反义RNA体外抑制丙型肝炎病毒基因表达的研究

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因调控方式及反义RNA对HCV基因表达的体外抑制作用。方法 采用业已建立的HCV基因调控细胞模型，以重组质粒共转染策略，将反义RNA重组质粒与HCV5′非翻译区(5′UTR)调控的报道基因——虫荧光素酶(luc)重组质粒共同转染人肝癌细胞系(HepG2)，并以不表达反义RNA的原核重组质粒和不含有HCV5′UTR的luc重组质粒做为对照。转染细胞经短期培养后制备细胞提取液，荧光检测法检测luc基因的表达。结果 针对HCV5′uTR的反义RNA可以在体外有效抑制由HCV5′UTR调控的luc基因的表达，并具有剂量依赖效应。对照重组质粒转染实验证明，上述抑制作用呈序列特异性。结论 HCV5′UTR具有调控下游目的基因表达的重要功能，反义RNA可以在体外有效抑制由HCV5′UTR介导的病毒基因的表达。     

CK13基因5′旁侧的初步功能分析

目的　探讨细胞角蛋白 13(cytokeratin13,CK13)基因表达调控的机理 ,研究 CK13基因 5′旁侧不同基序对其转录活性的影响。　方法　采用分子克隆结合报告基因分析的方法 ,构建 CK 13基因 5′旁侧 5 13bp内不同基序与氯霉素乙酰转移酶 (chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因增强子载体p CAT的重组体 ,通过脂质体介导的转染技术导入 He L a细胞 ,检测各报告基因载体 CAT的相对活性。　结果　 CK13基因 5′旁侧起始密码子 ATG上游 - nt.32 5～ - nt.2 0 7间 119bp中具有某种抑制子元件 ,-nt.2 0 6～ - nt.94间 113bp中具有某种增强子元件。　结论　 CK13基因 5′旁侧 5 13bp内存在促进及抑制CK13基因表达的反应元件 ,进一步定位这些顺式反应元件并研究与之相互作用的反式作用因子 ,可望阐明 CK13基因表达调控及组织特异性表达的详细机理。     

内皮素基因表达及调控研究

内皮素(ET)是近年发现的一种血管活性多肽,其基因表达受许多因素调节。调控位点存在于基因启动子、结构基因和ET mRNA 3′端非翻译区等处,启动子A区和 B区可能发挥主要作用。影响基因表达的因素,如缺氧、血管紧张素Ⅱ 凝血酶和心钠素等分别作用于各自受体,通过细胞内信使系统,作用于相应的调控位点,发挥正性或负性调节作用。     

γ—谷氨酰半胱氨酸合成酶基因及其调控

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ GCS)基因由γ GCS HS基因和γ GCS LS基因组成 ,γ GCS HS基因的 5′ 端序列包括很多调控γ GCS HS基因表达的抗氧化剂反应元件。不同的细胞在不同的刺激物下 ,γ GCS两亚单位基因有着不同的表达调控方式     

HOXD13调控SOX9基因可能参与先天足部软组织畸形的发生

目的　研究HOXD13与SOX9基因在单纯性马蹄内翻足（idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV）足部软组织畸形发生中的分子机制。 方法　软件预测SOX9基因5′上游3个HOXD13结合位点,构建SOX9基因上游不同长度片段以及结合位点野生和突变序列载体,并测定其荧光素酶活性。在体内用ChIP验证HOXD13与SOX9基因启动子区3位点结合作用。干扰HOXD13基因表达,qRT-PCR检测HOXD13和SOX9表达水平的改变。 结果　荧光素酶检测发现在SOX9基因5′上游-1158至-770 bp（位点1）和-512至-368 bp之间（位点3）为负调控区;-770至-512 bp之间（位点2）是正调控区。ChIP检测显示HOXD13蛋白可与SOX9基因位点3结合。干扰HOXD13表达,SOX9基因mRNA表达上调。 结论　HOXD13结合SOX9基因5′上游负调控区可上调SOX9基因表达。干扰HOXD13会上调SOX9基因表达,高表达SOX9基因可能与足踝部软组织的挛缩发生相关。     

HOXD13调控SOX9基因可能参与先天足部软组织畸形的发生

目的　研究HOXD13与SOX9基因在单纯性马蹄内翻足（idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV）足部软组织畸形发生中的分子机制。 方法　软件预测SOX9基因5′上游3个HOXD13结合位点,构建SOX9基因上游不同长度片段以及结合位点野生和突变序列载体,并测定其荧光素酶活性。在体内用ChIP验证HOXD13与SOX9基因启动子区3位点结合作用。干扰HOXD13基因表达,qRT-PCR检测HOXD13和SOX9表达水平的改变。 结果　荧光素酶检测发现在SOX9基因5′上游-1158至-770 bp（位点1）和-512至-368 bp之间（位点3）为负调控区;-770至-512 bp之间（位点2）是正调控区。ChIP检测显示HOXD13蛋白可与SOX9基因位点3结合。干扰HOXD13表达,SOX9基因mRNA表达上调。 结论　HOXD13结合SOX9基因5′上游负调控区可上调SOX9基因表达。干扰HOXD13会上调SOX9基因表达,高表达SOX9基因可能与足踝部软组织的挛缩发生相关。     

组蛋白甲基化与lncRNAs的表达调控

LncRNAs是长度超过200 nt非编码蛋白质的RNA分子,并参与细胞内多种调控过程.LncRNA在发育和基因表达中发挥着复杂精确的调控功能,补充解释了基因组复杂性的生物意义,同时也使人们重新认识了生命过程中基因表达调控网络的复杂性.LncRNA参与了X染色体沉默、基因组印记、染色质修饰、转录激活、转录干扰以及核内运输等多种重要的调控过程.组蛋白修饰是基因表达调控的重要形式,尤其是组蛋白甲基化的调控作用.研究发现组蛋白甲基化对基因异常表达的调控参与多种肿瘤的发生.组蛋白去甲基化酶的发现又提出了一种新的理念,即组蛋白甲基化对lncRNA表达调控作用,这将是基因表达调控研究的新领域.     

IFN-λ在人食管癌细胞系中诱导的生物学活性的初步研究

目的 初步研究IFN-λ在7种人食管癌细胞系中诱导的生物学作用。方法 PCR检测IL-28α和IL-10β的基因及抗病毒分子基因的表达,流式细胞术检测主要组织相容性抗原的表达及细胞周期,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖。结果 各食管癌细胞表达IL-28α和IL-10β的基因;IFN-λ诱导或上调2′5′-寡腺苷酸合成酶（2′5′-OAS）和黏病毒抗性蛋白A(MxA)的基因表达;IFN-λ可上调Ⅰ类主要组织相容性抗原分子的表达;IFN-λ可通过调控细胞周期的方式抑制食管癌细胞生长增殖。结论 人食管癌细胞株表达IFN-λ受体复合体,IFN-λ具有抗病毒、抗增殖和免疫调节的生物学活性。     

Tet基因调控系统研究进展

Tet基因调控系统是将原核生物基因调控元件引入真核基因调控领域而构建的一种新型基因表达调控系统。它具有高效、无毒、严密的开 /关功能 ,故被广泛应用于基因表达调控、基因功能研究以及基因治疗中。     

MicroRNA参与的调控网络

成熟的microRNA(miRNA)是一类长约18～24个核苷酸、内源性非编码小RNA分子,它在体内下调靶基因的表达。迄今在不同物种中已发现的miRNA达上千种。miRNA的发现为基因表达调控研究打开了新的窗口。目前研究者不仅关注miRNA在发育、分化、生长和代谢等诸多生物过程中的作用,而且开始进一步探寻其发挥作用的分子机理,以期重新描绘基因表达调控网络图。文章综述了miRNA对其靶基因的调控特点,介绍了miRNA自身调控研究的最新进展,从而有助于理解miRNA参与的基因表达调控网络的复杂性。     

基于microRNA差异表达探讨恶性纤维组织细胞瘤致病机制

目的 应用芯片表达分析技术探讨miRNA在恶性纤维组织细胞瘤发病机制中的作用.方法 利用miRCURYTM LNA miRNA表达谱芯片技术高通量筛选NMFH1与MSC、HSF、MRC-5和HT-1080细胞系差异表达miRNA,筛选靶基因,分析调控作用机制.结果 筛查NMFH1与4种对照组细胞系差异表达miRNA,选取与所有正常样本对比均下调miR-222、miR-186及miR-933,均上调miR-886-3p、miR-886-5p、miR-183、miR-340及miR-BART7进行qRT-PCR实验,验证芯片数据可靠性.基于生物信息学方法挖掘miRNA靶基因,构建基因调控网络,基于功能组注释信息分析NMFH1风险疾病基因及通路,揭示MFH恶性病变机制.结论 miRNA在肿瘤样本与正常细胞系间显著差异表达,是参与MFH发生发展过程的重要调控因子,发挥负调控基因表达作用,使肿瘤细胞逃避正常生长调控机制,无限增殖和转移,出现恶性表型.     

长链非编码RNA HOTTIP的研究进展

长链非编码RNA HOTTIP是来源于HOXA的5′端的一个非编码RNA转录本。近年研究表明,HOTTIP与疾病发生的关系非常密切,它们可在转录、转录后水平广泛参与基因表达调控,影响疾病的发生、发展及预后。本文就lnc RNA HOTTIP的发现、组成、作用机制及其病理作用的研究进展做一综述。     

聚类和关联规则挖掘在基因表达数据分析中的应用研究

随着DNA微阵列技术的广泛应用,产生了海量基因表达数据,如何利用这些数据研究基因间的调控关系成为当前生物信息学的一个研究热点.关联规则挖掘是数据挖掘领域的一个重要技术,然而直接埘基因表达数据进行关联规则挖掘存在两个问题:一是时间和空间复杂度过高;二是获得的规则仅定性表示基因间的调控关系,无法提供关于调控关系强度的信息.本文利用聚类实现数据降维,然后将基因表达水平离散化为七个状态,最后关联分析每个聚类中的基因表达数据.实验结果表明本文的分析方法是有效的.     

流体切应力对血管内皮细胞基因表达的影响

血液产生的切应力可以引起血管中的内皮细胞发生生物物理、生化和基因调控水平上的反应,从而调节内皮的结构和功能。当内皮细胞受到的切应力发生变化时,即可引起细胞基因表达上的变化,从而可能引发一些常见的心血管疾病。对切应力调控内皮细胞基因表达机制的研究,有助于找到治疗以上疾病的临床方法。综述了切应力对内皮细胞基因表达的影响及其调控机制,并对其在临床治疗、小口径人工血管构建和药物设计等方面的应用前景进行了展望。     

雌激素和高胰岛素调节胰岛素受体底物-1，2表达机制研究

目的：研究雌激素和高浓度胰岛素对胰岛素受体底物(IRS)-1和-2表达的分子机理。方法： 将IRS-1，2基因5′调控区克隆至含荧光素酶表达载体pGL3质粒，转染HeLa细胞，加雌激素（1 nmol/L）或高浓度胰岛素(100 nmol/L)培养，检测IRS-1，2基因5′调控区相对转录活性。结果： 高浓度胰岛素刺激细胞48 h，IRS-2基因5′调控区相对转录活性减低，IRS-1无明显差异；雌激素处理显著增加IRS-1，2基因5′调控区的相对转录活性。结论： 高胰岛素可能通过作用于IRS-2基因5′调控区中胰岛素作用元件，使其转录活性降低。而雌激素则通过作用于IRS-1，2基因5′调控序列，使其转录活性提高，增强其表达。     

真核细胞内可诱导基因表达系统研究进展

建立可诱导基因表达系统是研究基因功能的重要手段。迄今为止已出现了许多真核细胞内可诱导基因表达系统,包括以真核基因调控元件及原核基因调控元件为基础的可诱导表达系统、双系统、组织特异性及可诱导基因打靶系统等。     

基因组医学、染色体组和人类疾病基因（5）

基因表达调控是分子生物学的核心，是基因组学与蛋白质组学的桥梁．基因表达调控呈多级调控，包括遗传调控和表观遗传调控(Epigenetic contml)的综合网络调控过程．遗传表达复杂性在于有更多的结构蛋白和基因编码，而基因表达的调控机制更为复杂．表观遗传调控是指基因在染色质水平上的结构调整，     

组蛋白乙酰化、DNA甲基化在肿瘤发生中的作用

组蛋白乙酰化和 DNA甲基化是调控基因表达的两种主要方式 ,目前认为组蛋白乙酰化和 DNA低甲基化可促进基因表达 ,而组蛋白去乙酰化和 DNA高甲基化可抑制基因表达。组蛋白乙酰化和 DNA甲基化这两种分子机制相互协调 ,实现基因表达的精细调控     

DNA甲基化检测技术与应用前景

表观遗传学是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,通过DNA甲基化和组蛋白修饰等调控基因表达的一门遗传学分支学科。它不仅对基因表达、调控、遗传有重要作用,而且在肿瘤、免疫等许多疾病的发生和防治中具有重要意义。     

类固醇5α还原酶与激素相关肿瘤

类固醇5α还原酶(SRD5A)分为1型和2型,它们均能催化类固醇激素产生活性代谢产物,并有相对特异的组织定位。多数研究表明,在激素相关肿瘤组织SRD5A表达和(或)活性升高。该基因变异与激素相关肿瘤关系密切,特别是A49T,V89L及3′UTR非翻译区的TA重复序列的多态性变异。目前其抑制剂已用于前列腺癌的预防和治疗。但其基因表达调控机制仍不清楚,需进一步研究。