异氟醚对大鼠海马脑片突触长时程增强的影响

目的 评价异氟醚对大鼠海马脑片突触长时程增强(LTP)的影响.方法 雄性SD大鼠,断头后取出海马组织,制备厚400 μm的海马脑片.采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外群体峰电位(PS).取28张脑片,随机分为4组(n=7):用正常的人工脑脊液(ACSF)灌流海马脑片,记录正常的PS,待其稳定后,对照组继续灌流ACSF,不同浓度异氟醚组分别用含异氟醚0.125 mmol/L(异氟醚0.125组)、0.25 mmol/L(异氟醚0.25组)、0.5 mmol/L(异氟醚0.5组)的ACSF灌流,记录PS幅值.另取70张脑片,随机分为10组(n=7):用正常ACSF灌流海马脑片,记录稳定正常的PS 30 min,LTP组继续灌流ACSF,其余各组分别用含异氟醚0.125 mmol/L(异氟醚LTP 0.125组)、0.25 mmol/L(异氟醚LTP 0.25组)、0.5 mmol/L(异氟醚LTP 0.5组)、印防己毒素0 μmol/L(印防己毒素组)、荷包牡丹碱10 μmol/L(荷包牡丹碱组)、CGP353485 μmol/L(CGP35348组)、印防己毒素50 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(印防己毒素+异氟醚组)、荷包牡丹碱10 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(荷包牡丹碱+异氟醚组)、CGP353485 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(CGP353485+异氟醚组)的ACSF灌流,记录PS 30 min后,施以100 Hz的高频强直刺激(HFS),记录PS幅值.结果 与对照组比较,异氟醚0.125组给药后10～45 min PS幅值降低,异氟醚0.25组和异氟醚0.5组给药后5～45 min PS幅值降低(P＜0.05或0.01).LTP组HFS后5～60 min PS幅值增高,较刺激前增加了(52±12)%(P＜0.01).与HFS前比较,异氟醚LTP 0.125组、异氟醚LTP 0.25组和异氟醚LTP 0.5组给予HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05);与LTP组比较,3组PS幅值降低(P＜0.01).与HFS前比较,印防己毒素组、荷包牡丹碱组和CGP 35348组HFS后PS幅值增加(P＜0.01);与LTP组比较,3组PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05).与HFS前比较,印防己毒素+异氟醚组和荷包牡丹碱+异氟醚组HFS后PS幅值增加(P＜0.01),CGP 353485+异氟醚组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05);与LTP组比较,印防己毒素+异氟醚组和荷包牡丹碱+异氟醚组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05),CGP353485+异氟醚组HFS后PS幅值降低(P＜0.01);与异氟醚LTP 0.25组比较,印防己毒素+异氟醚组和荷包牡丹碱+异氟醚组HFS后PS幅值增加(P＜0.01),CGP 353485+异氟醚组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚可通过激活大鼠海马GABAA受体,抑制LTP的形成,从而影响记忆功能.     

N受体α4β2亚型在异氟醚抑制大鼠海马突触长时程增强中的作用

目的 评价海马神经元N受体α4β2亚型在异氟醚抑制大鼠海马突触长时程增强(LTP)中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,取海马组织,制备海马脑片.取70张脑片,随机分为10组(n=7):各组用正常人工脑脊液(aCSF)灌流海马脑片,记录稳定正常的细胞外群峰电位(PS)30 min,LTP组继续给予正常的aCSF灌流,其余各组分别用含异氟醚0.125 mmol/L(I1组)、0.25 mmol/L(I2组)、0.5 mmol/L(I3组)、地棘蛙素0.1 mmol/L(E1组)、1.0 μmol/L(E2组)、地棘蛙素0.1 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(E1+I2组)、地棘蛙素1.0 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(E2+I2组)、双氢β-刺酮碱(DHβE)0.1μmol/L(D组)、DHβE0.1μmol/L+异氟醚0.125 mmol/L(D+I1组)的aCSF灌流.采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外PS 30 min后,施以高频强直刺激(HFS)15 min,诱发LTP,记录各组HFS结束后5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时的PS幅值.结果 与LTP组比较,I1.2.3组、D组、D+I1组、E1+I2组HFS后PS幅值降低,E1.2组HFS后PS幅值升高(P＜0.05),E2+I2组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05).与I1组比较,D+I1组HFS后PS幅值降低(P＜0.05).与I2组比较,E1+I2组、E2+I2组HFS后PS幅值升高(P＜0.01).结论 异氟醚通过拮抗海马神经元N受体α4β2亚型从而抑制了突触LTP的形成.     

异丙酚对大鼠海马CA1区突触传递可塑性的影响

目的研究异丙酚对海马CAl区突触传递和可塑性的影响。方法断头分离Wistar大鼠海马半脑,制备400μm厚度海马脑片。45张脑片分为六组。脂肪乳剂组和异丙酚组的脑片以印防己毒素预孵30min,然后加入450μl脂肪乳剂或异丙酚(相当于500μmol/L),观察对兴奋性突触后电流(EPSC)的影响。脂肪乳剂长时程增强(LTP)组、脂肪乳剂长时程抑制(LTD)组、异丙酚LTP组、异丙酚LTD组的脑片以90μl脂肪乳剂或异丙酚(相当于100 μmol/L)预孵60 min,给予高频刺激(HFS)或低频刺激(LFS),记录LTP或LTD的发生情况。结果 脂肪乳剂对EPSC无影响(P>0.05);500 μmol/L异丙酚使2/3细胞EPSC下降至基础值的67.5％(P<0.05),使1,3细胞EPSC上升至基础值的140.3％(P<0.05)。脂肪乳剂LTP组给予HFS后EPSC值为基础值的151.6％(P<0.05),脂肪乳剂LTD组给予LFS后EPSC值为基础值的57.9％(P<0.05);异丙酚LTP组给予HFS后,LTP可以产生但不能维持,HFS后EPSC值为基础值的98.8％(P>0.05),异丙酚LTD组给予LFS后EPSC值为基础值的40.8％(P<0.05),明显低于脂肪乳剂LTD组(P<0.05)。结论异丙酚对大鼠海马CAl区突触传递具有双重影响,出现抑制和兴奋两种效果;异丙酚损害大鼠海马CAl区锥体神经元LTP的维持而易化LTD。     

依托咪酯对大鼠皮层、海马脑片缺氧复氧损伤的保护作用

目的观察依托眯酯对大鼠皮层、海马脑片缺氧复氧损伤的保护作用及其机制。方法雄性SD大鼠10只,体重90-100 g,制备大脑皮质和海马脑片,随机分为对照组、缺氧复氧组、3 μmol ·L-1依托咪酯组、6μmol·L-1依托咪酯组、15 μmol·L-1依托咪酯组和6 μmol·L-1依托咪酯+γ-氨基丁酸 A(GABAA)受体拮抗剂Picrotoxin 50 μmol·L-1组。各组脑片缺氧10 min复氧120 min时,测定经三苯基氯化四唑氮染色的吸光度(A490),Fluo-3荧光染色后计算细胞内Ca2+浓度。结果缺氧复氧可导致大脑皮层、海马A490降低,细胞内Ca2+浓度升高,不同浓度依托咪酯可减弱缺氧复氧导致的上述改变,以 6 μmol·L-1依托咪酯的效果较好,且此作用可被GABAA受体拮抗剂完全拮抗。结论依托咪酯对大鼠皮层、海马脑片缺氧复氧损伤有一定的保护作用,可能通过GABAA受体介导,并降低Ca2+负荷有关。     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

GABA_A受体拮抗药对小鼠痛阈的影响

目的　本研究旨在探讨印防已毒素和荷包牡丹碱对小鼠CO2 激光痛阈的影响。方法　NIH小鼠 10 5只 ,随机分为七组 ,每组 15只。对照组 ,注射 0 9%生理盐水 10ml/kg(NS组 ) ;印防己毒素组 ,注射印防己毒素 0 5mg/kg(PTX1组 ) ,1 0mg/kg(PTX2组 )、2 0mg/kg(PTX3组 ) ;荷包牡丹碱组 ,注射荷包牡丹碱 0 5mg/kg(BIC1组 )、1 0mg/kg(BIC2组 )、2 0mg/kg(BIC3组 )。所有的药物均经腹腔注射。采用CO2 激光作为伤害性刺激 ,痛阈值以激光脉冲持续时间 (ms)表示。结果　与NS组比较 ,PTX1与BIC1组小鼠的痛阈没有明显差异 (P >0 0 5 )。PTX2组、PTX3组及BIC2组、BIC3组小鼠的激光脉冲持续时间较NS组延长 (P <0 0 1) ,PTX3组、BIC3组分别比PTX2组、BIC2组延长更明显 (P <0 0 5 )。结论　本研究表明 ,GABAA 受体拮抗药印防己毒素和荷包牡丹碱对CO2 激光刺激引起的疼痛有明显的镇痛作用 ,且呈剂量相关     

依托咪酯对猪肾上腺皮质细胞的毒性作用及依托咪酯预处理对其的影响

目的 探讨依托咪酯对猪肾上腺皮质细胞的毒性作用及依托咪酯预处理对其的影响.方法 实验分两部分,第一部分为细胞毒性实验,猪肾上腺皮质细胞随机分为8组,每组3皿,对照组加入0.5%二甲基亚砜(DMSO),其他7组分别加入50、100、200、300、400、500、1000 μmol/L依托咪酯,每组分别作用6、12、24 h,进行下述指标检测.第二部分为预处理实验,猪肾上腺皮质细胞随机分为3组,每组3皿,对照组加入0.5%DMSO,损伤组加入325 μmol/L依托咪酯作用24 h,预处理组先加入0.6 μmol/L依托咪酯作用1 h,洗脱后在培养基中孵育4 h,再加入325 μmol/L依托咪酯作用24 h.采用CCK-8法检测细胞活力,计算24 h时依托咪酯半数抑制浓度(IC50),采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 依托咪酯可抑制猪肾上腺皮质细胞活力,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,24 h时IC50为325μmol/L.0.6 μmol/L依托咪酯预处理1 h可抑制325μmol/L依托咪酯诱发的细胞凋亡具有抑制作用.结论 依托咪酯通过诱发猪肾上腺皮质细胞凋亡对其功能产生抑制作用;依托咪酯预处理可减轻药物自身引起的这种抑制作用.     

GABAA受体拮抗药对小鼠痛阈的影响

目的本研究旨在探讨印防已毒素和荷包牡丹碱对小鼠CO2激光痛阈的影响.方法NIH小鼠105只,随机分为七组,每组15只.对照组,注射0.9%生理盐水10ml/kg(NS组);印防己毒素组,注射印防己毒素0.5mg/kg(PTX1组),1.0mg/kg(PTX2组)、2.0mg/kg(PTX3组);荷包牡丹碱组,注射荷包牡丹碱0.5mg/kg(BIC1组)、1.0mg/kg(BIC2组)、2.0mg/kg(BIC3组).所有的药物均经腹腔注射.采用CO2激光作为伤害性刺激,痛阈值以激光脉冲持续时间(ms)表示.结果与NS组比较,PTX1与BIC1组小鼠的痛阈没有明显差异(P＞0.05).PTX2组、PTX3组及BIC2组、BIC3组小鼠的激光脉冲持续时间较NS组延长(P＜0.01),PTX3组、BIC3组分别比PTX2组、BIC2组延长更明显(P＜0.05).结论本研究表明,GABAA受体拮抗药印防己毒素和荷包牡丹碱对CO2激光刺激引起的疼痛有明显的镇痛作用,且呈剂量相关.     

浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响

目的 探讨浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,制备脑片.取符合标准的海马脑片32片,随机分为4组(n=8):氧糖缺失组(OGD组)、七氟烷组(Sev组)、浅低温组(MH组)和浅低温+七氟烷组(MH+Sev组).OGD组和MH组分别于37℃或32℃下用经95%N2-5%CO2混合气体饱和的无糖(氧糖缺失)人工脑脊液(ACSF)灌流脑片14 min;Sev组和MH+Sev组分别于37℃或32℃下用预先经4%七氟烷平衡的有氧有糖ACSF灌流脑片14 min,再用预先经4%七氟烷平衡的氧糖缺失ACSF灌流脑片14 min.记录海马CA1区缺氧到复氧1 h期间的顺向群峰电位(OPS).采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与OGD组比较,Sev组和MH组OPS消失时间延长,OPS恢复程度升高,MH组LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与MH组比较,MH+Sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与Sev组比较,MH+sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01).结论 浅低温(32℃)联合4%七氟烷可减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤.     

丙泊酚对大鼠海马脑片CA1区长时程增强的影响

目的观察不同浓度丙泊酚对离体大鼠海马脑片CA1区长时程增强(LTP)的影响。方法30张海马脑片分为五组,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别应用浓度为30、10和3μmolo/L的丙泊酚,Ⅳ组用脂肪乳,Ⅴ组不用药物作为对照。利用细胞外记录方式,以海马脑片CA1区群峰电位(PS)为观察指标,首先观察丙泊酚对CA1区基础传递的影响,待基线稳定后,记录高频刺激(HFS)后海马脑片CA1区PS的变化情况。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组应用丙泊酚后PS降低,在持续给药后30min恢复至基线。实施HFS后,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的PS较HFS前显著升高(P<0.05,P<0.01);而Ⅰ、Ⅱ组PS与HFS前相比差异无显著意义(P>0.05)。HFS后,Ⅰ组PS显著低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组(P<0.01),Ⅱ组PS也低于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组(P<0.05)。结论丙泊酚可以抑制大鼠离体海马脑片CA1区LTP的形成。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响.方法 培养并鉴定24 h新生SD大鼠肺微血管内皮细胞,取2～4代培养细胞,细胞密度5×105个/ml,培养至80%融合后,进行药物干预.第一部分实验分为5组(n=4):加入AngⅡ至终浓度分别为10-9 mol/L(Ⅱ组)、10-1 mol/L(Ⅲ组)、10-7mol/L(Ⅳ组)、10-6 mol/L(Ⅴ组),Ⅰ组不加入AngⅡ,24 h后采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.第二部分实验分为6组(n=4):加入AngⅡ至终浓度为10-7mol/L,分别在孵育即刻(Ⅰ组)、1 h(Ⅱ组)、6 h(Ⅲ组)、12 h(Ⅳ组)、24 h(Ⅴ组)、48 h(Ⅵ组)时,采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.结果 第一部分实验结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组Apelin mRNA表达上调,APJ mRNA表达下调,Ⅲ组～V组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调(P<0.05或0.01),与Ⅱ组比较,Ⅲ组～Ⅴ组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调,呈浓度依赖性(P<0.01).第二部分实验结果:Apelin mRNA在10-7mol/L AngⅡ孵育6 h内表达上调,孵育1 h时达高峰(P<0.05或0.01),孵育6 h后Apelin mRNA表达下调,且呈时间依赖性(P<0.01);而APJ mRNA在孵育12 h后呈时间依赖性持续下调(P<0.01).结论 AngⅡ呈浓度和时间依赖性地下调Apelin mRNA和APJ mRNA的表达,可能是其参与肺微血管内皮细胞损伤的发生机制.     

鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响

目的 探讨鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响.方法 雄性SD大鼠,体重250g～280 g,取鞘内置管成功的大鼠48只,随机分为6组(n=8):假手术组(S组)鞘内注射人工脑脊液(ACSF)10μl后,吸人1.4%异氟烷5 min,不制备模型;切口痛组(IP组)、加巴喷丁50μg组(G组)、吗啡2.5μg组(M1组)和吗啡5μg组(M2组)于制备切口痛模型前30 min分别鞘内注射ACSF10μl、加巴喷丁50μg、吗啡2.5μg和5μg;加巴喷丁50μg+吗啡2.5μg组(G+M1组)于制备模型前30 min鞘内注射加巴喷丁50μg和吗啡2.5μg.模型制备后2 h时测定术侧机械缩爪反射阈值(MWT)和热刺激缩爪反应潜伏期(TWL).结果 与S组比较,IP组、G组、M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),G+M1组和M2组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与IP组比较,G+M1组和M2组大鼠MWT升高,TWL延长(P＜0.05),G组和M1组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与G+M1组比较,G组和M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).结论 鞘内注射加巴喷丁可增强吗啡对切口痛大鼠的镇痛效应.     

吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖时PKCε膜转位的影响

目的 探讨吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)时蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位的影响.方法 成年近交系BALB/C小鼠40只,体重18～22 g,雌雄不拘,制备海马脑片,将脑片置入无糖无氧的人工脑脊液中,培养20 min后再置于正常人工脑脊液(nACSF)中培养(复氧复糖)2h,以建立小鼠海马脑片OGD/R模型.脑片随机分为5组(n=40),对照组(C组):在nACSF中培养4 h;吗啡预处理组(M组):在含吗啡3μmol/L的nACSF中孵育30 min后用nACSF洗脱,随后制备OGD/R模型;纳洛酮+吗啡预处理组(N+M组):在含纳洛酮50 μmol/L的nACSF中孵育30 min后,加入吗啡至3 μmol/L,孵育30 min,随后制备OGD/R模型;纳洛酮组(N组):在含纳洛酮50μmol/L的nACSF中孵育1h,随后制备OGD/R模型;OGD/R组:制备OGD/R模型.于脑片OGD/R期间测定PKCε膜转位情况和神经元存活情况.结果 与C组比较,其余各组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05或0.01);与OGD/R组比较,M组神经元存活率升高,膜相关蛋白中PKCε表达下调,胞溶蛋白中PKCε表达上调(P＜0.05),N+M组和N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,N+M组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05).结论 吗啡预处理诱导小鼠海马脑片缺血耐受的机制可能与抑制PKCε膜转位有关.     

咪唑安定和芬太尼对依托咪酯所致肌阵挛的影响

目的研究咪唑安定和芬太尼对依托咪酯所致肌阵挛的影响。方法全麻下行择期手术患者128例,根据麻醉诱导用药顺序和剂量的不同随机分为五组:Ⅰ组,咪唑安定0.05mg/kg、依托咪酯0.25mg/kg、芬太尼3μg/kg,22例;Ⅱ组,芬太尼3μg/kg、依托咪酯0.25mg/kg、咪唑安定0.05mg/kg,24例;Ⅲ组,咪唑安定0.05mg/kg、芬太尼3μg/kg、依托咪酯0.25mg/kg,32例;Ⅳ组,咪唑安定0.08mg/kg、依托咪酯0.25mg/kg、芬太尼3μg/kg,23例;Ⅴ组(对照组),依托咪酯0.25mg/kg、咪唑安定0.05mg/kg、芬太尼3μg/kg,27例。在静注依托咪酯后,观察并记录2min内肌阵挛阳性率及发生分级。结果五组肌阵挛阳性率分别为68.18%、41.67%、21.88%、21.74%、59.26%。与Ⅴ组比,Ⅲ、Ⅳ组肌阵挛阳性率及发生分级明显较低(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ组肌阵挛阳性率及发生分级差异则无统计学意义。结论依次采用咪唑安定、芬太尼、依托咪酯诱导可减低依托咪酯引起的肌阵挛发生。     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

ROS/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧簇(ROS)/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,随机分为9组(n=5),Ⅰ组(C组)常规心肌细胞培养,不予其他处理;Ⅱ组(AngⅡ6组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育6 h;Ⅲ组(AnsⅡ12组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育12 h;Ⅳ组(ArtsⅡ24组)给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;V组[N-乙酰-L半胱氨酸(NAC)+AngⅡ组]预先给予抗氧化剂NAC 5 mmol/L,2 h后给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅵ组(NAC组)仅给予NAC 5 mmol/L,孵育24 h;Ⅶ组(anti-ODN组)GADD153反义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmoFL AngⅡ,孵育24 h;Ⅷ组(mis-ODN组)GADDl53错义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅸ组(脂质体对照组)加入等容量转染试剂,孵育24 h.检测细胞活力、细胞内ROS产量、细胞凋亡率及GADD153蛋白表达水平.结果 与C组相比,AngⅡ6组、AngⅡ12组、AngⅡ24组细胞活力降低,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达升高,且呈时间依赖性(P＜0.05);与AngⅡ24组比较,NAC+AngⅡ组和anti-ODN组细胞活力升高,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达降低(P＜0.05).结论 AugⅡ通过增加ROS产量,诱导GADD153蛋白表达上调,从而导致心肌细胞凋亡的发生.     

O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺诱导LPS干预的大鼠心肌细胞HSP70表达中的作用

目的 探讨O位-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰在谷氨酰胺(Gln)诱导LPS干预的大鼠心肌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达中的作用.方法 出生48 h的SD大鼠,原代培养心肌细胞,随机分为6组,每组11瓶(1×106个,瓶):对照组(C组)加入双蒸水25 μl;Gln组加入Gln,终浓度5 mmol/L;LPS组加入LPS,终浓度4 μg/ml;Gin+LPS组依次加入Gln和LPS,Gin终浓度5 mmol/L,LPS 终浓度4 μg/ml;Gln+LPS+Alloxan组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂Alloxan,Gln和LPS终浓度与Gln+LPS组相同,Alloxan终浓度1 mmol/L;Gln+LPS+PUGNAc组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶抑制剂PUGNAc,Gln和LPS终浓度与Gln+LPS组相同,PUGNAc终浓度100 μmol/L.各组孵育6 h后测定心肌细胞存活率、O-GlcNAc和HSP70的表达水平.结果 各组大鼠心肌细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05);与C组比较,其余组心肌细胞0.GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05);与LPS组比较,Gln+LPS组和Gln+LPS+PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05);与Gln+LPS组比较,Gin+LPS+Alloxan组心肌细胞0-GlcNAc和HSP70的表达下调,Gln+LPS+PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05).结论 Gln诱导LPS干预大鼠心肌细胞HSPT0表达上调的机制可能与O-GlcNAc修饰有关.