核因子—κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子—α表达中的作用

目的 观察内毒素(LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AM)中核因子—κB(NF—κB)活性的影响，探讨NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子—α(刀NF—α)中的作用。方法体外观察LPS刺激大鼠AM中NF—κB活性的动态变化，应用圈套策略观察NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达刀NF—α中的作用。结果LPS刺激可使大鼠AM内NF—κB明显活化，并与LPS剂量正相关；抗体超迁移率实验结果显示p50、p65参与了NF—κB的活化；NF—κB的圈套硫代寡核苷酸(S—ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF—α，但不能完全阻断LPS诱导的TNF—α表达。结论 NF—κB(p50／p65)在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用，LPS刺激大鼠AM表达TNF—α受NF—κB调控，但其他核转录因子可能也在TNF—α的表达中发挥重要作用。     

核因子-κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子-α表达中的作用

目的　观察内毒素 (LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophages,AM)中核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,探讨NF -κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)中的作用。　方法　体外观察LPS刺激大鼠AM中NF -κB活性的动态变化 ,应用圈套策略观察NF-κB在LPS刺激大鼠AM表达TNF -α中的作用。　结果　LPS刺激可使大鼠AM内NF -κB明显活化 ,并与LPS剂量正相关 ;抗体超迁移率实验结果显示p5 0、p6 5参与了NF -κB的活化 ;NF -κB的圈套硫代寡核苷酸 (S -ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF -α ,但不能完全阻断LPS诱导的TNF -α表达。　结论　NF -κB(p5 0 p6 5 )在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用 ,LPS刺激大鼠AM表达TNF -α受NF -κB调控 ,但其他核转录因子可能也在TNF -α的表达中发挥重要作用。     

靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMФTNFα表达的实验研究

目的本实验设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs，并验证其抗TNFα生成效应。方法以阳离子脂质体为载体，将圈套ODNs转染大鼠pMФ细胞6小时后用LPS(脂多糖)10μg/ml刺激，用ELISA法及RT-PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。     

失血性休克缺血-再灌注损伤家兔肺泡巨噬细胞中IκK-β／NF—κB改变的实验研究

目的观察失血性休克缺血-再灌注（I／R）损伤时兔肺泡巨噬细胞（AM）中I-κB激酶-β／核因子-κB（IκK-βNF—κB）信号通路的改变，探讨肺部炎症损伤的细胞分子基础。方法建立失血性休克I／R家兔模型，分离、培养AM，用原位杂交方法检测AM中IκK—β的mRNA表达，用凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）和酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测AM中NF—κB的活性和AM培养上清液中TNF—α、IL-6的含量。病理学光镜观察肺组织的炎症损害。结果模型组IκK—β、NF—κB、TNF—α、IL-6指标较对照组显著升高（P〈0.01）；I／R损伤动物肺组织呈现明显炎症病理改变。结论AM是I／R损伤炎症信号通路的重要细胞基础；细胞内IκK—β激活／NF—κB核移位／细胞因子产生是I／R肺组织炎症病理损伤的重要分子机制。     

靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφTNFα表达的实验研究

目的　本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法　以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果　哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论　靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。     

核因子-κB与腹部开放伤合并海水浸泡大鼠全身炎症反应综合征的关系

目的探讨腹部开放伤合并海水浸泡大鼠全身炎症反应综合征（SIRS）发生时核因子-κB（NF-κB）的活性与SIRS的关系。方法采用腹部开放伤合并海水浸泡大鼠致伤模型并诱发SIRS。酶联免疫吸附（ELISA）法检测血肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,免疫组化技术检测NF—κB在外周血淋巴细胞（PBL）和小肠组织中的活性。结果腹部开放伤后海水浸泡1小时,大鼠出现SIRS;血TNF—α、IL-6水平升高;免疫组化显示大鼠PBL和小肠组织中NF-κB表达的阳性率显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论腹部开放伤合并海水浸泡可致大鼠SIRS,NF-κB和细胞因子参与了SIRS的发生、发展。NF-κB的激活介导了TNF—α、IL-6等细胞因子的释放,在SIRS中可能处于中心环节。     

圈套寡核苷酸影响腹腔巨噬细胞炎症介质表达的实验研究

目的 设计合成靶向核因子—κB(NF—κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(0DNs)，并检测其抗炎效应。方法 提取大鼠腹腔巨噬细胞(pMφ)，随机分为正常对照组、单纯内毒素(LPS)组、圈套0DNs处理组、无关圈套0DNs处理组和脂质体处理组。收集正常对照组和单纯LPS组LPS刺激后1，2，6，12，18，24k上清及细胞；采用阳离子脂质体按质量比为4：1的比例分别介导2，4，8mg/L圈套0DNs转染大鼠pMφ细胞，6k后用LPS刺激，收集转染后8，12，18k上清及细胞。细胞免疫组化法分析LPS刺激前后p65表达与分布变化，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)、白细胞介素—6(IL—6)蛋白表达，逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)法检测TNF—α、IL—6和IL—10mRNA转录。结果 4，8mg/L剂量哑铃形圈套0DNs可明显抑制LPS诱导的大鼠pMφTNF—α、IL—6转录和表达。结论 靶向NF—κB的哑铃形圈套0DNs具有拮抗炎症介质转录和表达的功能。     

泛素-蛋白酶体途径在烧伤脓毒症大鼠肝脏NF-κB活化中的作用研究

目的　研究泛素 蛋白酶体途径对烧伤脓毒症大鼠肝脏NF κB的活性和IκB α含量以及肝脏TNF α表达的影响。方法　采用 30 %TBSAⅢ度烫伤加内毒素攻击大鼠为模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 0只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 蛋白酶体抑制剂ALLN处理组、烧伤脓毒症 NF κB抑制剂PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,采用免疫印迹方法检测肝脏IκB α表达 ,采用酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ,IκB α表达先减少后逐渐恢复 ,应用泛素系统抑制剂可以抑制IκB α在肝脏中的降解 ,而采用蛋白酶体抑制剂和NF κB抑制剂均可降低肝脏NF κB的活性和减少TNF α的释放。结论　表明烫伤脓毒症大鼠肝脏NF κB活性明显增强 ,而干预泛素 蛋白酶体途径可通过抑制IκB α降解实现对肝脏中NF κB活性的调控。     

NF-κB在烧伤脓毒症大鼠肝损伤中的作用

目的　研究NF κB在烧伤脓毒症大鼠急性肝损害中的作用。方法　采用 30 %Ⅲ度烫伤加内毒素攻击大鼠模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 +NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组、单纯PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,免疫印迹 (Westernblotting)法检测肝脏IκB α表达 ,酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α含量的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ;IκB α表达先减少 (P <0 0 5 )后逐渐恢复 ;NF κB抑制剂PDTC可以降低NF κB的活性和减少TNF α的释放 ,同时明显降低血清ALT、AST含量。结论　抑制NF κB活性有助于减轻烧伤脓毒症时肝脏的急性损害。     

人脑外伤后皮层核因子-κB的表达

目的 探讨核因子-κB（nuclear factor—κB，NF—κB）在人创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后挫伤皮层中的表达情况，包括表达位置、表达强度和表达时相。方法 挫伤区皮层的标本来自24例TBI患者，取样时间为伤后5h-5d，利用凝胶电泳迁移分析法（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）和免疫组化技术测定NF—κB的活性和表达强度。结果 在人TBI后的挫伤区皮层中，NF—κB表达明显上调，表达高峰为伤后48—72h，NF—κBP65主要在血管内皮细胞和神经胶质细胞中表达，NF—κBP50主要在神经胶质细胞和少量神经元中表达，NF—κBP65的表达强度高于NF—κBP50。结论 NF—κB在人TBI后的挫伤区皮层中表达上调，提示其可能在TBI后的病理生理过程中起着重要作用。     

β-七叶皂甙对脑损伤大鼠脑组织核因子-κB活性与肿瘤坏死因子-α蛋白表达的影响

目的　研究β-七叶皂甙(β-aescin)对大鼠急性脑损伤后脑组织核因子-κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。　方法　62只SD大鼠采用自由落体致伤法制作脑外伤模型,随机分成四组: (1)假手术对照组(A); (2)创伤组(B); (3)β-七叶皂甙治疗组(C); (4)吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗组(D)。每组分别在术后6, 24h和3d三个时相点收取脑组织标本,采用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定脑组织NF-κB活性;放射免疫法测定脑组织TNF-α蛋白水平,并测定脑组织含水量及进行病理形态学观察。　结果　与假手术对照组比较,大鼠脑损伤后脑组织NF-κB活性和TNF-α蛋白水平以及脑组织含水量显著增高(P<0. 01);与创伤组比较,β-七叶皂甙和PDTC治疗组脑组织NF-κB活性(P<0. 01 )、脑组织TNF-α蛋白水平(P<0. 01)及脑组织含水量(P<0. 05)均显著降低。　结论　β-七叶皂甙可以抑制NF-κB活化,下调TNF-α蛋白表达,从而减轻脑水肿。这可能是β-七叶皂甙治疗创伤性脑水肿的分子生物学作用机制之一。     

大蒜素对胃癌细胞NFκB活性的影响

目的研究大蒜素对肿瘤细胞中核转录因子B(NFκB)活性的影响,探讨大蒜素抗肿瘤的作用机制.方法用凝胶滞留(EMSA) 方法分析应用大蒜素处理前后人胃癌细胞系BGC-823的细胞核蛋白中NFκB的DNA结合活性. 结果用大蒜素处理后可观察到肿瘤细胞有增殖减慢及诱导分化等现象,大蒜素处理后NFκB结合DNA的活性降低.结论大蒜素的抗肿瘤作用可能是通过NFκB信号途径起作用的.     

内毒素对心肌组织核因子-κB活化的影响及其意义

目的 通过观察内毒素(LPS)攻击大鼠心肌组织核因子-κB(NF-κB)的活化情况,探讨心肌损伤的可能信号机制.方法 大鼠腹腔注射5mg/kg LPS制作脓毒症模型,采用凝胶阻滞迁移分析法(EMSA)检测心肌组织NF-κB活化情况,RT-PCR法检测TNF-α基因表达情况.结果 LPS攻击后1h,NF-κB活化及TNF-α基因表达开始升高,2h达高峰,6h后逐渐下降.相关分析表明,心肌组织NF-κB活化与TNF-α基因表达呈显著正相关(r=0.992 2,P＜0.05).结论 LPS可增强心肌组织NF-κB的活化并诱导TNF-α基因表达.NF-κB活化导致的TNF-α合成增加在LPS介导心肌损害的分子机制中可能具有重要作用.     

核因子-κB在大鼠肺型氧中毒发病中的作用

目的 探讨核因子(NF)-κB在大鼠肺型氧中毒发病中的作用.方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组及230 kPa高压氧暴露2、6、10 h组.观察肺组织病理变化以及NF-κB和肿瘤坏死因子a(TNF-α)在肺组织中含量的变化.结果 (1)病理检查发现肺组织在高压氧暴露6 h组出现炎症改变,10 h组肺损伤加重.(2)肺组织细胞核中NF-κB P65含量在高压氧暴露2 h组中明显增高,6 h组中达高峰,10 h组中下降但仍高于正常对照组.(3)肺组织TNF-α mRNA表达及肺匀浆中TNF-α浓度在高压氧暴露6 h组中明显增高,10 h组中继续增高.结论 高压氧可以通过活化NF-κB诱导TNF-α高表达从而介导氧中毒的肺损伤.     

肝脏缺血再灌注合并内毒素血症损伤中NF-κB的作用

目的 :探讨NF -κB在肝脏缺血再灌注并内毒素血症 (HIRE)损伤中的作用。方法 :Wister大鼠随机分为 :正常对照组 ;HIRE组 ;PDTC保护组 (HIRE +PDTC)。HIRE组肝左叶及中叶之入肝血流阻断 6 0min后再灌注 ,同时静脉注射LPS2 .5mg·kg-1;HIRE +PDTC组先静脉注射PDTC12 0 (mg·kg-1)后立即致伤 ;正常对照组仅显露肝脏左叶及中叶之肝动脉和门静脉 ,不阻断。分别采用EMSA法及赖氏法检测再灌注后 1,3,6 ,12hNF -κB活性及血浆中ALT含量。结果 :损伤后NF -κB结合活性明显升高 ,并于再灌注后 3h达到高峰 ,同时血浆中ALT含量亦明显升高 ,PDTC保护组NF -κB活性减弱 ,ALT水平降低。结论 :后NF -κB的结合活性与HIRE时肝脏损伤程度有直接关系。     

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF—κB DNA结合活性的影响，探讨NF—κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后FL-4细胞NF—κB DNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化，同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF-κB-荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内，并用PKC信号通路阻断剂Calphostin C处理，检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0．075Gy X射线照射可诱导NF—κB、p50／p65和p50／p50活性增强，而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强，涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化，表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高，而IκBα水平的变化正相反，在照后4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂Calphostinc可降低0．075Gy照射对NF—κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF-κB的迅速活化，而且可能通过PKC通路，进而调节细胞因子等特异基因的表达，促使免疫功能增强，这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。     

阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌NF-κB、TNF-α表达的影响

目的探讨NF-κB及TNFα-在2型糖尿病大鼠心肌中的表达及阿托伐他汀的干预作用。方法60只SD大鼠分为对照组、糖尿病组和阿托伐他汀组,每组20只,后两组用小剂量链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。阿托伐他汀组给予阿托伐他汀20mg/(kg.d)灌胃12周。用放免法检测各组大鼠血浆及心肌TNFα-,光镜下观察心肌结构。RT-PCR方法检测心肌组织中NFκ-B及TNFα-的mRNA表达水平,免疫组化法检测其蛋白表达。结果光镜下可见对照组大鼠心肌细胞排列整齐、致密,结构清晰,细胞核呈卵圆形,糖尿病组大鼠心肌细胞排列紊乱、扭曲,间质有炎症细胞聚集,阿托伐他汀组心肌细胞排列趋于整齐,结构接近正常。糖尿病组大鼠血浆和心肌中TNFα-浓度较对照组明显升高(P<0.01),且心肌组织中NFκ-B和TNF-αmRNA及蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01)。给药12周后,阿托伐他汀组NFκ-B、TNF-αmRNA及蛋白表达较糖尿病组明显降低(P<0.01)。结论阿托伐他汀可抑制2型糖尿病大鼠心肌组织中NFκ-B及TNFα-的表达,对2型糖尿病心肌病具有一定防治作用。     

转染金属蛋白酶抑制剂2基因对损伤血管平滑肌细胞核因子-κB和蛋白激酶C的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞 (VSMC)损伤后金属蛋白酶 (MMPs)和蛋白激酶C(PKC)、核因子 -κB(NF -κB)表达的变化。　方法　采用脂质体对VSMC转染金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP- 2 )基因进行基因转染 ,并用Westernblot加以鉴定 ,分别用酶谱分析法、凝胶电泳迁移率分析技术(EMSA)、逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)和免疫细胞化学检测该细胞克隆MMPs、NF -κB的活性变化和PKCαmRNA、蛋白的表达水平。　结果　体外损伤的VSMC金属蛋白酶显著增加。PKCα、NF -κB在正常VSMC中很少表达 ,但在损伤的VSMC中这种表达非常显著 ,对兔VSMC进行TIMP - 2转染后 ,损伤的VSMCMMP - 2 ,9活性受抑制 ,并且PKCα、NF -κB的表达下调 (P <0 .0 5 )。结论　PKCα和NF -κB在MMPs合成及损伤VSMC迁移中有重要价值 ,TIMP - 2能通过抑制平滑肌细胞PKCα、NF -κB信号途径来防止血管再狭窄。     

海水淹溺型急性肺损伤早期肺组织核因子-κB及相关细胞因子的动态变化

目的探讨海水淹溺型急性肺损伤早期核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性及相关细胞因子动态变化。方法 36只新西兰兔随机分成对照组(0 h)和海水灌注后1、3、6、12、24 h组。灌注组经气管插管灌注2 ml/kg海水。观察各组动物血气分析的变化。计算肺湿干重比值、肺通透指数。以非放射性凝胶迁移实验分析肺组织NT-κB活性,酶联免疫吸附法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-10浓度,同时进行病理学检查,计算肺病理评分。结果与对照组比,海水灌注组氧合指数迅速低至300 mmHg以下,持续时间长达6 h(P<0.01);肺大体标本淤血水肿严重,显微镜下可见炎症细胞浸润等急性肺损伤病理学征象;肺湿干重比于海水灌注后3 h达高峰,肺通透指数及肺病理评分以海水灌注后6 h组数值最高;肺组织NF-κB活性及TNF-α、IL-1β、IL-10表达量显著增高,并于6 h达高峰。海水淹溺型急性肺损伤早期NF-κB活性与TNF-α、IL-1β、IL-10及肺病理评分正相关(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-10与肺病理评分、肺通透指数亦密切相关(P<0.05)。结论 NF-κB活化在海水淹溺型急性肺损伤早期与细胞因子过度释放密切相关,在肺组织炎症反应和病理损害中起重要作用。     

失血性休克缺血-再灌注损伤家兔肺泡巨噬细胞中IκK-β/NF-κB改变的实验研究

目的 观察失血性休克缺血-再灌注(I/R)损伤时兔肺泡巨噬细胞(AM)中I-κB激酶-β/核因子-κB (IκK-β/NF-κB)信号通路的改变,探讨肺部炎症损伤的细胞分子基础.方法 建立失血性休克I/R家兔模型,分离、培养AM,用原位杂交方法检测AM中IκK-β的mRNA表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测AM中NF-κB的活性和AM培养上清液中TNF-α、IL-6的含量.病理学光镜观察肺组织的炎症损害.结果 模型组IκK-β、NF-κB、TNF-α、IL-6指标较对照组显著升高(P＜0.01);I/R损伤动物肺组织呈现明显炎症病理改变.结论 AM是I/R损伤炎症信号通路的重要细胞基础;细胞内IκK-β激活/NF-κB核移位/细胞因子产生是I/R肺组织炎症病理损伤的重要分子机制.