寡核苷酸促人牙周膜细胞成骨向分化机制的实验研究

目的研究寡核苷酸(ODN)mt01对人牙周膜细胞向成骨细胞分化的影响,为临床药剂的开发奠定实验基础。方法采用人离体牙牙周膜细胞作为研究对象,原代培养牙周膜细胞并传代,取第三代人牙周膜细胞,加入工作浓度为1.0 mg/L的ODN mt01共培养24 h、48 h、72 h和96 h后,通过实时聚合酶链反应(real time PCR)法研究ODN mt01对人牙周膜细胞成骨分化的影响。结果分别作用于人牙周膜细胞24 h、48 h、72 h和96 h后,与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组相比,工作浓度为1.0 mg/L的ODN mt01可显著上调人牙周膜细胞中Runx-2、Sp7和Ⅱ型胶原等成骨相关因子m RNA的表达水平(P<0.05)。结论适当工作浓度的ODN mt01可能通过增加成骨相关因子的基因表达水平进而促进人牙周膜细胞的成骨向分化。     

外源性雌激素对人牙周膜干细胞骨分化能力影响的实验研究

目的：检测外源性雌激素对人牙周膜干细胞( PDLSCs )骨分化能力的影响。方法将体外培养的PDLSCs加入无酚红成骨诱导培养液和不同浓度的17β-E2[分为E10-7、E10-8、E10-9组和对照组(成骨诱导培养液+无水乙醇(0.01%)]-雌二醇[分为E10-7、E10-8、E10-9组、ICI组(成骨诱导培养液+ICI182780)、E10-7+ICI组(成骨诱导培养液+1×10-717β-E2+1×10-7ICI182780)],观察各组细胞形态、测定其增值水平、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原合成能力。结果添加外源性雌激素后,细胞增殖加快,生长密集,呈螺旋状排列。 PDLSCs的增殖发生变化,与对照组相比,第3、5天雌激素干扰组细胞增殖受到抑制( P <0.05),此后雌激素干扰组细胞增殖高于对照组( P <0.05),在不同药物浓度组间,E10-7组对细胞增殖影响最为明显,其细胞增殖水平高于E10-8、E10-9组( P <0.05)。 ALP表达显示动态变化,自第3天开始,各组ALP表达均升高,而雌激素干扰组ALP表达量高于对照组( P <0.05),在不同药物浓度组间E10-7组ALP表达增加高于E10-8、E10-9组( P <0.05),与ICI组、E10-7+ICI组比较,差异无统计学意义( P >0.05);PDLSCsⅠ型胶原合成表达与对照组相比有增加趋势,且与药物浓度有剂量依赖关系。结论雌激素对PDLSCs成骨分化过程有促进作用,该作用与雌激素浓度密切相关。     

毛蕊花糖苷对新生大鼠体外培养成骨细胞增殖与分化作用研究

目的研究毛蕊花糖苷对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖、分化作用的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法分离制备新生大鼠颅骨ROB细胞,MTT法测定ROB细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定ROB细胞内ALP活性,以细胞的增殖率和ALP活性作为考察指标,观察不同浓度的毛蕊花糖苷对ROB细胞增殖和分化作用的影响。结果 1×10-7～1×10-9mol·L-1的毛蕊花糖苷对ROB细胞的增殖具有显著的促进作用(P<0.05),且终浓度为1×10-7mol·L-1的毛蕊花糖苷在作用72h后能显著提高ROB细胞内碱性磷酸酶的活性(P<0.05)。结论一定浓度的毛蕊花糖苷能显著的促进ROB细胞的增殖和分化。     

巴戟天多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

目的通过观察巴戟天多糖对骨髓间充质干细胞骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和骨向分化的影响。方法利用髓贴壁法分离培养BMSCs,并通过形态学、流式细胞仪检测细胞表面标志物以鉴定所取得的细胞;采用细胞计数(CCK-8)法检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐法(p NPP)检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,以确定其最佳促分化的剂量。后续实验分空白组、巴戟天多糖组、成骨诱导组,在培养第7,14,21天分别收集各组细胞上清液,检测其ALP活性;培养第21天采用茜素红染色法检测各组BMSCs矿化情况。结果随着培养时间的延长,巴戟天多糖高、中浓度组可显著提高BMSCs的增殖(P0.05),其中高浓度组效果最佳。与空白组相比,巴戟天多糖组可提高BMSCs上清液中ALP活性(P0.05),增加其矿化结节数(P0.05)。结论巴戟天多糖能促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的能力。     

釉基质蛋白衍生物对人牙周膜干细胞分化、增殖的影响观察

目的分析研究釉基质蛋白衍生物对人牙周膜干细胞分化及其增殖的影响。方法3例健康的因正畸原因拔除前磨牙及2例埋伏第三恒牙患者,对人牙周膜干细胞进行分离培养,检验分析表面抗原表达及其克隆形成率,对其多向分化潜能进行鉴定,分析在牙周膜干细胞上进行不同质量浓度的釉基质衍生物培养2周和4周,依据Von Kosa’s和Trichrome染色法对牙周膜干细胞矿化结节形成和胶原合成情况进行分析,依据Real time逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法对成骨分化相关基因Ⅰ型胶原、RUX2及其骨钙素表达情况进行检测,分析在牙周膜干细胞增殖情况检测中3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法与生长率法的作用。结果相比牙周膜细胞克隆形成率0.42%、STRO-1-细胞克隆形成率0.21%,STRO-1+细胞(牙周膜干细胞)克隆形成率1.42%更高。表面抗原CD105表达率99.8%、CD29表达率99.7%、CD45表达率1.26%、CD44表达率98.8%。结论釉基质衍生物在试验中显示为一定时间剂量效应关系,利于牙周膜干细胞胶原合成,形成矿化结节,促使有效表达骨分化相关基因Ⅰ型胶原、RUX2及其骨钙素,对于牙周膜干细胞增殖十分有利,具有再生和修复牙周组织的临床作用。     

甲壳胺对人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的探讨甲壳胺对人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响。方法用原代培养的人牙周膜细胞,采用MTT法、酶动力学法和放射免疫法检测不同浓度甲壳胺(Chitosan,Chi,0.05,0.1,0.2g·L-1)对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。结果与对照组比较,(1)Chi(0.05g·L-1)和Chi(0.1g·L-1)2组在3,5,7d时A570值均明显升高(P<0.05),Chi(0.2g·L-1)组仅在3d时明显升高(P<0.01);(2)不论是细胞裂解液还是细胞培养液中,甲壳胺均能明显增强牙周膜细胞碱性磷酸酶活性(P<0.05);(3)不同浓度的甲壳胺刺激牙周膜细胞骨钙素分泌量均较对照组高,但只有Chi(0.1g·L-1)组比较有显著性差异(P<0.05)。结论甲壳胺对人牙周膜细胞的增殖和分化功能有明显的促进作用。     

异槲皮苷对MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响作用

目的研究异槲皮苷对体外培养MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响作用。方法以细胞矿化结节染色鉴定MC3T3-E1成骨细胞株骨矿化功能,以MTT法测定成骨细胞的增殖率,以试剂盒法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果在终浓度为1.08×10-6mol·L-1、1.08×10-7mol·L-1、1.08×10-8mol·L-1时,异槲皮苷能极显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖(P<0.01);终浓度为1.08×10-6mol·L-1时,异槲皮苷作用96h后能极显著提高细胞内ALP的活性(P<0.01)。结论一定浓度的异槲皮苷能够显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化。     

低温冻存对人牙周膜干细胞生物学特性的影响

目的观察超低温冻存对人牙周膜干细胞(PDLSCs)生物学特性的影响。方法体外分离、培养人牙周膜细胞,待细胞达一定量后用有限元稀释法筛选PDLSCs。将第3代人PDLSCs经液氮冻存半年后复苏,测其存活率,检测细胞免疫表型,对PDLSCs进行成骨诱导,测定其碱性磷酸酶(ALP)活性及体外矿化能力,观察超低温冻存对PDLSCs生物学特性的影响。结果第3代人PDLSCs冻存、复苏前后两组细胞在细胞形态、生长过程、免疫表型、成骨分化能力等方面均无显著性差异(P>0.05)。结论超低温冻存对人PDLSCs活性、增殖、细胞免疫表型及成骨分化能力没有明显影响。     

胰高血糖素样肽-1及其类似物EX-4促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂exendin-4(EX-4)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法:取大鼠股骨和胫骨全骨髓,采用贴壁法分离BMSCs并传代至第三代,培养2d后分成4组:BMSC组、诱导成骨组(osteoblast induced medium,OIM组)和诱导加药组,诱导加药组细分为GLP-1(10-9~10-7 mol/L)或EX-4(10-9~10-7 mol/L)的不同浓度组,MTT法检测细胞增殖能力;测定碱性磷酸酶(ALP)活性;通过ALP染色及茜素红染色观察药物诱导BMSCs向成骨细胞分化、矿化的效果;采用RT-PCR方法检测ALP和Runx2成骨相关基因的表达情况。结果:与诱导对照组相比,GLP-1及EX-4各浓度处理组呈剂量依赖性显著促进细胞增殖(P<0.05);ALP染色与茜素红染色结果显示,对照组无显色或显色不明显,而GLP-1及EX-4组均有阳性显色。GLP-1及EX-4可以显著提高ALP活性,并提高Runx2、ALP的表达水平。结论:GLP-1及EX-4不仅能够直接促进BMSCs增殖,并促进其向成骨细胞分化,GLP-1及EX-4可能在骨重建中发挥重要的作用。