外源性重组S100A6蛋白对5株转化细胞系的增殖、迁移能力及β-catenin水平的影响

目的:探讨S100A6对5种转化细胞系株(HEK293、9HTE、CHO、MEF和C3H10T1/2)的增殖、迁移能力和β-catenin水平的影响.方法:通过转化质粒pMoluc-GST-hS100A6到大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组S100A6蛋白,为后续实验提供材料;MTT法检测细胞增殖.细胞划痕和Transwell法检测细胞迁移,免疫细胞化学法及Western-blotting检测β-catenin表达水平.结果:①通过IPTG诱导表达,从大肠杆菌中收获了高纯度重组S100A6(GST-S100A6);②外源性重组S100A6对作为阳性对照的肿瘤细胞系--人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移均有抑制作用(P<0.05),而对5株转化细胞系的增殖及迁移均无显著影响(P>0.05);③免疫细胞化学法和Western-blotting-致揭示重组S100A6可上调5株转化细胞系的B-catenin水平(P<0.05).结论:S100A6对5株转化细胞系的增殖、迁移无明显影响,但可上调此5株转化细胞系Wnt/β-catenin水平.     

β-catenin降低外源性hS100A6对骨肉瘤细胞的抑制作用

目的 研究外源件hS100A6抑制骨肉增细胞作用与Wnt/β.catenin信号途径的关系.方法 用携带人β-catenin及其siRNA基因的重组腺病毒Adβ-catenin和AdSiβ-catenin分别上调和下调MG63和U2OS细胞中β-catenin水平,再用重组hS100A6处理这些细胞,然后通过MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化.结果 ①外源性hS100A6抑制2株骨肉瘤细胞的增殖(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对这2株细胞的增殖抑制作用(P<0.05);②外源性hS100A6促进2株骨肉瘤细胞的凋亡(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别增强和减弱hS100A6对这2株细胞的促凋亡作用(P<0.05);③外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞株MG63的迁移(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对MG63的迁移抑制作用(P<0.05).结论 β-catenin负性调节hS100A6对骨肉瘤的抑制作用;hS100A6对骨肉瘤的抑制作用可能经由Wnt信号途径及其他信号途径共同调控.     

钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用

目的研究钙结合蛋白S100A2对Wnt／β-catenin信号途径活性的影响,并探讨其可能的机制。方法原核诱导表达GST-hSl00A2,经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCT116的培养液中,Westernblot检测细胞中β-catenin含量的变化;荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin／TCF4活性的影响;以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞,GST—Pulldown／Westernblot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用。结果S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-catenin／TCF4活性增强;S100A2分别与β-eatenin和GSK-313之间存在相互作用,而与DVL和Axin之间则未发现相互作用。结论S100A2可以上调Wnt／β-catenin信号途径的活性,其机制可能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用。     

S100A8/A9通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌的侵袭迁移

目的 研究外源性钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法 分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法(Western blot)检测β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-25 48 h后β-catenin的表达;加入20μg/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK-1),Western blot和实时定量荧光PCR(qPCR)检测β-catenin的表达;采用Transwell实验比较正常对照组(Control组)、添加S100A8/A9蛋白组、加入DKK-1组、加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组的细胞侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)和细胞周期蛋白D(cyclinD1)的表达。结果 S100A8、A9能激活Wnt/β-catenin通路,与S100A8和S100A9分别培养相比,共...     

hS100A6 inhibits proliferation, induces apoptosis and up-regulates Wnt/β-catenin activity in ovarian cancer cell lines HO8910 and HO8910 PM

目的 研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响.方法 通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响.结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P＜0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的 凋亡(P＜0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位.结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径.     

hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910 PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性

目的研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响。方法通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化;Hoechst检测细胞凋亡的变化;提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响。结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P<0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的凋亡(P<0.05);Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位。结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径。     

依他尼酸联合顺铂化疗促肺癌A549细胞凋亡的作用及机制研究

目的 探讨依他尼酸(ethacrynic acid,EA)杀伤肺癌A549细胞球的作用及机制研究.方法 无血清培养基中培养A549细胞球,应用Western blot检测CD133、SOX2、EpCAM和ABCG2的蛋白表达水平.应用l、2、5、10、20 mg/mL的浓度顺铂(cisplatin,DDP)分别处理A549及细胞球48 h,用MTT检测48 h内细胞的存活率.应用比色法检测10、50、100、200 μmol/L EA对A549细胞球中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性的抑制作用.应用流式细胞术、Western blot、Real-time-PCR、相差显微镜观察检测200 μmol/L EA处理A549细胞球前后ROS水平、细胞成球能力、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白以及β-catenin启动子活性的变化情况.应用β-catenin腺病毒感染A549细胞球后,再用200 μmol/L EA的处理A549细胞球,利用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin S、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的变化,并用MTT检测A549细胞球增殖的抑制作用.结果 成功培养出悬浮的A549细胞球,其高表达肿瘤干细胞标志物CD133、SOX2、EpCAM以及耐药相关蛋白ABCG2,并可耐受不同浓度DDP的杀伤作用.200 μmol/L EA处理A549细胞球后ROS水平明显升高,而GST活性、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的表达、β-catenin的启动子活性、A549细胞球的成球能力显著下降,并且200 μmol/L EA联合5 mg/mL DDP可增强对抑制A549细胞球增殖的作用和增加细胞凋亡的水平(P＜0.05).过表达β-catenin后,200 μmol/L EA对β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的抑制作用较空载体组显著减弱.此外,过表达β-catenin可显著缓解200 μmol/L EA联合5 mg/mLDDP对A549细胞球的增殖抑制作用.结论 EA通过抑制GST活性和β-catenin水平,发挥抑制A549细胞球增殖和干性,促进其凋亡的作用.EA可望成为治疗肺癌及肺癌干细胞的药物.     

S100A4上调表达对HBL-100和MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨S100A4对人乳腺上皮细胞HBL-100和人乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移、侵袭和凋亡以及对这两种细胞中的Wnt/β-catenin及Wnt/JNK信号途径的影响.方法 用表达S100A4的重组腺病毒(AdS100A4)感染细胞,采用MTT、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和Hoechst染色分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡活性的变化;同时通过PCR和Western blot检测S100A4对两种细胞中Wnt/β-catenin及Wnt/JNK信号途径的影响.结果 (1)HBL-100和MCF-7细胞在第4天的增殖分别增加53.3％和59.1％ (P ＜0.05);24 h的划痕愈合率分别增加73.6％和64.8％(P＜0.05);S100A4对HBL-100的穿膜细胞数无明显影响(P＞0.05),但使MCF-7的穿膜细胞数增加1倍(P＜0.05);HBL-100和MCF-7细胞在48 h的凋亡率分别减少约30％和36％(P＜0.05);(2)感染AdS100A4后的HBL-100和MCF-7细胞中β-catenin较GFP组分别增加49％和55％(P＜0.05);尽管两种细胞中t-GSK3β无显著改变,但是其p-GSK3β却较GFP组分别增加73％和55％(P＜0.05),c-Myc的表达量分别增加38％和30％ (P ＜0.05);(3) S100A4对HBL-100中的t-JNK、p-JNK和c-Fos的mRNA以及MCF-7细胞的t-JNK的水平均无影响,但是,却致MCF-7中的p-JNK增加39％(P＜0.05),c-Fos的mRNA增加32.3％ (P ＜0.05).结论 S100A4可促进HBL-100和MCF-7细胞的增殖、迁移,并抑制这两种细胞的凋亡;增强MCF-7细胞的侵袭能力.S100A4可增强HBL-100和MCF-7细胞中的Wnt/β-catenin信号途径活性以及MCF-7细胞中的Wnt/JNK信号途径活性.     

S100A8对大鼠肺泡巨噬细胞炎性因子释放水平的影响

目的:探讨S100A8 siRNA对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎症介质释放水平的影响.方法:构建S100A8 siRNA载体,利用脂质体LipofectamineTM 2000转染NR8383细胞,荧光定量PCR检测S100A8基因的沉默效率.不同浓度(0.1～10μg/mL)的脂多糖刺激S100A8沉默组和阴性对照组细胞2 h,酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度.结果:S100A8 siRNA转染至NR8383细胞后,S100A8 mRNA的表达降低(P<0.05).随着脂多糖刺激浓度增加,S100A8沉默组和阴性对照组细胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α浓度均逐渐增加,各浓度组与0μg/mL组比较,差异有统计学意义(P<0.05);各浓度组之间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).以相同浓度脂多糖刺激S100A8沉默组和阴性对照组细胞,阴性对照组细胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α浓度均高于S100A8沉默组(P<0.05).结论:S100A8 siRNA通过下调NR8383细胞中S100A8基因的表达,减轻了脂多糖诱导的炎症介质的释放,有望作为炎症疾病治疗的潜在靶点.     

β-catenin反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖和紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨β-catenin反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,及其与紫杉醇(paclitaxel)联合时对MCF-7细胞的抑制作用.方法 不同浓度的β-catenin ASODN和错义对照(SODN)作用于MCF-7细胞48 h后,测定细胞凋亡比例.以终浓度为10 μmol/L的ASODN、SODN和空白对照培养细胞10 d后,计算各自的集落形成率.按不同组合分别在培养细胞中加入ASODN、SODN、紫杉醇,于培养24、48 h用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测β-catenin mRNA 表达,培养72 h后MTT法计算各组细胞存活率.结果 MCF-7细胞凋亡比例随β-catenin ASODN作用浓度升高而略有升高,与SODN、空白对照组比较差异有显著性意义(均P<0.05).ASODN组平均集落形成率(12.5%)与SODN组(34.0%)和空白对照组(37.0%)差异有统计学意义(均P<0.05).MTT实验和荧光定量RT-PCR结果显示,ASODN联合紫杉醇组与单用ASODN组或单用紫杉醇组比较,细胞生长抑制率明显增高,β-catenin mRNA表达相对值明显降低,均存在显著性差异.结论 β-catenin ASODN抑制MCF-7细胞增殖,促进凋亡,并且同紫杉醇联合作用时显著抑制细胞生长和β-catenin mRNA 表达.     

姜黄素诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的实验研究

目的 探讨姜黄素对人骨肉瘤 U2OS 细胞凋亡的诱导作用及其分子机制,为姜黄素应用于骨肉瘤治疗提供实验依据.方法 以不同浓度的姜黄素处理骨肉瘤 U2OS 细胞,应用 MTT 法检测细胞活性,用 Bliss 法计算 IC50 值,通过流式细胞术和 Hoechst 33258 荧光染色检测细胞凋亡,比色法检测 Caspase-3、8、9活性.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L的姜黄素明显抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并呈剂量依赖关系,48 h的 IC50 值为 21.63 μmol/L;20μmol/L 姜黄素作用 12、24、48 h 诱导 U2OS 细胞的凋亡率分别为:12.5%、23.1%和46.2%,细胞出现明显的凋亡特征性形态变化;姜黄素处理 U2OS 细胞 48 h后 Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活 Caspase 级联活化而抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并诱导其凋亡.     

抑肽酶预处理对凝血酶诱导的星形细胞凋亡的影响

目的观察不同剂量抑肽酶预处理对凝血酶诱导的星形细胞损伤和凋亡影响.方法体外原代培养星形细胞后,随机数字表法分为6组:C(等量培养基对照组),A0(抑肽酶0 U/ml预处理),A100(抑肽酶100 U/ml预处理),A300(抑肽酶300 U/ml预处理),A500(抑肽酶500 U/ml预处理),A700(抑肽酶700 U/ml预处理),制备凝血酶体外作用模型,采用流式细胞仪和AO-EB染色法对凝血酶100 U/ml浓度下不同浓度的抑肽酶预处理后细胞凋亡情况进行检测.结果 A0和A100及A100和A300间均有非常显著的差异(P<0.01),A300和A500间有显著性差异(P<0.05),A500和A700间则没有显著性差异.AO-EB染色部分细胞也呈现典型的凋亡表现,结果和流式细胞仪结果相吻合.结论抑肽酶对凝血酶诱导的星形细胞凋亡有明显的抑制作用.     

氯胺酮对NMDA诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响

目的:观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡、Bc l-2及白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化的影响。方法:取新生2~3天W istar大鼠T11-L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养、鉴定。将细胞随机分6组:对照组(C组),NMDA组(N组),氯胺酮组(K组),及NMDA+不同浓度氯胺酮组(0.1、1.0、10mmol/L,标记为NK1~NK3组),检测各组IL-1β和TNFα浓度及Bc l-2平均光密度(OD)值,并观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:N组和NK1组细胞发生大量凋亡(p<0.01),Bc l-2表达阴性,其OD值较低(P<0.01),IL-1β和TNF-α浓度明显上升(p<0.01),两组间比较无显著差异(P>0.05)。NK2组细胞凋亡显著减少(p<0.01),Bc l-2强阳性表达,其OD值升高(p<0.01),IL-1β和TNFα浓度低(p<0.01);NK3组细胞几乎全部死亡,未能上机检测凋亡,IL-1β和TNF-α浓度升高(p<0.05)。结论:1 mmol/L氯胺酮可增强Bc l-2蛋白表达,显著抑制NMDA受体激活诱导星形胶质细胞的凋亡,并抑制IL-1β和TNF-α的分泌。     

重组改构人肿瘤坏死因子联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生长的抑制作用

目的:研究重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)单用及与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人胃癌BGC-823细胞系生长的抑制作用及途径.方法:细胞培养24 h后随机分为4组(A组为空白对照组,B组为rmhTNF组,C组为5-FU组,D组为rmhTNF 5-FU组),加入相应药物后继续培养72 h,应用TUNEL法检测4组细胞的凋亡率,免疫细胞化学法检测4组细胞中细胞色素C(Cyt-C)的表达,流式细胞仪检测4组细胞的周期分布和凋亡率.结果:①TUNEL结果显示联合用药组细胞凋亡率显著高于其他各组,各药物处理组显著高于对照组(P<0.05).②免疫细胞化学法结果显示联合用药组细胞胞浆Cyt-C释放显著高于其他各组,各药物处理组显著高于对照组(P<0.05).③流式细胞仪结果显示联合用药组S期细胞明显减少,凋亡率增加(P<0.05).结论:rmhTNF可诱导BGC-823细胞凋亡,增加5-FU对细胞的杀伤作用,其作用机制与细胞凋亡的线粒体途径有关.     

血清S100β蛋白、NSE、CRP及IL-6水平与老年术后认知功能障碍的关系分析

目的:探讨血清S100β蛋白、神经元特异性烯醇酶(NSE)、C反应蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)水平与老年术后认知功能障碍的相关性。方法:选取于本院择期手术的老年患者119例,在术前1 d和术后1、3、7 d进行简易智能状态检查(MMSE),根据术后1 d的评分将患者分为POCD组和非POCD组,对所有患者于术前1 d及术后1、3、7 d的S100β蛋白、NSE、CRP及IL-6变化情况进行检测和分析。结果:38例患者纳入POCD组,81例纳入非POCD组。术后7d时MMSE评分,POCD组仍低于术前1 d水平(P<0.05)而非POCD组可恢复至术前1 d水平(P>0.05);POCD组术后1、3、7 d时S100β蛋白、NSE以及CRP、IL-6浓度均显著高于该组术前1 d水平及相同时间点的非POCD组水平(P均<0.05),非POCD组患者术后1、3 d时S100β蛋白、NSE、CRP和IL-6浓度显著高于术前1 d(P<0.05),但术后7 d时S100β蛋白、NSE浓度可恢复至术前1 d水平(P>0.05);POCD组术后1 d时的MMSE评分与S100β蛋白、NSE及IL-6均呈负相关(P<0.05),与CRP水平无相关性(P>0.05)。结论:老年患者术后血清S100β蛋白、NSE、CRP、IL-6浓度升高与POCD的发生有关,且S100β蛋白、NSE以及IL-6水平与MMSE评分呈负相关,早期监测上述炎性因子可对POCD的预防、病情判断和早期干预提供依据。     

腺病毒介导的干扰素-β基因对SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的:观察腺病毒介导的干扰素-β(IFN-β)基因能否诱导人肝癌SMMC-7721细胞体外凋亡.方法:用HEK293A细胞扩增重组腺病毒介导的人干扰素-β(AdhlFN-β)基因,经纯化后用空斑形成实验法测定病毒滴度;分别用AdhIFN-β基因和重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白(AdGFP)基因转染人肝癌SMMC-7721细胞.并设空白对照组.应用免疫细胞化学方法检测hIFN-β基因的表达,应用Hochest 33342荧光染色法和流式细胞术检测转染重组AdhIFN-β基因组、空载体组和对照组细胞的凋亡情况.结果:重组腺病毒经HEK293A细胞扩增、纯化后滴度可达2×1011 pfu/mL,且40 MOI的腺病毒即可获得95%以上的转染效率;免疫细胞化学法检测到外源性hIFN-β基因在SMMC-7721细胞中的蛋白表达产物;荧光染色法检测到重组AdhIFN-β基因组细胞明显发生了凋亡,而重组AdGFP组和空白对照组细胞凋亡不明显;流式细胞术检测到转染重组AdhIFN-β基因组细胞凋亡率[(28.27±4.21)%]高于转染空载体组[(2.08±0.89)%]和对照组[(1.53 4±0.70)%](F=377.625,P<0.001),后2组细胞凋亡率比较差异无统计学意义.结论:腺病毒介导的hIFN-β基因能诱导体外肝癌细胞发生凋亡.     

奥拉西坦通过Wnt/β-catenin减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的影响及分子机制。方法 2017年5月—2018年12月在上海市第六人民医院南院中心实验室进行实验,选择成年雄性SD大鼠并随机分为假手术组(n=10)、I/R组(n=10)、奥拉西坦组(n=10),后2组采用线栓法建立脑I/R模型,奥拉西坦组给予奥拉西坦200 mg/kg腹腔注射,连续7 d。比较3组间神经功能缺损评分、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)及星形胶质原蛋白(S100B)含量、脑组织中细胞凋亡率及凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因表达的差异。结果 I/R组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达水平均明显高于假手术组,脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Wnt1、Wnt3、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平均明显低于假手术组(P<0.05或0.01);奥拉西坦组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bax、CytC、Caspase-3、GSK-3β的表达水平均明显低于I/R组,脑组织中Bcl-2、Wnt1、Wnt3、β-catenin的表达水平均明显高于I/R组(P<0.05或0.01)。结论奥拉西坦能够减轻大鼠脑I/R损伤的程度,且该作用与Wnt/β-catenin通路的激活有关。     

去甲斑蝥素调节Hippo/YAP信号通路对U251胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究去甲斑蝥素（NCTD）对U251胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法 用不同浓度的NCTD处理U251细胞后,MTT法检测NCTD对U251细胞的细胞毒性。体外培养U251细胞,分为正常对照（NC）组、MST1/2抑制剂XMU-MP-1组（5μmol/L）、25μmol/L NCTD组、50μmol/L NCTD组、100μmol/L NCTD组、NCTD+XMU-MP-1组（100μmol/L NCTD+5μmol/L XMU-MP-1）。给予相应的干预后,细胞克隆形成实验检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测Hippo/Yes相关蛋白（YAP）和Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白[哺乳动物Ste-20样激酶（MST）1/2、p-MST1/2、大型肿瘤抑制因子（LATS）1/2、p-LATS1/2、YAP、p-YAP、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-catenin]的表达。结果 与NC组相比,25、50、100、200μmol/L N...     

NGX6对Wnt/β-catenin通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响

目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制.方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)及pCMV-myc-NGX6于COS-7细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测转染NGX6前后TCF-4的转录活性.(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6单独转染COS-7细胞及结肠癌SW620细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测TCF-4的转录活性,并采用Western blot的方法检测两组细胞核内β-catenin及TCF-4的表达.结果:(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT);(2)pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)与pCMV-myc-NGX6共转染COS-7细胞较pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)单独转染时TCF-4荧光素酶活性明显下降(P＜0.05);(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6转染COS-7及SW620细胞后TCF-4荧光素酶活性较空白质粒转染组下降(P＜0.05);(4)NGX6转染COS-7及SW620后核内β-catenin及TCF-4的表达下降.结论:NGX6对结肠癌中Wnt/β-catenin通路的β-catenin/TCF/LEF转录活化具有负性调节作用,其作用机制可能与NGX6抑制β-catenin的核转位有关.     

结肠癌中S100A2的表达及其与Wnt/β-catenin通路的相关性

目的探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性。方法采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情况,分析它们与结肠癌临床病理参数的关系,进一步采用Pearson等级相关分析其相关性。结果①免疫组化显示S100A2和β-catenin主要定位于癌细胞核和(或)细胞质,而pGSK-3β主要定位于癌细胞质;②Western blot结果显示S100A2、β-catenin和pGSK-3β在结肠癌组织中均高表达,明显高于癌旁正常组织(P<0.01),三者在结肠癌DukesC+D期中的表达明显高于A+B期(P<0.01),在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01);③S100A2分别与β-catenin、pGSK-3β的表达呈明显正相关(r=0.637,P<0.01;r=0.626,P<0.01)。结论 S100A2可能通过调节Wnt/β-catenin通路关键分子而参与结肠癌的发生、发展。