痰液K-ras p53检测辅助诊断肺癌

（目的〕了解分子生物学检测方法是否对肺癌的诊断具有辅助价值。（方法）痰液处理方法为痰液0．5毫升加入痰处理液制备细胞沉淀液，酚氯仿提取DNA；SSCP－PCR银染和RFLP－PCR方法对痰液中P53、K－ras突变情况进行检测。（结果）在确诊的76例肺癌病人中，p53突变率为40．8％，K－ras突变率为25．0％，突变与肺癌类型、分期未见明显相关，其中有29例病人痰液普通脱落细胞学检测明性．痰液p53或K－ras突变阳性，最后经纤支镜刷检，活检部分经过手术征实为肺癌，有12例经手术证实为Ⅰ～Ⅱ期的相对早期的肺癌。(结论)痰液SSCP－PCR、RELP-PCR方法检测癌基因突变具有简便、实用、准确、可行的特点。对部分疑为肺癌而痰液脱落细胞学检测阴性的病人具有一定的辅助诊断价值。     

肺癌患者组织和痰液中p53基因、K-ras基因突变

 目的　探讨p53、K-ras基因在肺癌患者癌组织及相应痰液中改变情况及其联合检测在肺癌早期诊断中的价值。方法　对59例肺癌组织和14例肺部良性组织及相应痰液,应用PCR-SSCP-银染法检测了p53基因第5～8外显子突变情况;应用PCR-RFLP法对K-ras基因突变进行了检测。结果　p53基因在肺癌组织中突变率为37.3%,K-ras基因在肺腺癌突变率为48.0%,其它类型肺癌突变率仅为8.8%。相应痰液中两基因突变率分别为33.8%和44.0%,与组织中的突变率无明显差异,P<0.01。良性组织及相应痰液中两基因均无突变。吸烟患者的突变率(48.7%,68.5%)明显高于非吸烟患者的突变率(15.0%,11.1%),P<0.01;两基因的联合检测在肺癌的早期诊断中的价值(54.2%)明显优于单基因的检测,P<0.05。结论　痰液和组织中的基因突变率基本相似,即痰液中脱落细胞的分子遗传学改变能反映肺组织情况。因此以痰液为目标多基因的联合检测可能有助于肺癌的诊断。     

肺癌痰液p53和K-ras基因及端粒酶联合检测的临床研究

目的:从肿瘤分子生物学角度探讨痰液多基因、多因素联合检测对肺癌早期诊断、病情预后及肿瘤防治方面的意义。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多肽性分析(PCR-SS-CP)方法和聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定法(PCR-TRAP-ELISA)检测55例经病检确诊的肺癌患者痰中p53和K-ras基因突变率及端粒酶活性。结果:55例肺癌患者痰中,p53、K-ras基因突变率和端粒酶阳性率分别为61·8%、40·0%和58·2%,且有11例三项指标均异常。23例肺良性病患者p53、K-ras基因突变率和端粒酶阳性率分别为21·7%、8·7%和30·4%,两组比较差异有统计学意义,P<0·01。三项指标异常与肿瘤组织类型、临床分期及是否化疗差异无统计学意义(P>0·05),与吸烟差异有统计学意义(P<0·05)。联合检测的检出率明显高于单因素变异的检出率,P<0·05。结论:联合检测可提高肿瘤早期诊断的敏感性和检出率,并对判断疾病的性质及病情预后有一定的指导意义。痰液检测无创、简便,患者依从性好。     

肺癌患者癌组织和痰液细胞中p53和K-ras基因突变的研究

目的 检测肺癌组织和肺癌患者痰液脱落细胞中ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,比较联合检测ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ和单一检测ｐ５３或Ｋ－ｒａｓ基因在肺癌诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测了５９例肺癌组织、癌旁肺组织、１４全肺部良性病变肺组织及患者痰液脱落细胞中ｐ５３基因第５～８外显子、Ｋ－ｒａｓ基因第１外显子突变。结果 肺癌组织中ｐ５３基因突变率为３７．３％（２２／５９）,痰液脱落细胞为３     

检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值

目的　探讨检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值。方法　应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR ,MSP)对 5 0例周围型肺结节患者及 2 0例正常人痰脱落细胞p16基因甲基化改变进行检测 ,将检测结果与术后病理报告相对照。结果　周围型肺癌痰脱落细胞 p16MSP阳性率( 2 7/ 44 ,61.4%)明显高于良性周围型肺结节 ( 1/ 6,16.7%)及正常人 ( 3 / 2 0 ,15 .0 %) ( χ2 值分别为 4.2 81和11.869,P <0 .0 5 ) ,良性周围型肺结节 p16MSP阳性率与正常人无显著性差异 ( χ2 =0 .13 6,P >0 .0 5 )。鳞癌和腺癌患者痰脱落细胞 p16MSP阳性率无显著性差异 ( χ2 =3 .416,P >0 .0 5 )。如果以痰脱落细胞 p16MSP阳性作为判断肺结节恶性的标准 ,其诊断周围型肺癌的阳性预测值为 96.4%,阴性预测值 2 2 .7%,灵敏度 61.4%,特异度 83 .0 %。结论　检测痰脱落细胞 p16基因甲基化对周围型肺癌具有辅助诊断价值     

痰脱落细胞hnRNP A2/B1检测对肺癌诊断价值的探讨

目的:检测痰脱落细胞hnRNPA2/B1在肺癌诊断中的敏感性和特异性,探讨其对肺癌诊断价值.方法:采用免疫细胞化学染色方法,利用单克隆抗体检测临床可疑肺癌患者痰脱落细胞中hnRNP A2/B1的表达情况.结果:痰脱落细胞hnRNPA2/B1免疫细胞化学检查的敏感性为80.8%(21/26),特异性为78.9%(15/19),显著优于常规细胞学检查.结论:hnRNP A2/B1检查敏感性、特异性高,可用于肺癌的辅助诊断.     

肺癌组织抑癌基因P53异常分析

Ｐ５３基因５－８外显子ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列分析及石蜡包埋组织Ｐ５３鼠抗人单克隆抗体（Ｄｏ－１）免疫组化分析发现：５７例原发性肺癌中３７例有Ｐ５３蛋白积累。ＤＮＡ／ＰＣＲ产物直接测序发现：９／１２例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），８／１５非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）Ｐ５３基因突变，错义突变为１２／１７，Ｇ→Ｔ突变为６／１７。免疫组化发现：１１／１９例ＳＣＬＣ，１９／３７例ＮＳＣＬＣ Ｐ５３蛋白染色阳性。４／     

血清中P53蛋白及其抗体的检测对肺癌诊断意义的研究

目的探讨血清中P53基因的表达产物P53蛋白和抗P53蛋白抗体的检测对肺癌患者诊断的应用价值。方法应用Westernblot方法．对28例肺癌患者和18例对照的血清中的P53蛋白和抗P53蛋白抗体进行检测。结果分别在7.14％（2／28）和14.29％（4／28）的肺癌患者的血清中检测到P53蛋白和抗P53蛋白抗体,而良性肺疾病和健康对照组血清中求检测到这两种蛋白抗体。结论检测患者血清中的P53蛋白和抗P53蛋白抗体对肺癌患者具有一定的诊断价值。     

肺癌患者吸烟量与痰液细胞p53和Ki—ras基因突变的关系

目的　了解痰液细胞癌基因突变是否与肺癌患者的吸烟量有相关性。方法　将痰液 0 .5毫升加入痰处理液制备细胞沉淀液 ,酚氯仿提取DNA ;应用SSCP PCR银染和RFLP PCR方法对痰液中p5 3、K ras突变情况进行检测。统计肺癌患者的香烟消耗量 ,分析p5 3、K ras突变与吸烟量的关系。结果　在确诊的 110例肺癌中 ,存在p5 3或K ras基因突变者有 76例 ,突变率达 69.1% ,其中 16例为p5 3和K ras基因均有突变。全组中有 71例重度吸烟者吸烟指数 (≥ 40 0支·年 ) ,71例中 5 5例有p5 3或K ras基因突变 ,突变率达 77.5 % ,显著高于非吸烟组 (P <0 .0 0 1) ;p5 3和K ras突变患者的平均吸烟指数分别达到 861和 63 0支·年 ;而未突变的平均吸烟指数为 2 84和 5 5 4支·年 ,二者之间有显著性差异 ( χ2 =3 6.5 6,P =0 .0 0 2 ,双尾检验 )。结论　痰液细胞癌基因突变检测具有简便、实用、可行的特点 ,吸烟的肺癌患者中癌基因突变率显著高于非吸烟的肺癌患者 ,提示吸烟尤其是重度吸烟可能是支气管癌基因突变的主要原因之一 ,值得临床进一步开展深入的研究。     

痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值

目的　探讨痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值。方法　用流式细胞仪对 44例患者 ( 2 9例肺癌、15例肺良性疾病患者 )痰液细胞DNA含量进行分析 ,并与痰细胞形态学检查结果作比较。对痰细胞学阴性而DNA含量分析阳性的对照患者组织切片行 p5 3、PCNA、Ki67免疫组化分析。 结果　以最后病理诊断为标准 ,肺癌患者异倍体检出的敏感性为 82 .8%,显著高于痰细胞学的敏感性 ( 2 7.6%) (P <0 .0 0 5 ) ;肺癌晚期异倍体阳性率高于早期肺癌 ( 87.5 %比 76.9%,P <0 .0 0 2 5 ) ,其中 1例肺癌患者提前临床 10月检出异倍体。部分炎性假瘤及结核球患者痰标本检出异倍体 ,其相应的组织切片PCNA、Ki67免疫组化染色亦阳性。结论　痰液细胞DNA含量分析是肺癌诊断有效的辅助方法 ,可能有利于肺癌的早期诊断。部分炎性假瘤及结核球存在细胞增殖异常     

痰液沉渣切片和痰涂片检查诊断肺癌的比较性研究

目的　寻找更快捷准确的痰液检查肺癌癌细胞的方法。方法　对经手术切除病理确诊的 12 0例肺癌患者 ,进行痰液涂片和痰液沉渣切片两种方法检查癌细胞的比较性研究。结果　 ( 1) 12 0例肺癌患者痰涂片发现癌细胞 3 8例 ( 3 1.67%) ,而痰沉渣切片检出癌细胞 86例 ( 71.67%) (P <0 .0 0 1)。两种方法联合检出癌细胞 10 9例 ,检出率为 90 .83 %,显著优于单纯的痰沉渣切片法 (P <0 .0 0 1)。 ( 2 )痰沉渣切片HE染色能明确肺癌组织学类型的为 5 5 /86例 ( 63 .95 %) ,而痰涂片仅能分型 6/3 8例 ( 15 .79%) (P <0 .0 0 1)。 ( 3 )痰液沉渣切片可进一步作免疫组化染色 ,绝大部分HE染色不能分型的病例 ( 2 9/3 1)得以明确分型。结论　痰液沉渣切片方法简便、取材全面、癌细胞检出率高 ,并且能进行组织学分型 ,值得临床上推广应用     

Examination of sputum sediment paraffin section of diagnosis of lung cancer

Objective: To establish the rapid and accurate methods for detecting cancer cells from the sputum of patients with lung cancer. Methods: Sputum sediment section examination and sputum smear examination were performed. For 142 cases of lung cancer patients diagnosed by bronehia fibrous lens and confirmed by pathologic diagnosis. Results: (a) The positive diagnosis rate of lung cancer cell was 71.83% (102/142) when using sputum sediment examination while that was 32.39% (46/142) when using sputum smear examination, when using sputum sediment examination jointly with sputum smear examination, the positive diagnosis rate of lung cancer was 91.55% (130/142). According to the positive diagnosis rate of lung cancer, the sputum sediment examination was significantly higher than sputum smear examination (P＜0.001), joint examination of both of them was significantly higher than the single sputum sediment examination (P＜0.001); (b) As to the histopathologieal types of lung cancers, 66 eases could be identified among 102 eases whom were confirmed by sputum sediment examination, the identifieation rate was 64.71%; and 8 eases could be identified among 46 eases whom were confirmed by sputum smear examination, with an identification rate of 17.39%, it was significantly lower than that by sputum sediment examination (P＜0.001); (c) Immunohistoehemistry technique could be used in the sections of sputum sediment to identify some histopathological types which could not be identified by routine HE stain, with an identification rate of 94.44%(34/36). Conclusion: the sputum sediment examination has some advantages compared to the sputum smear examination such as the specimen may include more materials, the higher cancer cell identification positive rate and immunohistoehemistry method can be used to identify the histopathologieal type.     

液基细胞学检查系统在肺癌患者痰液检查中的临床应用价值

背景与目的传统的痰涂片内常混有大量粘液、血液、各种炎性细胞及坏死细胞碎屑，故阳性诊断率较低。液基细胞学检查系统（liquid-based cytologic test，LCT）已成功而广泛地应用于官颈细胞学诊断，而用于痰液细胞学诊断国内外报道均较少。本研究的目的是探讨LCT在肺癌患者痰液检查中的应用价值，寻找早期诊断肺癌的新途径。方法比较LCT与传统痰涂片方法应用于肺癌诊断的镜下特点及诊断率。结果LCT法涂膜面积明显缩小。背景干净，图像清晰，三维立体感突出。LCT对小细胞肺癌的诊断率显著高于传统涂片法（P〈0．05）。LCT与传统涂片法联合应用后，对肺癌的阳性诊断率可高达85．1％，明显优于单纯的传统涂片法（63．4％）（P〈0．01）。结论LCT在痰液制片、染色等方面便于实施质量控制，是值得推广的一种新技术，与传统涂片法联合应用具有重要的临床价值。     

Combined genetic analysis of sputum and computed tomography for noninvasive diagnosis of non-small-cell lung cancer

CT plays an important role in diagnosis of lung cancer, however has been limited by uncertain detection rate for early stage of non-small-cell lung cancer (NSCLC), particularly central tumors. Genetic analysis of sputum has proven to be useful in diagnosis of NSCLC. We proposed to evaluate efficacy of combing CT and genetic analysis of sputum for noninvasive diagnosis of stage I NSCLC. Genomic copy changes of a panel of lung cancer-related genes, HYAL2, FHIT, p16, and SP-A were analyzed by a mini-chip in sputum from 33 patients with stage I NSCLC and 49 cancer-free controls. The genetic and CT diagnoses were compared with surgical-pathologic stage. CT had higher sensitivity (85%) in detection of lung cancer compared with the mini-chip (70%) (p < 0.05), while there was no significant difference in specificity between the two tests (89% vs. 92%, p = 0.09). Similarly, CT showed considerably higher sensitivity (93%) in identifying peripheral tumors than did the mini-chip (64%) (p < 0.05), whereas there was no difference in specificity between them (98% vs. 96%, p = 0.28). However, in detecting central tumors, CT had lower specificity (90%) compared with the mini-chip (98%) (p < 0.05), although its sensitivity (79%) was higher than that of the mini-chip (73%) (p = 0.05). Combining both tests offered higher sensitivity (91%) than did any single one (85%, 70%, all <0.05), while still keeping 92% sensitivity. In particular, this combined approach yielded higher sensitivity, specificity, and accuracy for diagnosing central cancers compared with CT alone (all p < 0.05). The integration of the genetic assay with CT led to improvements in noninvasive diagnosis of stage I NSCLCs, especially central tumors.     

痰标本p16和MGMT基因甲基化对肺癌的诊断价值

目的：分析肺癌患者痰标本中p16和MGMT基因启动子区甲基化的改变情况,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标志物的价值。方法：运用甲基化特异性PCR技术,检测77例原发性肺癌患者痰标本和部分对应肿瘤组织(53例),以及30例正常对照者痰标本中p16和MGMT基因启动子区域的甲基化改变。结果：49例(63．6%)肺癌患者痰标本中检测到了pi6基因异常甲基化,34例(44．2%)检测到了MGMT基因异常甲基化,77例患者痰标本中2个基因中至少有1个基因出现甲基化为64例(83．1%),对肿瘤的检出灵敏度较高。长期吸烟史是影响肺鳞状细胞癌痰标本p16(P=0．001)基因启动子区甲基化的因素。随TNM分期增高,肺鳞状细胞癌患者痰标本中p16基因甲基化比例增高(P=0．021)；随TNM分期增高,肺腺癌患者痰标本MGMT基因甲基化比例增高(P=0．023)。对照组正常人痰液标本未发现p16和MGMT基因启动子区甲基化。结论：痰标本中p16和MGMT基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效生物标志物之一。