

本研究利用逆转录（ＲＴ－ＰＣＲ）技术将由聚乙二醇浓缩的登革病毒制备的ＲＮＡ合成为双股ｃＤＮＡ，建立了扩增登革病毒大片段ｃＤＮＡ的条件。采用该方法扩增了我国登革２型病毒株的ｃＤＮＡ片段，长度为１３８３ｂｐ。它不但包括完整ＮＳ１基因，而且也包括了对ＮＳ１编码蛋白的功能起重要作用的位于其上游和下游的部分碱基序列。登革病毒大片段ｃＤＮＡ的扩增有助于对我国毒株ＮＳ１基因的克隆与表达的研究。     

人源性抗HFRS病毒抗体基因真核表达载体的构建及鉴定

构建人源性抗ＨＦＲＳ病毒基因工程抗体基因的表达载体,为其进一步在真核细胞中表达奠定基础。方法：经多次克隆将人源性抗ＨＦＲＳ病毒抗体可变区基因与启动子,增强子、前导肽序列和剪接供体信号等真有达元件及人抗体恒定区基因和抗生素选标记基因相连接。     

高滴度产病毒PA317细胞的制备及基因转移效率的研究

逆转录病毒载体的病毒滴度是其基因转移效率的最关键因素之一。用产病毒载体ψ－２细胞克隆的上清重复感染产病毒载体的ＰＡ３１７细胞克隆和用这两种产病毒细胞克隆进行乒乓上清感染，均能使ＰＡ３１７细胞克隆的病毒滴度提高１－２个数量级且无辅助病毒产生。面同样的造血生长因子应用下，以不同滴度的病毒载体重复感染人骨髓单核细胞，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ迷杂交显示，，只有高滴度的病毒载体才能将目的基因较多地转移到人骨髓骨髓核     

Presinilin1基因研究进展

Ａｌａｚｈｅｉｍｅｒ具有遗传异质性，已经证实４种ＡＤ疾病基因的存在，其中Ｐｒｅｓｉｎｉｌｉｎ１基因被认为是构成早发家族性ＡＤ的主要疾病基因，本就ＰＳ１基因的结构、功能及基基因突变在ＡＤ中的作用进行了综述。     

我国登革2型病毒43株非结构蛋白NS1基因的特征

对我国１９８７年从广西分离的登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸序列进行了分析，结果表明登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因含有１０５６核苷酸编码３５２个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与我国１９８５年海南流行高峰期分离的Ｄ２－０４株、国际参考株新几内亚Ｃ株（ＮＧＣ）、牙买加株（ＪＡＭ）、候选疫苗株（Ｓ１）和马来西亚流行株Ｍ１（登革出血热）、Ｍ２（登革休克综合征）、Ｍ３（登革热）进行比较，发现核苷酸序列的同源性分别为９２．２％，９３．７％，９３．３％，９０．７％，８９．９％，８９．５％，８９．３％，氨基酸的类似性分别为８９．８％，９２．６％，９３．３％，９１．２％，９０．６％，９０．１％，８９；９％，推断的氨基酸序列含有两个糖基化位点，分别位于氨基酸残基的１３０和２０７位，一个可能的蛋白裂解位点３５０～３５２和１０个保守的半胱氨酸残基。     

辛德毕斯病毒结构蛋白基因对宿主细胞影响的初步研究

目的 了解辛德毕斯病毒基因结构与功能的关系,阐明其分子致病分子机理。方法 构建了辛德毕斯病毒（ＸＪ－１６０病毒株）结构基因的真核表达质粒,ｐｃＤＮＡ３．１ＡＢＣ,转染ＢＨＫ－２１细胞后观察其对宿主细胞的影响。结果 转染病毒结构基因的ＢＨＫ－２１细胞,可以发生辛协毕斯病毒感染所出现的细胞毒性反应,表现为：细胞存活率降低;细胞核染色质浓缩、凝集;Ｇ１期细胞减少、而处于Ｓ期的细胞增多。结论 辛德毕斯病毒     

HNPCC基因的研究进展

遗传性非息肉病性大肠癌（ＨＮＰＣＣ）是一种常染色体显性遗传性疾病。目前已定位的ＨＮＰＣＣ基因有ｈＭＳＨ２、ｈＰＭＳ２、ＤＵＧ、ｈＭＬＨ１、ｈＰＭＳ１等五个。其中ｈＭＳＨ２、ｈＭＬＨ１的基因定位、基因结构、ｃＤＮＡ序列及常见的突变方式已见文献报道。ｈＭＳＨ２、ｈＭＬＨ１与ＭＮＰＣＣ相关性的研究表明，这两个基因的突变是绝大多数ＨＮＰＣＣ家族成员发病的原因。采用分子生物学手段对上述二基因的突变进行筛查。     

肝癌相关抗原基因的筛选和阳性克隆的序列分析

克隆肿瘤相关抗原基因,从分子水平上研究其结构与功能,对于深入了解肿瘤的发生机制很有帮助。本研究利用自制的肝癌特异性单克隆抗体（ｍＡｂ） Ｆ１１,筛选肝癌细胞ｃＤＮＡ表达文库,获得１个阳性克隆,并对其进行了序列测定及同源性比较分析。１材料和方法１． １材料抗肝癌ｍＡｂ Ｆ１１［１］为本室制备、纯化。肝癌细胞ｃＤＮＡ表达文库（载体为 λｇｔ１１）由本室构建。测序用试剂ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ＢｉｇＤｙｅＴＭ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ为ＰＥ公司产品。测序仪为ＡＢＩ ＰＲＩＳＭＴＭ ３３７ＸＬ型。１．２方法克隆的筛选按…     

慢性乙型肝炎表面抗原携带者前S1/S2基因的相似株现象

为了解慢性ＨＢＶ携带者体内ＨＢＶ病毒的状况，以选择ＨＢＶ前Ｓ１／Ｓ２为研究区段，应用半巢式ＰＣＲ法从３例慢性ＨＢＶ携带者血清中扩增出ＨＢＶ前Ｓ１／Ｓ２基因，分别将其克隆于噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８、Ｍ１３ｍｐ１９，每例随机筛选１０个阳性克隆，进行序列分析及遗传距离分析，结果发现：３例病人各克隆分别与同源性最好的ＨＢＶ野生株相比，存在着明显的碱基替代、缺失和插入。此类病人体内的ＨＢＶ株同源性差，克隆间最大的遗传距离为０．１２５。慢性ＨＢＶ携带者体内的ＨＢＶ株呈“相似株”分布。     

绿脓杆菌外毒素A的Ⅰ Ⅱ区基因的克隆与表达

绿脓杆菌外表素Ａ是由６１３个氨基酸残基组成的单链杀细胞毒素；利用ＰＣＲ技术直接从绿脓杆菌染色体ＤＮＡ中扩增了外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区的结构基因，通过酶切鉴定、ＤＮＡ序列分析，证实了克隆的基因片段为外毒素Ａ的结构基因；重组表达质粒经诱导表达后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了表达的产物为外毒素Ａ分子。对外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区结构基因的克隆表达为疫苗研制、毒素类似物的制备以及导向药物的构建打下了基础。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表达重组克隆的构建

目的构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原——裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＰＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。结果成功地构建了真核表达载体ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－４２和ＶＲ１０１２／ＴＰＡ／ＭＳＰ１－４２。结论目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟红外期，该研究对研制有效的恶性疟原虫红内期核酸疫苗是一个有益的尝试。其免疫保护作用待进一步研究。     

我国首次克隆典型遗传病基因

我国首次克隆典型遗传病基因湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室在美国ＳＢ公司的资助下，成功地克隆了“遗传性多发性外生性骨疣病”的第二个致病基因（ＥＸＴ２），并发现该基因存在两种变异性，从而实现了我国克隆典型遗传病致病基因的突破。湖南医大医学遗传学国家...     

绿脓杆菌外毒素A的I＋Ⅱ区基因的克隆与表达

绿脓杆菌外毒素Ａ是由６１３个氨基酸残基组成的单链杀细胞毒素；利用ＰＣＲ技术直接从绿脓杆菌染色体ＤＮＡ中扩增了外毒素Ａ的Ｉ＋Ⅱ区的结构基因，通过酶切鉴定、ＤＮＡ序列分析，证实了克隆的基因片段为外毒素Ａ的结构基因；重组表达质粒经诱导表达后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了表达的产物为外毒素Ａ分子。对外毒素Ａ的Ｉ＋Ⅱ区结构基因的克隆表达为疫苗研制、毒素类似物的制备以及导向药物的构建打下了基     

鸡贫血病毒VP2基因的克隆、序列分析及表达

目的：为探讨鸡贫血病毒的分子生物学特征。方法：采用ＰＣＲ方法获得允许贫血病毒的ＶＰ２基因,采用平端连接将其克隆到ＰＵＣ１１９载体上进行测序,采用粘端连接将其亚克隆到ＰＥＴ载体上并进行原核表达。结果：发现ＣＡＶ－ＳＪ１株的ＶＰ２基因共有６５１个碱基,同围外ＴＫ５８０３,２６Ｐ４,Ｃｕｓ－１、８２０２毒株的ＶＰ２基因相比分别有６、７、８、７个碱基的差别,其中３个是ＳＪ１株特有的碱基变化。由基因序列推导     

5株呼吸道合胞病毒地方株F蛋白基因序列分析

目的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ蛋白是ＲＳＶ感染免疫中最重要的病毒蛋白，为了解我国ＲＳＶ地方株Ｆ蛋白的基因状况和变异特征，随机选取北京、广州、长春和河北四个地区具有不同流行特征的ＲＳＶ地方株（Ａ亚型）５株，进行ＲＳＶＦ蛋白全基因的核苷酸序列分析。方法以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增、目的基因的克隆及序列测定，对地方株及原型株的序列进行比较分析。结果地方株Ｆ蛋白基因与原型株Ａ２株有很高的同源性，核苷酸全序列的同源性为９５．１％～９６．１％，氨基酸同源性为９６．７％～９７．４％。核苷酸有义突变率为２２．６％～２５．９％。３非编码区的核苷酸序列比蛋白编码区变异显著。河北地方株（Ｅ７３株）在３非编码区有６个核苷酸的插入。Ｆ２亚单位的氨基酸变异高于Ｆ１亚单位。在北京地方株（ＺＨＳ１３株）Ｆ１亚单位内，由具有中和能力单克隆抗体所识别的抗原表位区中存在一个氨基酸的变异。结论我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｆ蛋白基因尽管存在一定的变异，但仍有很高的同源性。地方株间Ｆ蛋白的核苷酸、氨基酸变异的位置及形式很相似，提示我国ＲＳＶ的不同流行特征可能并非由于Ｆ蛋白的基因变异所致。