水蛭、桃仁、黄芪及当归合剂对小鼠血吸虫性肝纤维化的影响

水蛭是中医治疗血栓及血液痹症常用的药物。本研究利用其行瘀解郁功能 ,水蛭与桃仁、黄芪及当归合剂 ,用于小鼠血吸虫性肝纤维化治疗 ,从抗氧化能力方面观察其治疗效果 ,为进一步研究提供实验依据。     

鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化效应的研究

鲨鱼软骨粉伍用“４２５”制剂,使成鲨鱼办骨粉合剂,用以研究感染日本血吸虫３ｗｋ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经口服用ＳＣＰ合剂后４ｗｋ诱导的抗血吸虫性纤维化效应及其。测定实验小鼠肝内血吸虫卵肉芽肿大小和纤维化程度,用ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清抗体ＩｇＧ及其亚类ＩｇＧ１水平;应用流式细胞仪测定小鼠脾脏Ｔ细胞亚群的均数和比值。     

湖北海棠叶总黄酮对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨湖北海棠叶总黄酮对日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化的保护作用。方法随机将未感染和感染日本血吸虫尾蚴昆明小鼠分成A～F6组。即未感染空白对照组（A）、模型组（B）、复方鳖甲软肝片阳性组（C）、湖北海棠叶总黄酮治疗高剂量[114mg（/kgd）]组（D）、中剂量[57mg（/kgd）]组（E）、低剂量[28.5mg（/kgd）]组（F）,每组10只。感染后第42天,C、D、E、F组均用吡喹酮驱虫治疗,500mg/（kgd）2日疗法,之后各组开始灌胃给药持续治疗60d,A组和B组生理盐水灌胃对照。实验结束处死小鼠,留取肝脏组织和血清,测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）含量,计算肝体指数,测定肝组织中羟脯氨酸（HYP）。苏木素伊红和Masson胶原纤维染色观察小鼠肝组织变性、虫卵肉芽肿与胶原沉积等病理改变。结果与A组相比,B、C、D、E、F组小鼠肝脏有明显虫卵肉芽肿形成、胶原沉积与肝纤维化,伴有不同程度肝细胞炎性损伤坏死。血清中ALT、AST、HA和肝组织中HYP含量均明显升高（P〈0.05或P〈0.01）。与B组相比,湖北海棠叶总黄酮高、中、低剂量组ALT、AST、HA和HYP含量及肝体指数均明显降低（P〈0.05或P〈0.01）,肝组织坏死与胶原沉积明显减轻,虫卵肉芽肿面积减小。结论湖北海棠叶总黄酮具有抗血吸虫性肝纤维化作用。     

核糖核酸对家兔日本血吸虫性肝纤维化病理及超微结构…

应用家兔日本血吸虫病模型，在不同阶段进行了肝内核糖核酸含量的测定和光镜，电镜观察肝组织相应的变化。结果显示感染血吸虫后，肝内核糖核酸含量减少，光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显增多，经核糖核酸治疗后，肝内核糖核酸含量增加的同期，肝组织病变明显减轻，电镜观察在核糖核酸减少时，贮脂细胞，枯否氏细胞增多。胶原纤维分布广泛，经核糖核酸治疗后，上述细胞及胶原纤维相应减少，提示核糖核酸对血吸虫性肝纤维     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

单性日本血吸虫成虫感染性小鼠肝纤维化研究北大核心CSCD

目的观察和评估单性日本血吸虫成虫感染小鼠出现肝纤维化病变风险。方法将40只小鼠随机分为双性感染组、单性雄虫组、单性雌虫组和未感染组,每组10只,分别经腹壁皮肤接触感染雌雄尾蚴、雄性尾蚴、雌性尾蚴和不含尾蚴的去氯水,感染尾蚴数为(40±1)条/只。双性感染组小鼠感染周期为6周,其余3组为36周。取小鼠肝脏,观察肝脏大体形态;经HE和Masson染色镜下观察小鼠肝脏病理变化和胶原纤维增生情况;测定肝脏胶原纤维特有的羟脯氨酸含量;应用荧光定量PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、TGF-β1、Col1、Col3 mRNA和蛋白表达水平。结果与无感染组比较,单性雄虫组小鼠肝脏颜色发黑,肝组织内有大量色素沉积,周围有炎性细胞浸润,色素沉积处有胶原纤维;单性雌虫组小鼠肝脏大体形态与无感染组相似,病理变化和胶原纤维增生明显轻于单性雄虫组。单性雄虫组、单性雌虫组、双性感染组和未感染组小鼠的肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.209±0.033)、(0.187±0.034)、(0.194±0.04)和(0.122±0.016)μg/mg,单性雄虫组、单性雌虫组均显著高于未感染组(P均<0.05),与双性感染组均无明显差异。单性雄虫组小鼠肝脏Col1(2.4±0.91)和α-SMA(0.22±0.1)mRNA表达都明显高于未感染组[Col1(1.05±0.29)、α-SMA(0.08±0.01)](P均<0.05),Col1(2.4±0.91)(P<0.01)和TGF-β1(4.28±2.58)(P<0.05)mRNA表达均显著高于双性感染组;单性雌虫组各基因mRNA表达水平与未感染组相比均无显著差异,Col1(1.34±0.18)和TGF-β1(3.55±1.34)mRNA表达水平也显著高于双性感染组[Col1(0.84±0.14)、TGF-β1(0.31±0.11)、α-SMA(0.36±0.11)、Col3(2.15±0.61)](P均<0.01),α-SMA(0.17±0.11)(P<0.05)和Col3(0.51±0.23)(P<0.01)mRNA表达则显著降低。单性雄虫组小鼠肝脏各基因蛋白表达水平与未感染组比较均无明显差异;单性雌虫组TGF-β1(1.03±0.39)蛋白表达量显著低于未感染组TGF-β1(1.78±0.29)(P<0.05)。结论单性血吸虫成虫会导致小鼠肝脏炎症细胞浸润,胶原纤维增生,羟脯氨酸增加、部分肝纤维化分子指标mRNA表达上调等肝纤维化特征和向肝纤维化演变趋势,并且单性雄虫比单性雌虫更易引发小鼠肝脏病变。     

鲨鱼软骨粉合剂抗血吸虫性肝纤维化的效应

目的:探讨鲨鱼软骨粉(SCP)联合“425”制剂诱导的抗血吸虫病及抗血吸虫性纤维化效应。方法:BALB/c小鼠感染日本血吸虫后4w,灌服SCP合剂,服药后3w剖杀;胸主动脉灌注冲虫,计算减虫率、减卵率;制备肝石蜡连续切片,测定肉芽肿大小及观察纤维化程度;ELISA检测血清IgG和IgG_1抗体。结果:SCP合剂大剂量(90mg)组1小鼠减虫率50％,显著高于SCP合剂小剂量(70mg)组Ⅱ的33.3%、单用SCP组Ⅲ的23.3%和单用“425”制剂组Ⅳ的32.0％(P<0.05);组Ⅰ雌虫子宫虫卵数(平均75.3±18.51)显著低于组Ⅱ(102.2±11.91)、组Ⅲ(108.5±10.50)、组Ⅳ(115.8±10.83)和感染对照组(139.0±27.7)者(P<0.05);组Ⅰ小鼠肝虫卵减少率为81.93%,显著低于组Ⅱ～Ⅳ的47.19％、44.4%和28.15％(P<0.01);组Ⅰ～Ⅳ小鼠肝虫卯肉芽肿(SEG)大小均显著小于感染对照组者(P<0.001),组I小鼠肝SEG大小显著小于组Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ者(P<0.05),而组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ小鼠SEG大小间无显著性差异(P>0.05);组Ⅰ、Ⅲ小鼠肝SEG内纤维化消失,而组Ⅱ、Ⅳ小鼠肝SEG内可见纤维组织,但感染对照组SEG内显示重度纤维化。用药后3w组Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ小鼠血清IgG和IgG_1水平均显著高于组Ⅲ和组Ⅴ者(P<0.01),而前3组间和后2组间抗体水平无显著性差异。结论:SCP合剂对日本血吸虫具有明显的减虫、减卵和     

ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后HSCs活化效应及对肝纤维化的影响

目的 观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后原代肝星状细胞（HSCs）的活化效应,探讨ICOSL/ICOS信号介导HSCs活化在血吸虫病肝纤维化形成中的作用.方法 建立ICOS-Tg小鼠及野生型小鼠日本血吸虫模型,通过肝脏酶灌注法和密度梯度离心法分离感染前（0周）和感染后（4～9周）的小鼠原代HSCs,运用台盼蓝拒染法鉴定分离的原代HSCs成活率;应用其在328 nm波长紫外激发光下自发荧光特性以及在肝细胞中其特异性表达神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）鉴定分离的原代HSCs纯度;培养7d后,采用SYBR染料法实时荧光定量PCR检测原代HSCs中TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SMA mRNA的表达变化.结果 分离的原代HSCs纯度达到90％,其成活率为95％.ICOS-Tg小鼠肝HSCs中α-SMAmRNA表达水平即HSCs的活化程度在感染后6、9周显著高于同时期野生型小鼠（P＜0.01）.ICOS-Tg小鼠肝HSCs中TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平亦高于同时期野生型小鼠的水平,特别是在感染后6、9周呈显差异有统计学意义（P＜0.01～0.05）.结论 与野生型小鼠相比,感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠肝HSCs活化增强,显著上调TGF-β1 mRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及α-SMA mRNA的表达,提示在ICOS-Tg小鼠,ICOSL/ICOS信号的增强可明显上调HSCs活化促进肝纤维化的形成.     

核糖核酸对家兔日本血吸虫性肝纤维化病理及超微结构变化的影响

应用家兔日本血吸虫病模型，在不同阶段进行肝内核糖核酸含量的测定和光镜、电镜观察肝组织相应的变化。结果显示感染血吸虫后，肝内核糖核酸含量减少。光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显增多。经核糖核酸治疗后，肝内核糖核酸含量增加的同期，肝组织病变明显减轻。电镜观察在核糖核酸减少时，贮脂细胞、枯否氏细胞增多。胶原纤维分布广泛，经核糖核酸治疗后，上述细胞及胶原纤维相应减少。提示核糖核酸对血吸虫性肝纤维化的形成有直接影响，核糖核酸可以减轻病变程度，阻抑肝纤维化的进展。     

一氧化氮对感染日本血吸虫小鼠肝脏纤维化程度的影响

目的　研究一氧化氮 (NO)对感染日本血吸虫小鼠早期肝脏纤维化的影响。方法　 NMRI小鼠感染日本血吸虫后第 2 3天起 ,连续用诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)的抑制剂氨基胍(Am inoguanidine,AMG)处理小鼠 ,同时设未经抑制的对照组 ,分别在感染后第 38、4 5天观察小鼠肝脏的病理变化。天狼猩红染色 -偏振光显微镜观察并结合图像分析的方法 ,分析肝脏中 、 型胶原的动态变化 ;化学显色法检测肝脏匀浆中能间接反映肝脏纤维化程度的羟脯氨酸的浓度。结果　感染后 38d,肝脏中 、 型胶原的增生程度及 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,但羟脯氨酸的含量与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;感染后 4 5 d,肝脏中 型胶原的增生程度和 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,AMG处理组中羟脯氨酸的含量较对照组高 (P<0 .0 5 )。结论　 NO可抑制日本血吸虫感染小鼠肝脏早期纤维化     

日本血吸虫虫卵肉芽肿与肝纤维化免疫病理及调节研究初步报告

为探讨血吸虫病肝纤维化的免疫学发病机理，对感染血吸虫的新西兰兔进行了动态观察。在感染后4、6、8、10、12、16、20、24、28wk，分别取肝组织活植，用定量RT－PCR法检测肝组织的细胞因子mRNA水平，并作形态学与免疫组化检查。结果认为肝脏内多种细胞因子mRNA水平与虫卵内芽肿变化呈平行关系，感染4wk后即有上升，以TGF-β_1上升最明显，在感染后第8wK达到峰值，随之下降，从12wk至16wk下降最明显。TGF-β_1和IFN－γmRNA水平的比值随肝纤维化进展而变大，可能具有较大的实用价值。本研究提示日本血吸虫虫卵肉芽肿与肝纤维化不仅具有不同的细胞学基础，而且其免疫调节作用也不同。     

血吸虫病小鼠肝纤维化肝组织中Fas/FasL的表达

目的 探讨Fas／FasL在血吸虫病肝纤维化肝组织中的表达及意义。 方法 采用免疫组化技术检测血吸虫病小鼠肝纤维化肝组织中Fas／FasL的表达,并对照经吡喹酮、已酮可可碱治疗前后其表达的变化,分析其意义。 结果Fas以肝细胞浆表达为主,FasL主要在浸润淋巴细胞浆、肝细胞核表达。经吡喹酮及高剂量已酮可可碱治疗后其肝组织Fas／FasL表达明显减少(P<0.01)。 结论 血吸虫感染可诱导肝细胞Fas／FasL的表达,增强Fas／FasL途径介导的肝细胞凋亡,这一机制在血吸虫病肝纤维化的发病中可能起重要作用。吡喹酮及高剂量已酮可可碱可明显下调Fas／FasL的表达,抑制肝细胞凋亡,改善肝功能。     

日本血吸虫病所致肝纤维化化疗后转归的观察

观察日本血吸虫所致肝纤维化患者经有效病原学治疗后，肝纤维化的转归。方法对３７９例经粪孵确诊的病例采用超声检测评价肝脏纤维化程度，从中随机抽取５０例作为对照组，３２９例作为实验组，实验组给予首次吡喹酮４０ｍｇ／ｋｇ顿服普治，并于每年６月及１２月两次复查，阳性者１２例进行复治，连续治疗３年，对照组在首次及每年１２月均给予安慰剂治疗。超声检测于每年６月及１２月各检测１次，治疗及超声检测均采用双盲法。结果     

日本血吸虫成虫抗原合并蚯蚓抗原对小鼠胸腺淋巴细胞及亚群的影响

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经可溶性日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）或／和可溶性蚯蚓抗原（ＳＥＷＰ）免疫后,观察、计数其胸腺Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞、Ｌ３Ｔ４细胞以及Ｌｙｔ２细胞。结果显示,ＳＷＡＰ免疫组Ｌ３Ｔ４细胞明显增加（Ｐ＜０．０５）;ＳＥＷＰ免疫组４个指标则均无明显变化（Ｐ＞０．０５）;ＳＷＡＰ与ＳＥＷＰ混合制剂免疫组Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞以及Ｌ３Ｔ４细胞均显增加（Ｐ＜０．０５）。相关分析表明：ＣＤ＋４Ｔ细胞（即Ｌ３Ｔ４细胞）在ＳＷＡＰ所诱导的保护性免疫力中可能起重要作用,而ＳＥＷＰ存在细胞免疫以外的其它可能保护性免疫机制,但ＳＥＷＰ与ＳＷＡＰ有明显的协同作用     

吡喹酮早期治疗对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响

感染日本血吸虫尾蚴的小鼠分别于感染后35d(PQT_1组)和45d(PQT_2组)用治愈剂量吡喹酮治疗。观察感染后45～115d的肝脏肉芽肿的体积变化。结果:PQT_1组治后10d不能或仅形成很小的虫卵肉芽肿,体积较对照组缩小73.01％,至115d肉芽肿体积缩小98.55％;PQT_2组治疗前肉芽肿体积与对照无明显差别,治后2周肉芽肿缩小43.20％,至115d肉芽肿缩小95.65％。认为吡喹酮不但可以抑制虫卵肉芽肿的形成,而且可以限制已形成的肉芽肿的进一步发展。     

吖啶诱变剂ICR-170致弱日本血吸虫尾蚴诱导的保护性免疫效应观察

为了观察吖啶诱变无产卵能力的血吸虫是否能诱生抗感染的保护性免疫力,用 １０ μｇ／ｍ ｌ吖啶诱变剂 Ｉ Ｃ Ｒ１７０ 致弱日本血吸虫尾蚴作免疫原,免疫 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｎ 小鼠两次,分别于初次免疫后６、８、１０ ｗ ｋ 用正常尾蚴作攻击感染。结果免疫鼠成虫减少率为６８．９％ ,肝组织虫卵减少率为７４．９％ 。动态观察显示,初次免疫后６ ｗ ｋ 攻击感染的减虫率最高,减卵率高峰在６～８ ｗ ｋ。表明诱变剂 Ｉ Ｃ Ｒ１７０ 致弱日本血吸虫尾蚴发育的变异成虫具有较高的免疫原性,可诱导较高的抗攻击感染的保护性免疫力。     

日本血吸虫感染对小鼠肝药物代谢酶的影响

本文观察了日本血吸虫感染对小鼠肝药物代谢酶的影响。结果,感染20、40和60条血吸虫尾蚴6wk的小鼠,其成巴比妥钠的催眠时间分别为53±9、100±64和172±93min,表明随感染度的增加而明显延长。体外实验观察到各感染度小鼠的肝苯胺羟化酶(Aniline hydroxylase,AH)、氨基比林N-脱甲荃酶(Aminopyrine N-demethylase,APD)的活性和细胞色素P-450(Cy-tochrome P-450)含量均明显降低。即使相同感染度不同病程也显示不同差异,感染30条尾蚴8wk小鼠的肝AH、APD活性和P-450含量比感染4wk小鼠明显降低,分别为对照的32.7％、13.7％和7.7％。说明日本血吸虫感染能明显降低小鼠肝药物代谢酶活性,其影响程度随感染度和病程不同而呈现明显差异。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,连续３次,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天,ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％,雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天,ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％,死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效,为一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子     

日本血吸虫感染小鼠组织内的抗原,抗体定位

应用间接荧光抗体试验(IFAT)检测小鼠感染血吸虫后肝、肠内抗原,结果感染后4wk未检出抗原,6wk抗原水平显著升高,10—12wk达到高峰、其几何均数倒数分别高达512和483。组织内虫卵肉芽肿的病变,亦最为显著,而肝内虫卵肉芽肿的直径显著大于肠内的。用直接荧光抗体试验(DFAT)及IFAT测定小鼠感染血吸虫后肝、肠组织内抗体,结果在感染6wk后,三种抗体(IgG、IgM和IgA)均达低水平,10—12wk均显著上升,而肝、肠组织内IgG抗体则非常显著地高于IgM和IgA的。提示血吸虫虫卵肉芽肿的免疫应答,主要是IgG抗体。