阿霉素对斑马鱼心脏毒性的评估及机制探索

目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度,将其分别联用或不联用右丙亚胺作用48 h。在斑马鱼胚胎发育至受精后72 h时,在显微镜下观察其心血管系统的形态学改变,记录心率变化,并分别抽提斑马鱼胚胎RNA,检测心脏发育相关基因及氧化、抗氧化相关指标。结果:随着阿霉素浓度的升高,斑马鱼出现了如胚胎发育畸形、心包水肿等改变,且死亡率升高,心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度为64.40μmol/L,而联用右丙亚胺(130.47μmol/L、260.93μmol/L)则可有效挽救阿霉素对斑马鱼心脏的毒性作用,并可分别将其胚胎生存率由35%显著提升至90%和88.3%(P<0.001),而右丙亚胺可有效清除丙二醛并恢复SOD活性。结论:成功建立了斑马鱼评价心脏毒药物的模型。阿霉素对斑马鱼胚胎的心脏毒性呈浓度依赖性增加,且与斑马鱼胚胎死亡率亦呈正相关,而右丙亚胺则可有效挽救阿霉素致斑马鱼胚胎的心脏毒性,并降低其死亡率,且此作用与斑马鱼心脏发育相关基因无关,但与氧化及抗氧化通路有明显的相关性。     

鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用

背景:以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验。目的:探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72h观测其表型变化,受精后72h统计其胚胎孵化率。结果与结论:鱼藤素在0.1μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死。结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育。     

鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用

背景：以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验。目的：探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响。方法：不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72h观测其表型变化,受精后72h统计其胚胎孵化率。结果与结论：鱼藤素在0.1μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死。结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育。     

应用全胚胎培养模型研究双酚A的胚胎毒性

目的：揭示双酚A（BPA）的发育毒性及其毒作用机制。方法：采用植入后全胚胎培养模型，将9．5d龄Wistar大鼠胚胎与含BPA的大鼠即刻离心血清共培养48h（BPA终浓度分别为0、20、40、60、80、100mg/L），观察双酚A对大鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。结果：随着BPA剂量的增加大鼠胚胎在体外的生长发育受影响越严重，呈现出明显的剂量－效应及剂量－反应关系。最大无作用剂量为40mg/L，≥60mg/L的BPA可诱发卵黄囊生长和血管分化不良、生长迟缓及形态分化异常，严重者出现体位异常、神经系统、鳃弓发育异常及小眼、小肢芽等畸形。结论：较高剂量BPA对体外培养的大鼠胚胎具有一定的胚胎毒性。BPA对卵黄囊胎盘的结构和功能受损可能是其发育毒作用的重要基础之一。     

模式生物斑马鱼在肝脏疾病研究中的应用

肝脏作为机体一个重要的代谢器官,在糖脂代谢和能量稳定的调节中发挥着重要作用。同时,其又是多种疾病如感染、自身免疫性疾病、代谢性疾病和肿瘤等疾病的靶器官。目前已建立了人类肝脏疾病的相关体外细胞模型,但鉴于模式生物在疾病研究中的优势,果蝇、线虫、爪蟾、小鼠、大鼠及斑马鱼等模式生物得到了广泛的应用。其中,斑马鱼由于饲养简单、繁殖快、产卵量高、胚胎透明、体外发育及可进行发育和遗传学分析等优点,作为新兴的模式生物,在人类     

甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的优化及应用

目的优化甲型流感病毒核酸提取步骤和RT-PCR反应液组成,提高RT-PCR荧光检测敏感性、缩短报告时间。方法优化QIAampViralRNAminiKit核酸提取操作步骤,对核酸裂解液处理后的样本进行两次层析柱过滤,核酸洗脱由试剂盒的室温环境改为72℃温育5min后离心洗脱,荧光RT-PCR反应液采用SuperScriptⅢPlatinumqRT-PCR系统优化,RT-PCR扩增程序修改如下:RT反应为50℃,10min,然后95℃,5min破坏逆转录酶,继后为45个循环的95℃,15s变性和60℃,30s复性和延伸。结果优化的甲型流感病毒核酸提取方法与QIAampViralRNA试剂盒方法获得的核酸Ct值基本一致,但低病毒含量样本的核酸提取效率明显高于未优化方法[优化方法Ct值(27.3,32.2,39.4),未优化方法Ct值(27.6,32.7,40.6)]。同一核酸在优化荧光RT-PCR扩增试剂的Ct值(25.0,30.5,35.6),扩增时间1h10min;明显优于配发试剂(27.3,32.5,40.1),扩增时间2h25min。结论优化后的甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法,无论是核酸提取还是荧光PCR扩增,其敏感性均明显得到提升,报告时间明显缩短。     

丹参酮ⅡA磺酸钠在缺血性斑马鱼模型中的促血管新生作用

目的:观察丹参酮ⅡA磺酸钠(TanⅡA)对缺血性斑马鱼模型的促血管新生作用及其潜在机制。方法:用内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRKI)诱导血管损伤斑马鱼模型,分别予以50、100、200μmol/L的TanⅡA处理。观察TanⅡA在上述浓度下对缺血性斑马鱼肠下静脉血管(SIVs)和节间血管(ISVs)的影响,并利用real-time PCR技术检测flt-1、flk-1A(kdrl)、flk-1B(kdr)3个调节血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路相关基因的表达变化。结果:在VRKI诱导的血管损伤斑马鱼模型中,TanⅡA呈浓度依赖性地逐渐恢复ISVs和SIVs血管;通过VEGF通路上的相关基因[flt-1、flk-1A(kdrl)、flk-1B(kdr)]进行调控。结论:在缺血性斑马鱼模型中,TanⅡA可通过VEGF信号通路发挥其促血管新生和保护血管作用。     

明视野显微镜下特异性区分斑马鱼视网膜细胞核的方法

目的 结合 JB-4塑胶树脂包埋和福尔根染色寻找一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法。方法 分析 JB-4切片厚度、盐酸水解程度及 Schiff 反应条件对细胞核染色的影响;观察不同切片厚度对细胞核可分辨度的影响;比较福尔根染色与亚甲天蓝 II 及核固红染色对细胞核观察的影响。结果 盐酸浓度越高、浸润时间越长,染色程度越强;盐酸浓度越低、浸润时间越短,染色程度越弱。低浓度的盐酸可以通过延长浸润时间而提高染色强度。染色强度随着 Schiff 浸润时间的延长而增加,2 h 达到最强染色。在2μm 组织切片中单个细胞核比在3μm组织切片、4μm 组织切片及6μm 组织切片中显示出更清晰的核边界。与亚甲天蓝 II 和核固红染色相比,福尔根染色特异性和稳定性更强。结论 通过本实验结果分析发现了一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法,这个简单可靠的染色方法可以用于细胞计数。     

斑马鱼:一种造血系统的遗传学研究模型动物

斑马鱼是研究脊椎动物器官发育和人类疾病的重要遗传学模型动物之一。它具有独特的生理特征:如体积小、生殖周期短、生殖能力强、体外受精且胚胎发育透明等特点,适宜于作大规模的突变筛选。斑马鱼已成为造血系统研究的重要的模式生物体。     

斑马鱼胚胎试验比较4种抗肿瘤药物的毒性☆

背景：目前斑马鱼胚胎毒性试验在国内已广泛应用于环境、农业和生态学领域,但其在药物毒性筛选的应用仍处于起步阶段。目的：运用斑马鱼胚胎试验比较4种常用抗肿瘤药物注射剂的毒性强弱,评估斑马鱼胚胎试验用于药物毒性筛选的效果。方法：挑选6hpf时发育正常的受精卵进行药物暴露。环磷酰胺、盐酸阿糖胞苷、氟尿嘧啶、硫酸长春新碱4种待测药物分别设置7个实验组,包括：5个药物浓度组,空白对照组（Holt Buffer溶液）,助溶剂对照组（含0.5%二甲基亚砜的Holt Buffer溶液）。于72hpf观察斑马鱼胚胎的发育变化,并统计各实验组斑马鱼胚胎的死亡数、孵化数、畸形数以及各种发育缺陷,并据此求取在72hpf时,斑马鱼胚胎畸形率、死亡率、各药物毒力方程、相关系数和95%置信限及LD50、ED50和LD1/ED99。结果与结论：斑马鱼胚胎试验中,测得4种常见抗肿瘤药物注射剂LD50从大到小依次排序为：环磷酰胺〉盐酸阿糖胞苷〉氟尿嘧啶〉硫酸长春新碱。ED50由大到小依次排序为：环磷酰胺〉盐酸阿糖胞苷〉氟尿嘧啶〉硫酸长春新碱。LD1/ED99由大到小依次排序为：硫酸长春新碱〉氟尿嘧啶〉环磷酰胺〉盐酸阿糖胞苷。结果表明,斑马鱼胚胎试验方法可适用于快速有效测试多种药物的毒性及评价药物安全性,达到高通量筛选药物的目的。     

改良洗胃法在救治急性口服中毒患者中应用

目的 探讨改良洗胃法对急性口服中毒患者的救治效果.方法 将142例急性口服中毒患者随机分为对照组和观察组,每组71例,对照组采用传统洗胃法,观察组采用改良洗胃法,比较两组患者的救治效果.结果 观察组患者洗胃用时为（23.40 ±2.17） min,堵管率为2.82％,电解质紊乱发生率为5.63％,胃部损伤发生率为4.23％,对照组分别为（35.50±3.21） min,15.49％,39.44％,26.76％,两组比较差异有统计学意义（t=6.149,x2值分别为6.859,23.236,13.770;P＜0.01）;两组病死率比较差异无统计学意义（P=0.116）.结论 改良洗胃法能明显缩短洗胃时间,彻底清除毒物,降低并发症发生率,减轻患者痛苦,提高救治成功率.     

Acute and sub-acute toxicity study of Clerodendrum inerme,Jasminum mesnyi Hance and Callistemon citrinus

ObjectiveTo study acute and sub-acute toxicity study of Clerodendrum inerme (C. inerme), Jasminum mesnyi (J. mesnyi) Hance and Callistemon citrinus (C. citrinus).MethodsThe acute toxicity test was conducted in Swiss albino mice. The extracts of C. inerme, J. mesnyi Hance and C. citrinus was administered in single dose of 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 and 5.0 g/kg and observed for behavioral changes and mortality, if any. In sub-acute toxicity study, Wistar rats of either sex were administered 1/5th of the maximum tolerated dose, p.o. for 4 weeks. Rats were observed weekly for any change in their body weight, food and water intake during 28 d of the treatment. At the end of 28 d, blood samples of the rats were collected for hematological and biochemical study.ResultsIn acute toxicity study, all four extracts of three plants were found to be well tolerated up to the dose of 2 000 mg/kg. These produced neither mortality nor any change in the behavior in mice. In sub-acute toxicity study, all four extracts of three plants at the LD₅₀ dose level did not produce any significant alteration in hematological and biochemical parameters in rats.ConclusionsThe results demonstrated that there is a wide margin of safety for the therapeutic use of each of the four extracts of three plants. The findings also corroborated the traditional use of these extracts.     

散瘀消肿膏皮肤毒性实验研究

目的观察散瘀消肿膏对动物皮肤的毒性作用。方法用健康家兔进行皮肤刺激性试验;采用健康大白鼠进行皮肤急性毒性试验;用健康豚鼠进行皮肤过敏试验。结果散瘀消肿膏对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性,对大鼠完整皮肤及破损皮肤无皮肤急性吸收毒性,对豚鼠完整皮肤无致敏作用。结论散瘀消肿膏用于活血、化瘀、消肿、止痛是安全无毒的。     

龙藤筋骨片的小鼠急性毒性实验研究

目的通过实验观察龙藤筋骨片混悬液灌胃后小鼠的急性毒性,以评价龙藤筋骨片的安全性。方法根据中药、天然药物急性毒性实验研究技术指导原则,龙藤筋骨片以混悬液剂型,以最大给药体积、最大给药浓度,对实验小鼠灌胃给药。以可测取数据对给药组小鼠和对照组小鼠进行比较,采用t检验,以P〉0.05为差异无统计学意义。结果对给药组小鼠和对照组小鼠进行给药后体质量对照,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论实验小鼠的给药剂量相当于临床人用剂量的266.7倍,未见实验小鼠有毒性反应,可见本品安全性较高。     

一种含腐殖酸水溶肥料的经口急性毒性评价

目的：对一种新型含腐殖酸水溶肥料进行小鼠经口急性毒性实验,为评价其安全性提供实验依据。方法按照《食品安全性毒理学评价程序和方法》(GB15193-2003)进行毒性试验和安全性评价。结果该受试物对雄性小鼠经口LD50为2.71g/kg BW,对雌性小鼠经口LD50为3.69g/kg BW。结论该受试物属低毒。     

密闭性功能敷料皮肤致敏试验及皮肤刺激试验

目的　通过皮肤致敏试验及皮肤刺激试验 ,对密闭性功能敷料在临床的应用和推广提供依据。方法　根据《中药新药研究指南 (药学、药理学、毒理学 )》提供的方法进行白色豚鼠皮肤致敏试验及新西兰家兔皮肤刺激试验。结果　本敷料的致敏率为 30 %,破损皮肤与完整皮肤刺激试验分别为轻刺激性和无刺激性。结论　本敷料属轻度致敏物 ,对破损皮肤有轻刺激性。     

人血白蛋白辛酸钠应用于大鼠急性毒性的观察

目的 找出静脉注射人血白蛋白辛酸钠大鼠未出现急性症状的辛酸钠最大用量及毒效应特征.方法 对110只SD大鼠经静脉分别一次性注射辛酸钠5.3、10.6、21.2、42.4、84.8 mg/ml(相当于临床使用的1、2、4、8、16倍)的人血白蛋白溶液[辛酸钠白蛋白组1～5(实验组1～5)]和水溶液(辛酸钠对照组)[2种溶液的每种辛酸钠浓度(组)各注射10只],注射剂量分别为50、100、200、400、800 mg/kg,另10只注射0.9％ NaCl作为阴性对照,于注射后d3、d7、d14称体重、每天观察死亡等毒性表现和行为特征,14 d后解剖大鼠,观察其内脏器官病变.结果 无论是辛酸钠白蛋白组还是辛酸钠对照组,当辛酸钠为42.4、84.8 mg/ml(临床使用的8、16倍)时均造成了大鼠注射后的应激反应,而辛酸钠为5.3、10.6和21.2 mg/ml(临床使用的1、2、4倍)时未对大鼠造成任何急性毒性作用.结论 人血白蛋白中辛酸钠增加至21.2 mg/ml(临床使用浓度的4倍)时不会对大鼠造成任何急性毒性作用.     

Prevalence of use and acute toxicity associated with the use of NBOMe drugs

Abstract

Introduction. The 25X-NBOMe series are N-2-methoxybenzyl analogues of the respective 2C-X substituted phenethylamine and include 25B-N(BOMe)2, 25B-NBOMe, 25C-NBOMe, 25D-NBOMe, 25E-NBOMe, 25G-NBOMe, 25H-NBOMe, 25I-NBOMe, 25N-NBOMe and 25iP-NBOMe. There are reports of their use as novel psychoactive substances and associated acute toxicity from Europe, the United States and elsewhere over the last five years. This review will discuss the epidemiology of use and pattern of acute toxicity associated with use of these compounds. Methods. A PubMed search was performed using the search terms ‘NBOMe’, ‘25B-N(BOMe)2’, ‘25B-NBOMe’, ‘25C-NBOMe’, ‘25D-NBOMe’, ‘25E-NBOMe’, ‘25G-NBOMe’, ‘25H-NBOMe’, ‘25I-NBOMe’, ‘25N-NBOMe’ and ‘25iP-NBOMe’ covering the years 1966–2014. In addition, abstracts from the 2010–2014 congresses of the European Association of Poisons Centres and Clinical Toxicologists and the 2010–2013 North American Congress of Clinical Toxicology were reviewed using these search terms. Further information was obtained from the European Information System and Database on New Drugs co-ordinated by the European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction (EMCDDA). Prevalence of use. There are no national or international surveys collecting data on the prevalence of use of NBOMe drugs. The only information on prevalence of use is from two sub-population surveys of individuals who frequent nightclubs. Of 22,289 respondents of the 2013 Global Drugs Survey, 582 (2.6%) had previously used an NBOMe; the most commonly used NBOMe was 25I-NBOMe (442 respondents, 2.0% of whole cohort and 75.9% of those who had used an NBOMe). In a survey of 397 clubbers in London nightclubs in 2013, 11.8% had heard of the NBOMe drugs (compared with 96.0% for mephedrone), and 4.8% had ever used an NBOMe (compared with 76.6% for mephedrone). Acute toxicity. There were 29 published cases in the literature of acute toxicity associated with the use of an NBOMe: 25I-NBOMe – 23 cases; 25B-NBOMe – 3 cases; 25C-NBOMe – 3 cases. Commonly reported features include tachycardia (96.6%), hypertension (62.0%), agitation/aggression (48.2%), seizures (37.9%) and hyperthermia (27.6%). Five patients were reported to have developed acute kidney injury. There were an additional 25 reports of acute toxicity related to the use of 25I-NBOMe reported to the EMCDDA. The pattern of toxicity in these cases is similar to that seen in the published cases. NBOMe-related deaths. 25I-NBOMe has been detected in eight fatalities; in one of these, 25C-NBOMe was also detected. The role of the NBOMe drugs in these deaths has not been determined in all cases. Conclusions. Currently, there is evidence suggesting limited use of the NBOMe class of drugs as novel psychoactive substances compared with that of classical recreational drugs and other novel psychoactive substances such as mephedrone.     

密闭性功能敷料急性毒性试验研究

[目的 ]通过急性毒性试验 ,为密闭性功能敷料在临床的应用和推广提供依据。[方法 ]根据《中药新药研究指南 (药学、药理学、毒理学 )》提供的方法进行小鼠经口急性毒性试验、大鼠经皮急性毒性试验及家兔完整和破损皮肤急性毒性试验。 [结果 ]本敷料的半数致死量 (LD50 ) >2 0g/kg ,皮肤急性毒性试验无不良反应。[结论 ]密闭性功能敷料属实际无毒级 ,初步证明该敷料具有较好的临床应用安全性。     

双酚A对雄性小鼠血清中NO、NOS及睾丸组织形态学的影响

目的探讨双酚A对雄性小鼠生殖功能损害。方法腹腔注射染毒，观察双酚A对雄性小鼠睾丸的病理损伤和血清中NO含量和NOS活性的变化。结果双酚A引起生精细胞与支持细胞发生分离，排列紊乱，从基底膜脱落入管腔，支持细胞和生精细胞核染色质凝聚成絮状。双酚A使小鼠血清中NO含量和NOS活性升高。结论双酚A具有雌激素样作用，对雄性小鼠生殖功能有损伤，这种作用可能与脂质过氧化有关。