SUMF2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)基因过表达慢病毒载体,以便进一步研究SUMF2功能。方法 针对人SUMF2 DNA序列设计带酶切位点的引物,PCR法获得目的基因片段;用AgeⅠ和NheⅠ酶双酶切SUMF2基因片段及PLJM1-EGFP载体。用T4连接酶对两种酶切产物进行连接、PCR鉴定、测序。将阳性克隆质粒与包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293T细胞,并荧光显微镜观察EGFP的表达。结果 PCR和测序证实成功构建了SUMF2的慢病毒表达载体,病毒效价为1×10⁸ TU/ml。结论 成功构建SUMF2-PLJM1-EGFP慢病毒载体,并在293T细胞中得到表达。     

Sumf2与Sumf1可能存在代偿性的相互作用以维持硫酸酯酶的活性不变

目的 通过Sumf2（硫酸酯酶修饰因子2）基因剔除小鼠来研究Sumf2在分子水平、细胞水平及组织器官水平的生物学功能及其与硫酸酯酶活性的关系.方法 用免疫荧光共定位的方法观察小鼠Sumf2的细胞定位情况;用组织或细胞蛋白与4种硫酸酯酶特异的底物反应,通过检测产物的生成量来计算硫酸酯酶的活性;用MTT的方法检测小鼠胚胎成纤维细胞的增殖能力;通过Alcian blue染色观察硫酸酯酶的底物葡糖氨基聚糖是否堆积在组织中,用qPCR的方法检测Sumfl的表达情况.结果 激光共聚焦显微镜结果证实小鼠Sumf2定位于内质网上;检测四种芳香族硫酸酯酶的酶活性和小鼠胚胎成纤维细胞的增殖能力,测定结果显示：基因缺失小鼠的检测结果都略低于野生型小鼠,但并未达到显著性水平;组织病理及葡糖氨基聚糖类染色并未发现基因剔除小鼠与野生型小鼠有明显差异;qPCR的结果显示Sum f2基因敲除小鼠中Sumfl的表达量明显下调.结论 Sumf2定位于内质网上,体内缺失Sumf2后代偿性地下调Sumfl的表达从而使得硫酸酯酶活性维持不变.     

人硫酸酯酶1对生长因子介导的胰腺癌细胞生长的作用

目的:探讨人硫酸酯酶1对生长因子诱导下胰腺癌细胞生长作用的影响及其机制.方法:应用lipofectamine方法转染人硫酸酯酶1基因到低表达该基因的胰腺癌细胞Panc-1,通过Northern bloting筛选阳性转染的细胞克隆,并检测转染后胰腺癌细胞硫酸酯酶1的水平;应用噻唑氮蓝比色分析(MTT)法检测转染后胰腺癌细胞对生长因子作用的影响;应用Western bloting检测人硫酸酯酶1转染对生长因子受体与MAPK磷酸化水平的影响.结果:硫酸酯酶1稳定转染入Panc-1细胞后,Panc-1细胞稳定表达硫酸酯酶1 mRNA,并且硫酸酯酶1表达水平升高.FGF-2、HB-EGF、EGF均促进胰腺癌细胞Panc-1的生长,硫酸酯酶1基因转染后减弱FGF-2对细胞的生长促进作用,降低FGF-2所诱导的MAPK磷酸化水平,但对HB-EGF、EGF的作用无明显影响.结论:人硫酸酯酶1 转染减弱生长因子FGF-2所诱导的胰腺癌细胞的生长促进作用;人硫酸酯酶1可能参与胰腺癌的病理发生发展过程.     

hERR1对乳腺癌细胞生长活性及ER转录激活功能的影响

目的 构建hERR1高表达的乳腺癌细胞株，研究hERR1对乳腺癌细胞株生长活性的影响及其机制。方法 PCR构建hERR1真核表达载体，转染乳腺癌细胞株，G418筛选稳定表达细胞株；MTT法研究hERR1高表达株的生长速率；瞬时转染结合CAT活性分析，研究hERR1对ER转录功能的影响。结果 筛选了hERR1高表达乳腺癌细胞株；局部高表达的hERR1在体外抑制乳腺癌细胞株的生长；hERR1以剂量依赖方式抑制ER转录激活功能。结论 局部高表达hERR1可能通过与ER竞争结合ERE，抑制ER的转录活化功能，从而抑制ER阳性乳腺癌细胞株的生长。     

BaP通过AhR和Nrf2信号通路对HepG2细胞中GSTP1的影响

摘要：目的：探究苯并芘（benzo[a]pyrene,BaP）通过芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AhR）和核因子E2相关因子（subcellular localization of nuclear factor?E2-related factor 2,Nrf2）信号通路对HepG2细胞中谷胱甘肽-S-转移酶P1（glutathione S-transferase P1,GSTP1）的影响。方法：将体外培养HepG2细胞分为Control组、BaP（10μmol/L）组、BaP（10μmol/L）+AhR抑制剂（1μmol/L）组和BaP（10μmol/L）+Nrf2抑制剂（1μmol/L）组,BaP组给予10μmol/LBaP培养24小时,抑制剂组给予1μmol/L抑制剂半小时后,加入10μmol/L BaP培养24小时,Western Blot和qPCR实验方法检测各组AhR、Nrf2、细胞色素P450s（cytochrome P450s,CYPs）、血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）及GSTP1基因和蛋白的表达。结果：与Control组相比,BaP组中AhR、Nrf2、GSTP1、CYP1A1及HO-1的mRNA和蛋白表达均升高（P<0.05）;与BaP组相比,BaP+AhR抑制剂组中AhR、GSTP1和CYP1A1的mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,BaP+Nrf2抑制剂组中Nrf2、GSTP1和HO-1的表达均降低（P<0.05）;与BaP+AhR抑制剂组相比,BaP+Nrf2抑制剂组GSTP1 mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）。结论：BaP通过AhR和Nrf2两条信号通路增加GSTP1的表达,以Nrf2信号通路为主导影响GSTP1的表达。     

绿脓杆菌芳香硫酸酯酶序列与活性关系的初步表征

目的：通过定点突变初步表征绿脓杆菌芳香硫酸酯酶（Pseudomonas Aeruginosa arylsulfatase,PAAS）序列-活性关系,识别通过迭代饱和突变提高突变体比活性的合适位点。方法：分析PAAS活性中心三维构象初步识别催化相关位点;定点突变获得突变体,重组表达后Ni2+-NTA亲和纯化,表征其酶学性质。结果：与野生型相比,R55、M72、G138、D317、K375等位点用常见氨基酸替换/突变都显著降低其催化活性;R55、D317和K375等突变显著降低底物选择性和/或热稳定性,而M72和G138突变主要改变其催化活性。结论：M72和G138适合作为通过迭代饱和突变实施定向进化的候选位点。     

SOCS对Th1/Th2平衡的调控及妊娠影响的研究概况

细胞因子信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling ,SOCS)是近年来新发现的一类负向调节蛋白,可抑制多种细胞因子的信号通路,且大多数成员可被细胞因子和生长因子所诱导产生.     

N-乙酰半胱氨酸对术后认知功能障碍模型小鼠认知功能及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对术后认知功能障碍(POCD)模型小鼠认知功能和海马核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法 采用随机区组设计,利用随机数字表法将雄性3~4月龄C57BL/6J小鼠54只随机分为3组(n=18),分别为对照组、手术组、手术+NAC组。在异氟醚吸入麻醉下,手术组和手术+NAC组小鼠行左下肢胫骨骨折内固定术。手术+NAC组分别于麻醉前30 min、术后3 h和6 h腹腔内注射NAC 150 mg/kg,对照组和手术组腹腔注射生理盐水。术后第3天利用随机数字表法每组随机取6只小鼠,行Morris水迷宫测试小鼠空间认知和记忆功能,术后第7天完成测试。术后第1、3天取小鼠海马组织,酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织中白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)浓度,Western blot及实时荧光定量PCR检测小鼠海马组织中Nrf2和HO-1的蛋白与mRNA表达。结果 3组小鼠的游泳速度差异均无统计学意义(F=2.135,P=0.114);与对照组和手术+NAC组小鼠相比,手术组小鼠的逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01),目标象限停留时间减少(P<0.01)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组术后1 d海马组织IL-6和MDA含量均明显增高(P均=0.000),术后第3天手术组仍高于对照组(P=0.000),手术+NAC组IL-6(P=0.251)和MDA(P=0.103)含量降至对照组水平;与手术组相比,手术+NAC组术后第1、3天海马组织IL-6和MDA含量均明显降低(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均增高(P均=0.000);与手术组相比,手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均明显增高(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组Nrf2和HO-1 mRNA表达在术后第1天均明显增加(P均=0.000),手术+NAC组明显高于手术组(P=0.000)。术后第3天,Nrf2和HO-1的 mRNA表达进一步增强。结论 NAC预处理后的POCD小鼠降低海马组织氧化应激和炎性反应,改善认知功能,此作用与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

氧化型低密度脂蛋白对巨噬细胞ABCA1表达及功能的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)对巨噬细胞内ABCA1表达及功能的影响。方法分别以100μg/ml乙酰化低密度脂蛋白(acLDL)和oxLDL温育RAW264.7细胞24 h,应用胆固醇外排实验、半定量RT-PCR、Western blot检测oxLDL及acLDL对小鼠巨噬细胞内ABCA1功能、mRNA及蛋白质表达的影响。结果加入载脂蛋白apoA-I 24 h后,acLDL负荷的胆固醇约(37.65±2.29)%被排出细胞,而oxLDL组仅排出(9.78±2.16)%,差异有显著性意义(P<0.05);oxLDL及acLDL均可使ABCA1 mRNA水平升高3倍左右,并分别使其蛋白质表达水平提高(1.57±0.18)倍和(1.26±0.09)倍,两组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论oxLDL胆固醇负荷对ABCA1表达及功能的影响不一致,推测还存在其他调控ABCA1功能的机制使oxLDL负荷的胆固醇外排障碍。     

piRNA与PIWI蛋白家族功能的研究进展

生物体中的RNA可以分为编码RNA和非编码RNA两大类,非编码RNA中存在许多小分子RNA,它们组成了细胞中的RNA调控网络。近年来在哺乳动物的睾丸内发现了一种新型的非编码小分子RNA-piRNA,这种小分子RNA与Argonaute家族中的PIWI蛋白成员相结合才能发挥调控作用。两者共同参与基因表达和调控、蛋白质翻译、配子发生等生物学过程,对生物的生长发育产生了深远的影响。该文对piRNA和PIWI蛋白的结构、特性以及相互作用进行综述。     

黄芪多糖对免疫作用的研究进展

黄芪为豆科多年生草本植物,药用部位为根,是一种常用的扶正中药。黄芪中的化学成分富含多糖、皂苷、氨基酸等。多糖是一类生物高分子,随着分子生物学的发展,糖类及其结合物分子具有极其重要的生物功能已逐渐被人们所认识,黄芪多糖(APS)具有免疫促进功能的研究时有报道。现就APS对免疫器官、免疫细胞及免疫分子的作用予以综述。     

Pif1解旋酶家族功能的研究进展

解旋酶是一种所有生物体都广泛存在的酶,对于几乎所有的核酸代谢都是必需的。Pif1解旋酶家族存在于所有的真核生物,是5'-3'方向依赖ATP的解旋酶。Pif1解旋酶影响端粒、核糖体和线粒体的DNA复制以及冈崎片段的成熟,其影响机制很多是利用其解螺旋活性破坏核蛋白复合体的稳定性。不同的生物Pif1解旋酶功能不同,但其对细胞核和线粒体基因组稳定性的维持是非常重要的。目前已知,酿酒酵母(ScPif1和ScRrm3)、裂殖酵母(SpPfh1)、布氏锥虫(TbPIF1、2、5、8)、小鼠(mPif1)和人类(hPif1)均属于Pifl解旋酶家族,现对上述Pifl解旋酶进行综述。     

麻醉药对小儿术后认知功能影响的研究进展

术后认知功能障碍是目前学者比较关注的一种手术后并发症,其中麻醉药可能是其诱因之一。小儿处于大脑的快速发育期,同时也是易损期,如有损伤大脑的因素存在,极易造成严重的认知功能障碍,并影响其学习、记忆等认知功能。麻醉药对小儿认知功能的影响及其机制是目前研究的热点。患儿年龄、麻醉持续时间、麻醉药剂量等均是影响患儿麻醉后认知功能的主要因素,但不同静脉或吸入麻醉药抑制神经功能的作用各异。     

SGK1功能的研究进展及临床意义

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶(SGKs)是一种AGC家族的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,其包括位于不同染色体的三个基因编码的蛋白激酶(SGK1、SGK2、SGK3)。SGKs主要由磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)激活,通过磷酸化下游的靶蛋白调控细胞的生长、神经元兴奋性、肾钠排泄等。SGK1作为PI3K通路主要的调节靶点,不仅参与离子转运、T细胞活化、炎症抑制、脂肪细胞分化,还在心肌细胞纤维化、血管钙化、炎症性肠病、自噬抑制、结直肠癌及多形胶质母细胞瘤等多种临床生理和病理过程中起重要作用。     

胰高血糖素样肽1对糖尿病性骨质疏松作用的研究进展

糖尿病与骨代谢疾病密切相关,糖尿病患者易发生骨质疏松,糖尿病性骨质疏松(DOP)发病率高、易致骨折,严重威胁老年人的健康。胰高血糖素样肽1(GLP-1)是一种主要由肠道L细胞分泌的肠促胰素,具有葡萄糖浓度依赖性降糖作用,其受体激动剂已用于糖尿病治疗。近年来研究发现,GLP-1不仅在调节体内葡萄糖稳态中起重要作用,还对DOP有间接或直接的改善作用,这将为临床治疗DOP提供新的途径和方法。     

放射治疗对T细胞亚群和淋巴细胞增殖功能影响的研究进展

恶性肿瘤患者机体免疫功能有不同程度的降低,抗肿瘤免疫反应主要是细胞免疫,其中T细胞起主导作用。放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一,但目前有关肿瘤放射治疗与T细胞亚群检测的系统研究比较分散。现着重介绍放射治疗对肺癌、鼻咽癌、子宫颈癌、脑瘤、大肠癌患者免疫功能的影响及碳离子射线、质子射线、常规X线对T细胞亚群和淋巴细胞增殖影响的研究进展,为放射治疗过程中合理使用T细胞亚群检测结果评价免疫功能和制订更合理的综合治疗方案提供策略和理论指导。     

异体输血对肿瘤患者免疫功能影响的研究进展

临床输血是肿瘤治疗的重要支持手段之一。输血对肿瘤患者起着双重作用,一方面可纠正患者的贫血状况,提高血氧含量;另一方面也可能引起受者免疫抑制,导致肿瘤复发和术后感染。其对肿瘤患者免疫功能影响的作用机制一直是国内外医学界关注的热点。在此就输血与肿瘤预后、输血与肿瘤免疫、肿瘤患者的输血等相关问题予以综述。     

Caspases家族在妇科疾病中的研究进展

Caspases家族是一类促凋亡蛋白,代表着一类细胞内的蛋白酶系统,在凋亡各个阶段发挥重要作用。细胞凋亡的发生是一个复杂caspase家族引导的蛋白酶级联反应过程,不同的细胞或不同信号转导途径诱发的凋亡过程中参与的caspase有所不同,其中caspase-3是凋亡的执行者,caspase-9在线粒体凋亡过程中发挥重要作用。现就其结构、机制,在妇科疾病中的表达及基因治疗等方面进行阐述,为妇科疾病的诊断治疗开辟新的途径。