小鼠白细胞介素5融合蛋白大肠杆菌的表达

将质粒ｐＢＶ－ｍＩＬ－５的小鼠白细胞介素５（ｍＩＬ－５）的ｃＤＮＡ插入表达载体ｐＥＸ３１ｂ，转化大肠杆菌ＲＲＩ，经热诱导获得高效表达，表达的重组慢白占菌体总蛋白的４０％，该融合蛋白由大肠杆菌ＭＳ２聚合酶的９９个氨基酸和ｍＩＬ－５的１１３个氨基酸组成，在菌体中以包涵体的形式存在，用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００尿素洗涤包涵体，初步纯化的重组蛋白纯度达９０％，已用于制备抗ｍＩＬ－５的单克隆抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎ     

小鼠白细胞介素5融合蛋白在大肠杆菌的表达

将质粒ｐＢＶ－ｍＩＬ－５的小鼠白细胞介素５（ｍＩＬ－５）的ｃＤＮＡ插入表达载体ｐＥＸ３１ｂ，转化大肠杆菌ＲＲＩ，经热诱导获得高效表达，表达的重组蛋白占菌体总蛋白的４０％。该融合蛋白由大肠杆菌ＭＳ２聚合酶的９９个氨基酸和ｍＩＬ－５的１１３个氨基酸组成，在菌体中以包涵体的形式存在，用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、尿素洗涤包涵体，初步纯化的重组蛋白纯度达９０％，已用于制备抗ｍＩＬ－５的单克隆抗体。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ证实ｍＩＬ－５重组蛋白能与抗ｍＩＬ－５多克隆ＩｇＧ特异结合。     

重组人白细胞介素18的纯化及其生物学活性研究

目的：纯化rhIL-18并对其生物学功能进行初步研究。方法：采用优化的包涵体提取技术和Sephacryl S-200分子筛层析纯化rhIL-18,利用MTT染色法研究rhIL-18对NK细胞促杀伤作用和对外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用,采用半定量RT－PCR方法研究rhIL-18诱导IFN－γ基因的表达情况。结果：得到纯度达96％的纯品rhIL-18,复性的rhIL-8可以明显地促进PBMC增殖,增强NK细胞细胞毒活性。结论：得到纯度较高、具有较好生物学功能的rhIL-18,可用于进一步的研究。     

小鼠白细胞介素-18的cDNA克隆及在真核细胞中初步表达的研究

目的 克隆小鼠白细胞介素－１８（ＩＬ－１８）编码区的ｃＤＮＡ,并实现在真核细胞中的表达。方法 用小鼠白细胞介素 －１８（ｍＩＬ－１８）的ｃＤＮＡ核苷酸序列,设计、合成基因序列特异性引物,应用逆转录多聚酶链反应ＲＴ－ＰＣＲ,以植物血凝（ＰＨＡ）和细胞脂多糖（ＬＰＳ）刺激的小鼠非粘附性脾细胞的ｍＲＮＡ为模板,扩增获得全长ｍＩＬ－１８,转染小鼠成纤维细胞系ＳＶＴ２,并进行ＩＬ－１８生物学活性的检测。结果     

小鼠白细胞介素-12融合蛋白编码基因的构建与表达研究

目的 构建小鼠白细胞介素－１２的融合基因,并进行初号表达,方法 通过重叠序列引物的设计与多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术,将小鼠ＩＬ－１２的４０ｋＰａ多肽链基因与３５ｋＤａ多肽链基因,以甘氨酸接头（Ｇｌｙ４Ｓｃｒ）３序列连接成为晤蛋白编码基因,构建融合蛋白表达载体现,转染小鼠成纤维细胞ＳＶＴ２,表达具有生物学活性的融合蛋白型ＩＬ－１２。结果 构建的小鼠ＩＬ－１２表达载体经测序无突变发生。以Ｇ４１８筛选转     

白细胞介素18及其生物活性

白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是新近发现的一种细胞因子，能诱导ＴＨ１细胞等产生ＩＦＮ－γ，ＧＭ－ＣＳＦ等细胞因子及Ｆａｓ配体，具有增强ＴＨ１细胞和ＮＫ细胞的细胞素作用等免疫调节功能，在抗病原微生物感染，抗肿瘤及抗超敏反应等方面有着潜在的应用前景。同时，它也是内毒素诱导的小鼠肝坏死性休克的关键因子。     

突变型人白细胞介素18 cDNA的克隆

目的:获得人白细胞介素18 cDNA。方法:从1名健康献血者的外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过PT-PCR扩增出人白介素18(hIL-18)的cDNA,与PUCmT载体连接,构成重组质粒,进行测序及同源性分析。结果:已获得hIL-18的编码序列,且与Ushio等报道的序列相比存在3处有意义突变。结论:克隆了突变型hIL-18 cDNA。     

白细胞介素18与肿瘤

白细胞介素18(IL-18)是一种细胞因子，早期称IGIF(IFN-γ inducing factor)。来源于单核细胞及巨噬细胞，具有刺激T细胞增殖，增强Th及NK细胞活性，并具有抗肿瘤、抗感染等多种生物学作用，本文就其生物学活性以及抗肿瘤作用作一综述。     

白细胞介素18研究进展

１９９５年Ｏｋａｍｕｒａ等报道从中毒性休克的小鼠肝脏克隆到了一种由应激诱生的蛋白。该蛋白的生物学活性与白细胞介素１２非常相似，但其诱生干扰素γ的能力要强于白细胞介素１２，因而将其命名为干扰素γ诱生因子（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａｉｎｄｕｃｉｎｇｆ...     

白细胞介素18与肿瘤

白细胞介素 18(IL 18)是一种细胞因子 ,早期称IGIF(IFN γinducingfactor)。来源于单核细胞及巨噬细胞 ,具有刺激T细胞增殖 ,增强Th及NK细胞活性 ,并具有抗肿瘤、抗感染等多种生物学作用 ,本文就其生物学活性以及抗肿瘤作用作一综述。     

大鼠FEZ1基因的克隆及其在中枢神经系统的表达

轴突成束和延伸蛋白ζ-1(fasciculationandelongationproteinzeta-1,FEZ1),是线虫UNC-76蛋白在哺乳动物中的一种同系物,与轴突向外生长、成束、延伸相关。为了克隆该蛋白的基因并观察其在中枢神经系统(CNS)的表达情况,本研究通过FEZ1的特异引物从SD大鼠脑组织中经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得FEZ1基因;通过RT-PCR法分析FEZ1在生后7d的SD大鼠CNS的不同部位(大脑皮层、嗅球、脊髓)的表达情况。成功获得FEZ1的基因克隆,并观察到生后7d的SD大鼠的大脑皮层、嗅球、脊髓内均有FEZ1表达,且脊髓的表达水平较高。本研究结果为进一步研究大鼠FEZ1基因的生物学活性及在神经系统内的表达和应用奠定了基础。     

阴道毛滴虫黏附蛋白ap33基因克隆及其表达

通过提取阴道毛滴虫mRNA ,逆转录合成cDNA ,PCR得到预期长度片段后 ,将其克隆到pUCm-T载体中进行PCR、酶切及测序分析 ,并与GeneBank中核苷酸序列进行同源性分析。再将其克隆至表达载体PET-32a。重组子用酶切、PCR和测序鉴定后 ,转化大肠杆菌并以异丙基 -B- D- 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。从阴道毛滴虫临床分离株中扩增出 92 7bp的ap33的基因片段 ,构建重组质粒PET- 32a (+) - ap33;IPTG诱导后 ,SDS -PAGE显示表达产物的大小约 5 0kDa。     

rHuIL-6和rHuIL-2对人杂交瘤细胞增殖、克隆化以及抗体产生的影响

rHuIL6对人一鼠杂交瘤86—1、87—3和人—(人×鼠)杂交瘤C_的增殖、克隆化和抗体分泌均有明显的促进作用。rHuIL-2能提高C_8杂交瘤的增殖水平。rHuIL-6和rHuIL-6和rHuIL-2同时应用对人—鼠杂交瘤86—1和87—3细胞的克隆化效率和抗体分泌水平有明显的协同作用。     

人PBMC中IL—18基因的克隆及在E.coli中的高效表达与纯化

从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞分别克隆了前体和成熟人白细胞介素－１８的基因,并应用大肠杆菌表达系统,成功地表达了重组ｈＩＬ－１８的前体和成熟蛋白,从人ＰＢＭＣ中提取总ＲＮＡ,用ｐｌｙ（Ｔ）８－１２反转录成ｃＤＮＡ,再以ＰＣＲ扩增出特异ＤＮＡ片段。利用Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体ｐＱＥ－３０,构建分别表达ｈＩＬ－１８前体和成熟蛋白的重组质粒ｐＱＥＩＬ１８ｐ和ｐＱＥＩＬ１８ｍ,转化Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５后,     

鸡柔嫩艾美耳球虫江苏分离株5401基因的克隆、序列分析及原核表达

分别以孢子化卵囊及第2代裂殖子为材料,应用RT-PCR技术克隆了柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）江苏分离株5401基因。测序结果表明该序列全长为864bp,序列本身是一个开放阅读框,将克隆得到的基因与国外报道的5401基因比较,第174位和第287位发生突变,碱基分别由T突变为C,由C突变为T。第1个为无义突变,第2个突变引起第96位氨基酸由A变为V。其核苷酸序列同源性为99.8%,氨基酸同源性为99.7%。将所获5401基因克隆到pGEX-4T-2获得重组质粒pGEX-4T-2-5401,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达。用大鼠抗柔嫩艾美耳球虫子孢子高免血清对原核表达产物进行Western Blotting检测,结果表明有2条融合蛋白,大小分别为90kDa和80kDa左右。     

人源肠毒素大肠杆菌CS3纤毛基因的克隆及表达

Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹结果证明在ＣＦＡ／Ⅱ阳性菌Ｅ４４８１５的诸多质粒中，编码ＣＳ３纤毛抗原的质粒为一约为６０ＭＤ的大质粒；当这些质粒用ＨｉｎｄⅢ消化时，该抗原的编码基因位于５．０ｋｂ的ＤＮＡ片段上。回收该片段并插入到载体质粒ｐＢＲ３２２的ＨｉｎｄⅢ位点，构建了Ｅ．ｃｏｌｉＥ４４８１５株质粒的有限基因库。通过筛选，获得了两种插入方向的阳性重组子。全细胞ＥＬＩＳＡ测定结果表明，只有当插入片段的转录方向和载体质粒中的ｐ１启动子的转录方向一致时，重组质粒才能有效地表达ＣＳ３纤毛抗原；宿主不同时表达水平存在一定差异。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验表明：ＣＳ３纤毛抗原有两种不同的单体形式，分子量大约分别为１５．０ｋＤ和１５．５ｋＤ。ＣＳ３纤毛抗原编码基因的克隆为研究ＣＳ３基因表达调控和研制预防ＥＴＥＣ腹泻疫苗打下了基础。     

恙虫病立克次体sta58主要抗原基因片段的克隆及表达

作者设计合成一对ＤＮＡ引物，经ＰＣＲ扩增出Ｋａｒｐ及ＣＭＹ株恙虫病立克次体ｓｔａ５８主要抗原基因片段，分别建立其无性繁殖系，构建了表达质粒ｐＢＶＲＫ５和ｐＢＶＲＣ４５，在国内首次应用大肠杆菌成功表达了恙虫病立克次体抗原。其意义在于为我国恙虫病立克次体研究提供特异性核酸探针，为恙虫病基因工程诊断试剂的研制奠定物质基础。     

弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究奠定了基础     

B7—1（CD80）基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ中克隆到Ｂ７－１（ＣＤ８０）ｃＤＮＡ，并经测序证实，将其插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ中，用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，Ｇ４１８筛选，并经流式细胞仪检测，得到了细胞表面表达Ｂ７－１的重组克隆。ＰＣＲ从其基因组ＤＮＡ中扩增到Ｂ７－１基因，提示Ｂ７－１ ｃＤＮＡ已整合至宿主细胞的基因组ＤＮＡ中，本文为研究Ｂ７－１在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。     

伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达

根据报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAPp15)基因及其3′非翻译区保守序列设计引物,采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi stock YNB)基因组DNA中克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因。克隆片段长273bp,编码90个氨基酸,预测分子量9.0kDa。经同源性比较,所得基因与Tb-MAP p15基因同源率达到94%。抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei微管结合蛋白p15多5个,均参与组成其中1个抗原决定簇,并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋。将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体,转化大肠杆菌E.coli RS21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白大小为35kDa,与预期大小一致,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫微管结合p15蛋白。