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目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白(MCP)的cDNA,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用RT-PCR 方法,从U937细胞总RNA中扩增编码人MCP分子的cDNA片段,快速克隆于pGEM-T Easy载体,测定共序列。将该片段重组于pLXSN载体,电穿孔转染NIH3T3细胞,经FACS检测筛选表达MCP的阳性细胞克隆,用补体容破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 RT-PCR 相似文献
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人胰岛素样生长因子1的真核细胞表达及其鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)的真核细胞表达质粒。方法 用PCR方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出IGF-1cDNA,然后定向插入真核细胞表达载体pcDNA3中,并用脂质体方法转染COS7细胞。用ELISA法和人胚肺纤维母细胞以及NIH3T3纤维细胞增殖法分别测定转染细胞上清液中IGF-1的含量和生物活性。结果 重组的真核细胞表达质粒pcDNA3-IGF-1所含的IGF-1cDNA序列和插入方向均正确,其转染的COS7细胞分泌较高浓度的IGF-1,并且具有明显促进纤维细胞增殖的能力。结论 本实验所构建的重组真核细胞表达质粒pcDNA3-IGF-1能够高效表达有活性的IGF-1,对进一步研究IGF-1体内表达的生理和病理作用有一定意义。 相似文献
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自人肺成纤维细胞以逆转录-DNA聚合酶链式反应(RT-PCR)钓取了人成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)细胞外段(含第2和第3免疫球蛋白结构域)cDNA。将此片段标记成非同位素探针,用其与SalⅠ消化的小鼠心脏等组织的基因组DNA进行了Southern印迹杂交。结果表明:与其它组织相比,成年小鼠心脏组织显示FGFR1基因Southern印迹的带型发生了变化。经过分析,提出了产生这种变化的3种模式。 相似文献
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含信号肽序列的hG-CSFcDNA基因克隆于M13mp18中,测序表明其基因序列与高活性hG-CSFcDNA一致。将hG-CSF基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBE284,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后,通过体内同源重组的方式构建了重组病毒BmNPV-G-CSF,Southern印迹杂交表明重组病毒DNA中含G-CSF基因片段。重组病毒感染单层BmN细胞后第四天表达量达1. 2×106CFU/ml培养液,Western-blot分析可见分子量为19×103左右一条带。家蚕幼虫感染重组病毒后第四天表达量达1.4×107CFU/ml血淋巴(hemolymph)。 相似文献
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目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白( MCP) 的cDNA,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用RTPCR 方法,从U937 细胞总RNA 中扩增编码人MCP 分子的cDNA片段, 快速克隆于pGEMTEasy 载体,测定其序列。将该片段重组于pLXSN 载体,电穿孔转染NIH3T3 细胞,经FACS 检测筛选表达MCP 的阳性细胞克隆,用补体溶破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 RTPCR 扩增得到1 144bp 的编码人MCP 分子的cDNA 片段,序列分析表明该cDNA编码的蛋白为STC+ CYT2 亚型。细胞转染筛选获得多个表达MCP 的NIH3T3 阳性细胞克隆,补体溶破试验证实其具有抑制人补体经典途径和旁路途径溶破的功能。结论 本研究为进一步探讨不同亚型结构的MCP 分子与功能的关系及其应用奠定了基础。 相似文献
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人细胞色素p450IA1基因cDNA的克隆和鉴定 总被引:5,自引:1,他引:4
在用3-甲基胆蒽诱导培养人羊膜FL细胞24h后,抽提细胞总RNA并直接合成cDNA第一链。利用人工合成的一对寡核苷酸引物,采用PCR技术特异性地扩增Cyt p50IA1 cDNA。30个循环后琼脂糖凝胶电泳显示1.5Kb大小片段,长度与预计相符。Southern杂交结果证实此片段确为Cyt p450IA1 cDNA。将此片段克隆至质粒pGEM-3Z并进行部份序列分析。结果显示克隆片段包含Cyt p 相似文献
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自人肺成纤维细胞以逆转录-DNA聚合酶链式反应(RT-PCR)钓取了人成纤维细胞生称因子受体1(FGFR1)细胞外段(含第2和第3免疫球蛋白结构域)cDNA。将此片段标记非同位素探针,用其与Sal1消化的小鼠心脏等组织的基因组DNA进行了Southern印迹技术,结果表明:与其它组织相比,成年小鼠心脏组织显示FGFR1基因Southern印迹的带型发生了变化,经过分析,提出了产生这种变化的3种模式 相似文献