HSP70/HSP90在鼻咽癌热疗后的表达变化及对热疗疗效影响的体外研究

目的 探讨体外鼻咽癌细胞系HNE1细胞热疗后热休克蛋白70/90(HSP70/HSP90)的表达变化及抑制HSP70/ HSP90表达对鼻咽癌热疗的影响,并初步探讨其机制.方法 对体外培养的鼻咽癌细胞HNE1,恒温水浴42 ℃热处理2 h,分别于2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h后荧光定量PCR检测HSP70/HSP90的基因表达变化,采用Western blot检测蛋白表达量的变化.流式细胞术检测细胞的凋亡,观察在热疗前应用槲皮素、格尔德霉素及联合应用对HSP70/HSP90表达抑制后,对HNE1细胞凋亡的影响.结果 42 ℃热疗后鼻咽癌细胞HSP70/HSP90表达在基因及蛋白水平上均有明显升高,4 h达到高峰,8 h后开始回落,24 h接近正常.槲皮素能抑制HSP70表达,但导致HSP90表达水平升高及下降延迟.热疗前使用槲皮素及格尔德霉素处理,凋亡细胞比例明显增加,联合处理组增加更为明显(P＜0.05).结论 HSP70/ HSP90在HNE1细胞内的表达均在热疗后迅速升高,在热疗前联合抑制HSP70/HSP90的活性,可以更有效增加热疗敏感性.     

不同条件对大鼠脑胶质瘤C6细胞HSP70表达的诱导

目的　探索和建立 SD大鼠胶质瘤细胞 (C6 ) HSP70蛋白表达最佳诱导条件。　方法　用 MTT法观察不同热休克条件和 /或药物诱导下 C6细胞生存率 ;用 FCM法检测 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达。　结果　 (1) C6细胞在 4 2 ,4 3℃热休克 0～ 12 h的过程中 ,其生存率无明显影响。各种实验用药物 ,只要加上热休克 4 3℃ 2 h,对C6细胞的生存率的影响较单种药物同浓度要明显。 (2 ) C6细胞经 4 3℃热休克 1,2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 ,16 ,2 0 ,2 4 h后 ,其胞膜 HSP70蛋白表达率均较对照组 (平均 4 .72 % )显著增高 (P<0 .0 5 ) ,其中 12 h表达率 (89.15 % )为最高 ,榄香烯 +热休克组又较其他各组高。　结论　一定条件下的热休克及某些药物可诱导 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达 ,其中单因素以 4 3℃热休克 12 h表达率为最高 ,多因素以榄香烯 +43℃热休克 2 h表达率为最高     

热应激对A549细胞HSP70、XPA修复酶表达的影响

目的研究热应激作用下A549细胞热休克蛋白70（HSP70）和XPA修复酶的表达规律及其可能的意义。方法利用免疫印迹方法（Western blot）检测A549细胞中HSP70、XPA修复酶的表达水平。结果A549细胞接受不同温度（39、41、42、43℃）处理2h后,HSP70表达水平随温度的增高而逐渐增加,并在42℃应激时表达最高,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）;细胞接受42℃应激1～4h,HSP70表达水平随应激时间的增加而递增,与对照组相比,细胞在42℃应激2～4h时HSP70表达显著上调（P〈0.05）。两处理组细胞XPA修复酶表达水平均无明显变化（P〉0.05）。结论高温能诱导HSP70的表达,并呈一定的温度-效应和时间-效应关系,而对XPA修复酶未见明显影响。     

人良性脑膜瘤细胞热敏感性的实验研究

目的 探讨人良性脑膜瘤细胞的热敏感性及其机制.方法 15例人脑膜瘤原代培养细胞进行温水加热体外实验.采用Western blot法检测HSFl蛋白表达;免疫组织化学法检测HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达;MTT法检测细胞增殖抑制率、TUNNEL法检测细胞凋亡率.结果 15例人良性脑膜瘤在44℃温水加热60 min后细胞增殖抑制卒仅为(8.33±0.18)%,凋亡率(%)为(2.4±0.16)%.温水加热后,人脑膜瘤增殖能力没有受到抑制,没有诱导细胞凋亡或细胞坏死(P＞0.05).在热刺激下,HSFI蛋白发生活化,由单体(80kD)转化为三聚体(260kD).加热后6h出现HSP27、HSP70与HSP90表达明显增加,持续24h高表达,显著高于加热前对照组(P＜0.05).结论 人脑膜瘤热敏感性低,单纯温水加热(42～44℃)无抑制细胞增殖和增加细胞凋亡的作用.其机制可能是在加热刺激下,人脑膜瘤细胞HSF1蛋白发生三聚体活化,诱导型HSP27、HSP70和HSP90在加热后24 h内持续高表达.保护和修复了热损伤的人脑膜瘤细胞.     

热疗作用于肝癌细胞株SMMC-7721后几种凋亡相关基因的表达

目的　探讨热疗前后人肝癌SMMC -772 1细胞几种凋亡相关基因的表达情况 ,解释热疗促进肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法　采用免疫组化S- P法检测热疗前后肝癌细胞中P5 3、HSP 70、c Myc蛋白的表达情况。结果　各个热处理组与对照相比 ,HSP-70、P5 3、c Myc蛋白的表达均增高 ,有统计学差异 (P <0 .0 1 ) ;42℃加热 1h和2h与加热 3 0min比较HSP 70蛋白的表达增多 ,有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;而P5 3和c Myc蛋白在各个热处理组间表达没有差异。结论　加热可以诱导HSP70蛋白的大量产生 ,可以激活P5 3基因诱导肝癌细胞凋亡 ,上调c- Myc基因 ,通过调节细胞凋亡来提高细胞的热敏感性。     

温热对BGC—823细胞抑制作用及Hsp70、Bcl—2、Bax表达的影响

目的 观测温热对人胃癌细胞BGC－823的抑制作用及Hsp70、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 通过MTT法，测定41℃100min、42℃100min对BGC－823细胞的抑制作用；运用免疫组化ABC法染色，观察42℃100min作用后0、8、16、32h，BGC－823细胞Hsp70、Bcl-2、Bax的表达。结果（1）BGC－823细胞在41℃及42℃温热作用后，均受到一定抑制；42℃温热比41℃对细胞的抑制作用较强且持久（P＜0．01）；（2）42℃温热作用后细胞Hsp70、Bcl－2表达均明显增加，16h表达达到高峰，且主要分布于核区；Bax表达也增加，但低于Bcl－2。结论 温热对BGC－823细胞有一定抑制作用，Hsp70、Bcl-2表达增加可能与细胞自身修复或自身保护有关，Bcl-2的胞核分布与温热对细胞的抑制有关。     

精氨酸对热暴露小鼠肝脏HSP70表达的免疫组化研究

用免疫组织化学方法研究了热习服小鼠42℃热暴露50min恢复期0－24h肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的动态变化及L－精氨酸干预的热处理小鼠42℃热暴露50min后恢复期8h肝脏HSP70的表达。结果：（1）HSP70主要定位于肝脏胞质，细胞核中较少；（2）HSP70在热应激后8－12h达高峰；（3）精氨酸对热处理小鼠肝脏HSP70的表达有增强作用。     

热处理对HeLa细胞增殖、凋亡及HSP70表达的影响

目的:通过不同温度对HeLa细胞的处理,观察细胞的存活率,细胞凋亡以及HSP70蛋白表达的变化。方法:对HeLa细胞进行培养及不同温度的热处理,采用MTT法测定HeLa细胞的存活,通过免疫组化方法检测HeLa细胞HSP70蛋白表达的变化以及DNA ladder观察HeLa细胞的凋亡变化。结果:45℃高温处理组细胞增殖的抑制最强,HSP70蛋白表达量最高,细胞凋亡程度最高,41℃次之,37℃最低。结论:高温可以增强热休克蛋白HSP70的表达,进而促进细胞的存活,抑制细胞凋亡。     

纳米载体介导热诱导启动子调控内皮抑素基因治疗肝细胞癌

目的 探讨加热诱导调控下纳米载体介导内皮抑素(Endo)基因治疗对肝癌细胞HepG2的体内外杀伤作用.方法 双酶切法构建热诱导启动子(HSPTOB)调控Endo基因的重组质粒cDNA3.1(+)/HSP70-Endo/EGFP.溶剂挥发法制备载DNA的葡聚糖接枝聚乳酸纳米粒,透射电镜观察载DNA纳米粒的形态,并介导转染HepG2细胞,转染24 h后予以37 ℃、39℃、41℃、43℃、45℃加热诱导30 min,荧光显微镜和流式细胞术检测不同温度下EGFP表达,ELISA检测转染细胞上清Endo蛋白浓度,MTT法检测热诱导后Endo对HepG2和ECV304细胞牛长的影响,动物实验观察热诱导后Endo对肝癌移植瘤的抑制作用.结果 载DNA纳米粒呈圆形或椭圆形,粒径约90～120 nm.转染效率约30.65%.低温加热可增强HepG2细胞中Endo/EGFP表达,43℃组EGFP表达强度达37℃组的3.3倍.43℃热诱导后转染细胞上清中Endo浓度为(177±28)μg/L,高于不加热组(41 ±10)μg/L.Endo抑制ECV304的生长,72 h时热诱导后细胞抑制率为96.3%,对HepG2细胞的生长却无影响.体内实验显示热诱导后Endo显著抑制肝癌移植瘤的生长,肿瘤抑制率为58.5%,高于不加热组(34.9%).结论 纳米载体可介导Endo基因转染HepG2细胞,低温加热可增强HepG2细胞内Endo基因的表达和分泌,抑制肝痛移植瘤的生长.     

氧化应激对热休克蛋白70核仁分布的影响

目的：探讨氧化应激对热休克蛋白70（heat shock protein 70, HSP70）核仁分布的影响。方法：采用热休克反应（42℃ 1h，37℃恢复12h）诱导C2C12细胞中HSP70的高表达；构建HSP70与增强绿色荧光蛋白（EGFP）的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞后，用免疫印迹技术分别检测热休克反应及基因转染诱导的HSP70表达；在分离纯化核仁和胞质蛋白组分后，分别采用免疫细胞化学、荧光技术及免疫印迹检测氧化应激（0.5mmol/L H2O2）诱导的HSP70的分布改变。结果：免疫印迹显示，热休克反应和瞬时转染重组质粒，均能导致C2C12细胞中HSP70的高表达；荧光示踪显示，过氧化氢处理1h后，可见胞核有较强的荧光；免疫细胞化学及细胞组分蛋白质免疫印迹显示，热休克处理的细胞暴露于过氧化氢1h后，HSP70从细胞质向细胞核及核仁移位。结论： 氧化应激能导致HSP70从胞质向核仁移位。