共转染CDK1、CDK2 siRNA对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 研究共转染CDK1、CDK2 siRNA同时抑制CDK1、CDK2蛋白表达对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨细胞周期主要调控分子在肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象,用脂质体lipofectamine2000同时转染CDK1 和CDK2 siRNA.在转染后48、60 h收集细胞,用Western印迹检测CDK1、CDK2蛋白的表达,AnnexinV/PI检测转染细胞的凋亡,流式细胞术DNA含量检测分析细胞周期.转染细胞进行瑞氏-姬姆萨染色(Wright-Giemsa)后在显微镜下观察其形态变化.结果 共转染CDK1、CDK2 siRNA后48和60 h,Western 印迹结果显示CDK1和CDK2蛋白的表达都同时降低.共转染CDK1、CDK2 siRNA后,细胞周期S期和G2/M期比例与对照相比有明显增加;共转染细胞经瑞氏-姬姆萨染色后在显微镜下可见双核或多核细胞增多;AnnexinV/PI检测结果显示共转染CDK1、CDK2 siRNA的细胞在48和60 h细胞凋亡率与对照相比有显著的升高.结论 siRNA 干扰导致的CDK1、CDK2表达同时降低不仅导致细胞周期S期和G2/M期的阻滞,也诱导了肿瘤细胞的凋亡.     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4抑制因子a与肿瘤

INK4a/ARF基因位点细胞特殊,它至少编码P16^INK4a和P19^ARF两种在调控细胞周期和细胞凋亡中起重要作用的蛋白质,人类的许多肿瘤与该位点的基因突变有关,现就这一基因位点的结构、功能和抑癌机理进行综述。     

CDK1 siRNA干扰在Taxol诱导细胞凋亡中的作用

目的 研究转染细胞周期依赖性蛋白激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)siRNA、以及转染后进行凋亡刺激对细胞周期和凋亡的影响,探讨CDK1在细胞凋亡中的确切作用,揭示细胞周期与细胞凋亡协调的分子机制.方法 以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象,脂质体转染CDK1 siRNA,转染后48 h加紫杉醇(Taxol) (20 μg/ml)刺激凋亡,Western印迹检测CDK1和抗凋亡蛋白BCL2表达,AnnexinV/PI法检测细胞的凋亡,流式细胞仪分析DNA含量检测细胞周期.结果 转染CDK1 siRNA后,CDK1蛋白的表达下降,细胞周期G2/M期比例增加,细胞凋亡率与对照相比没有明显升高.只加Taxol刺激12 h后细胞凋亡率增加并伴有S期和G2/M期比例增加. 转染CDK1 siRNA后再用Taxol刺激,其细胞凋亡率没有明显改变,G2/M期阻滞效应也没有叠加.BCL2蛋白只在加Taxol刺激组表达下降,与CDK1表达减少没有相关性.结论 siRNA沉默导致的CDK1表达降低只导致细胞周期G2/M期阻滞,没有引起细胞凋亡;CDK1的表达降低对紫杉醇所诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡效应没有明显影响.     

肿瘤抑制基因研究新进展——多肿瘤抑制基因MTS分子生物学简介

人类第9号染色体短臂不到40kb的座位发现了多肿瘤抑制基因(Multiple Tumor Sup-Pressor1和2,MTS1和MTS2)。它们分别编码两种蛋白:前者叫做P16蛋白,抑制依赖细胞周期素激酶 4(Cyclin-dependent Kinase 4,CdK4)。后者比P16小20多个残基,功能推测与P16相近。MTS1基因与p~(53)相比,它在75％的各种癌细胞中发生缺失;而p~(53)基因的缺失率在各种癌细胞中 为50％。P~(16)到目前为止发现的第一个直接控制细胞增殖周期的细胞固有蛋白,而P~(53)控制细胞增殖周期要通过P~(21)发挥抑制作用。     

多重肿瘤抑制基因MTS1／p16CDK4I与细胞周期调节

本文介绍了近几年有关ＭＴＳ１／ｐ１６ＣＤＫ４Ｉ（简称ｐ１６）基因的研究工作，特别对ｐ１６基因在肿瘤中的突变以及细胞周期蛋白、ＣＤＫｓ和ｐ１６蛋白等细胞周期抑制因子在肿瘤发生发展中可能的作用机制进行了综述。     

茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的分子机制研究新进展

茶多酚具有抗癌作用,但其分子机制尚未明了.近年来,茶多酚抑制肿瘤细胞增殖的研究取得了许多突破性进展.茶多酚能下调肿瘤细胞DNA拓扑异构酶与DNA引物酶的活性,抑制DNA的复制;茶多酚可明显促进WAF1/p21,KIP1/p27,p16,p18和p53蛋白表达,抑制cyclin D1,CDK4和CDK6表达,使细胞周期发生G1/S与G2/M阻滞;茶多酚也能通过干预AP-1与NF-kB信号转导通路、调控细胞内氧化还原状态、抑制端粒酶活性等多种机制导致肿瘤细胞增殖抑制.     

CDK4调控机制在肿瘤发生中的作用和意义

肿瘤是在环境因素和遗传因素共同作用下，细胞周期发生紊乱、细胞失控性生长所致的一类疾病。细胞周期的演进受到多个因子的调控，这个调控网络的核心就是周期素依赖性激酶（cyclin dependent kinases，CDKs）。以CDKs为核心，细胞周期素对其进行正性调控，细胞周期素依赖性激酶抑制因子对其进行负性调控。在细胞周期的G1期，细胞接受各种信号的刺激以后，是进入DNA复制阶段为以后的有丝分裂做准备，     

增殖抑制基因抑制乳腺癌细胞生长和侵袭及其相关机制研究

目的 研究增殖抑制基因(HSG)对乳腺癌MDA-MB-231细胞(简称231细胞)生物学行为的影响并对其作用机制进行探讨.方法 构建HSG全长真核表达载体,通过脂质体瞬时转染法使其在231细胞中高表达,通过MTT比色实验检查肿瘤细胞的体外增殖能力、Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力和应用流式细胞术检测肿瘤细胞的细胞周期及凋亡情况;并应用GST-pulldown法检测HSG高表达对乳腺癌细胞Ras蛋白活性的影响.结果 将构建好的重组人HSG真核表达质粒pcDNA3-MYC-HSG转染至231细胞中,MTT比色实验结果显示HSG的过表达可以抑制肿瘤细胞的增殖;Matrigel侵袭实验显示转染HSG的肿瘤细胞的穿膜细胞数(HSG/231组,78.5个±5.8个)与转染空载体组(vector/231组,131.1个±14.5个)相比明显减少.流式细胞分析结果显示转染HSG/231组细胞出现了G_0/G_1期阻滞(56.3%±2.3%),且凋亡细胞的百分比与对照组(vector/231组为50.4%±1.9%)相比有所增加.Ras蛋白活性检测发现转染HSG/231组的乳腺癌细胞Ras蛋白活性明显下降.结论 HSG表达上调可抑制高侵袭性231细胞的体外增殖和侵袭能力,使其出现G_0/G_1期细胞周期阻滞,并可促进细胞凋亡.HSG对乳腺癌细胞的抑制作用可能与其抑制细胞Ras活性有关.     

细胞周期蛋白与肿瘤

癌基因和调节细胞周期成分之间联系在肿瘤发生中的作用愈来愈受到重视,该领域的研究非常活跃。本文对调节细胞周期成分之一的细胞周期蛋白(主要是D_1型)在肿瘤发生中的作用及与其它癌基因或抑癌基因的关系作一简要介绍。     

CIP-KIP细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子(CKI)是细胞周期调控网络的主要成员之一,在周期调控中具有重要的地位,CIP-KIP是CKI两个家族之一,与细胞生长分化和肿瘤发生方面有极其重要的关系。本文对CIP-KIP家族的细胞周期调控、基因敲除以及促CDK/CychnD装配功能的最新进展进行综述。     

人类ZAKβ与YWHAZ蛋白相互作用的初步研究

目的研究ZAKβ与YWHAZ蛋白之间的相互作用。方法以ZAKβ为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人类肝脏cDNA文库,经GST Pull-down、免疫共沉淀和细胞共定位实验分别验证ZAKβ与猎物蛋白在体外和细胞内的相互作用,构建ZAKβ的截短体以确定相互作用的区域,用磷酸化抗体检测ZAKβ在相互作用中的磷酸化作用,并通过流式细胞仪检测这对蛋白相互作用对细胞周期的影响。结果利用酵母双杂交筛选到一个能与ZAKβ相互作用的蛋白YWHAZ,并在体外和细胞内都验证了这二者的相互作用,发现这两个蛋白都能共定位于293T细胞的胞质中,确定了ZAKβ的N端1~250氨基酸为与YWHAZ蛋白相互作用的区域。体外实验发现了这二者的相互作用涉及到磷酸化反应,发现这对蛋白的相互作用能提高293T细胞的G2期水平。结论首次发现并证实了ZAKβ和YWHAZ之间的相互作用,发现该相互作用涉及到磷酸化过程并能够对细胞周期产生影响。     

细胞周期抑制蛋白p14ARF在卵巢癌中的表达及其临床意义的研究

卵巢癌因其位置深在,早期症状不典型诊断困难,目前尚缺少有效的治疗手段而成为妇科肿瘤中的一大难题.     

CDK4在子宫内膜癌组织中的表达及意义

CDK4是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyc lin-depend-ent k inases,Cdks)家族的成员之一,是细胞周期G1期的正调控因子。哺乳动物细胞增生及分化的调节大部分发生于细胞周期G0/G1期和/或G1/S期的转变时期,CDK4作为G1期重要的调控因子,已发现它在多种肿瘤中出现表达异常[1]。本研究应用免疫组化方法检测了子宫内膜癌(endom e-trial carc inom a,EC)中CDK4蛋白的表达,以探讨它们在EC的发生、发展中的作用。1材料与方法1·1材料:收集齐鲁医院1999年6月—2001年12月EC存档蜡块42例。病理分类按国际妇科病理协会(1988)标准分类。临床手术…     

KAI1肿瘤转移抑制基因研究新进展

KAI1是采用ALU-PCR法在人前列腺癌细胞的第11号染色体上分离出来的一种新的转移抑制基因.它可能参与肿瘤细胞-细胞、细胞-基质的粘附,其特殊的基因表达调控机制与人类多种肿瘤抑制基因关系复杂.研究表明,KAI1基因与乳腺癌、膀胱癌、肝癌、大肠癌等恶性肿瘤侵袭及转移抑制有关.     

蛋白激酶C在鼻咽癌细胞周期中的作用

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）调控人鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ生长的机制，研究ＰＫＣ与ＣＮＥ－２Ｚ细胞周期的关系。方法：使用同位素标记有丝分裂法测细胞周期总时间及流式细胞仪（ＰＣＭ）测细胞周期；ＭＴＴ法测细胞增殖，蛋白－ＤＮＡ双参数法检测ＰＫＣα亚型在细胞周期中的分布。结果：细胞周期总时间为１８．５ｈ；各时相分别为Ｇ１期８．７ｈ，Ｓ期７．１ｈ，Ｇ２／Ｍ期３．９ｈ。作用于ＰＫＣ蛋白催化区的ＰＫＣ抑制剂Ｓ     

多肿瘤抑制基因与肿瘤

多肿瘤抑制基因ｐ１６，ｐ１５是新近发现的一组抑癌基因，均位于人类染色体ｑｐ２１，在细胞周期的调控中起重要作用。它们在人体肿瘤和细胞系中有非常高的失活率，主要失活方式有基因纯合缺失，点突变，原位甲基化等     

DAPK蛋白C-末端多肽对TNF-α抑制人胚肺成纤维细胞生长的影响

目的研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)C-末端多肽对TNF-α抑制人胚肺成纤维细胞生长的影响,为在应用α肿瘤坏死因子(TNF-α)治疗疾病时,将DAPK蛋白C-末端多肽(DCTP)用于保护正常组织细胞提供实验证据。方法构建真核表达载体pcDNA3.1( )-DCTP,并采用脂质体法将其转入体外培养的人胚肺成纤维细胞,RT-PCR、W estern b lotting检测DAPK蛋白C-末端多肽表达,MTT法检测人胚肺成纤维细胞生长。结果真核表达载体pcDNA3.1( )-DCTP在人胚肺成纤维细胞中获有效表达。pcDNA3.1( )-DCTP对细胞增殖无影响,但DAPK蛋白C-末端多肽可抑制TNF-α的细胞毒性。结论DAPK蛋白C-末端多肽抑制TNF-α对人胚肺成纤维细胞生长的抑制,为在应用TNF-α治疗疾病时,将DAPK蛋白C-末端多肽用于保护正常组织细胞的临床研究提供了前提基础。     

卵巢生殖细胞肿瘤中cyclin E、cyclin A与CDK2的表达

肿瘤是一类多步骤发生、多基因突变所致的细胞克隆性、进化性疾病,其最基本的特征是细胞失控性生长。cyclins和CDKs直接参与细胞周期调控,它们的异常表达可使细胞周期启动、运行和终止的异常,使细胞增殖过多、凋亡减少,导致肿瘤的发生。有关cyclin E、cyclin A和CDK2蛋白在各种组织类型卵巢生殖细胞肿瘤（germ cell tumor of ovary,GCTO）中表达的研究少见报道。本研究旨在探讨cyclin E、cyclin A和CDK2在GCTO中的表达及其相关性。     

幽门螺杆菌与胃癌癌变的研究新进展

幽门螺杆菌与胃癌的发生密切相关。幽门螺杆菌感染能促进细胞端粒酶活化 ,胃组织EGF与EGFR表达增高 ,引起胃粘膜上皮细胞增殖加速 ,也能促使细胞凋亡的增加 ,加快胃上皮细胞的转换 ,导致细胞周期调控机制发生改变 ;幽门螺杆菌感染可使胃酸分泌减少 ,分解硝酸盐细菌在胃内滋生 ,使胃内具有致癌作用的亚硝基化合物形成增加 ,参与细胞的癌变。这些研究均提示幽门螺杆菌感染可能通过多种分子机制参与胃癌的癌变。     

板蓝根抑制脂多糖诱导的p38蛋白激酶活性研究

目的　探讨板蓝根对内毒素介导的信号传导的影响。方法　取出BALB c小鼠腹腔内的单核细胞 ,分别用板蓝根提取液Ⅲ组分 (1mg ml) +LPS 10 0 μg ml;板蓝根提取液Ⅲ组分 (1mg ml) +金黄色葡萄球菌 (10 6 CFU ml) ;只用LPS 10 0 μg ml;不加LPS和其它药物 ,直接用DMEM培养液 ,培养 6h。取培养上清液检测TNF、IL 6、NO水平 ,收集细胞检测胞内p38MAPK(丝裂原活化蛋白激酶 )活性。然后将板蓝根液按倍比稀释至 1∶8倍时 ,加入LPS 10 0 μg ml,培养 6h后收集细胞测p38MAPK活性。结果　加入板蓝根提取液的单核细胞p38MAPK活性未见明显增强 ,TNF、IL 6、NO水平无明显上升 ,与单独加入LPS后这些指标显著增高相比 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。而加入金黄色葡萄球菌组单个核细胞p38MAPK活性 ,产生TNF、IL 6、NO浓度仍然较高。板蓝根液倍比稀释后 ,p38MAPK活性逐渐上升。结论　板蓝根可特异性抑制由内毒素介导的p38活性 ,并呈浓度依赖性。