蛋白芯片技术监测大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的发生

摘要：目的　利用蛋白质芯片技术双盲监测大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的发生。方法 采用弱阳离子交换芯片(WCX2)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术对穿透性角膜移植术后大鼠血清中表达的免疫排斥反应相关的低分子量差异蛋白进行筛选,并通过双盲法利用蛋白质芯片技术监测筛选结果。结果　质荷比0-20 000范围内,共检测到58个蛋白峰,其中6个蛋白质峰的表达有统计学意义。双盲法监测结果：血清中出现这6个蛋白质峰的大鼠角膜全部发生免疫排斥反应。结论 蛋白芯片技术能够筛选出灵敏度和特异性好的差异表达蛋白,为角膜移植排斥反应病情的治疗监测提供依据。     

穿透性角膜移植术后发生角膜排斥反应17例临床分析

穿透性角膜移植术是使角膜盲患者重见光明的重要手段之一。随着角膜移植技术的发展和完善，免疫排斥反应已成为该手术失败的主要原因。本文总结了2000年3月至2006年3月我院穿透性角膜移植术后发生角膜免疫排斥反应的病例共17例17眼，分析其发生原因，探讨其发病高危因素与防治方法。现报道如下。     

大鼠穿透性角膜移植角膜中转化生长因子βⅡ型受体的变化

目的:观察大鼠穿透性角膜移植角膜中转化生长因子βⅡ型受体(Ⅱ型受体)的变化。方法:异体角膜移植:30只SD大鼠与30只Wistar大鼠相互进行右眼角膜移植。自体角膜移植:10只SD大鼠与10只Wistar大鼠进行右眼自体角膜移植。记录排斥反应指数。免疫组化染色后研究角膜Ⅱ型受体的表达强度。结果:在异体角膜移植初期,Ⅱ型受体表达迅速增多,而当排斥反应发生时,则迅速减少甚至消失;而在自体角膜移植中,Ⅱ型受体迅速增多并维持在一个相当高的水平。结论:排斥反应发生时,Ⅱ型受体减少甚至消失,从而使转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)无法发挥其免疫抑制的作用。     

CD1分子在高危角膜移植免疫排斥反应中的表达

目的:探讨高危角膜移植免疫排斥反应中CD1分子表达。方法:选用SD大鼠作供体,Wistar大鼠作受体,建立大鼠高危角膜移植动物模型。术后观察植片的存活情况。分别在植片急性排斥期和排斥后应用免疫组化的方法对植片中CD1分子的表达进行研究。结果:正常大鼠角膜组织中,在上皮细胞层可见CD1分子的表达,基质层和内皮层未见明显CD1分子的表达。角膜移植术后10 d,在发生排斥的植片上皮层和基质层有CD1分子的强表达,内皮层未见CD1分子的表达。基质中CD1分子的表达随免疫排斥反应的增强而增加;在角膜移植术后30 d,CD1分子的表达有所下降。结论:CD1分子在高危角膜移植免疫排斥反应的发生发展中发挥重要作用,选择性阻断CD1分子的表达可能会延长植片的存活时间。     

树突状细胞在大鼠穿透性角膜移植排斥反应中的作用

目的 观察大鼠角膜组织中树突状细胞的分布,以了解树突状细胞在穿透性角膜移植排斥反应中的作用.方法 制作大鼠穿透性角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管.采用免疫组织化学方法检测OX-62 树突状细胞在角膜的分布.结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管、角膜水肿、混浊、基质增厚.排斥反应发生率100%.正常角膜组织中未见OX-62 树突状细胞分布,在发生急性排斥反应的角膜上皮层中有阳性细胞表达.脾脏阳性细胞表达与文献报道一致.结论 OX-62 树突状细胞出现在移植后发生排斥的角膜组织中,角膜组织中的树突状细胞可能参与角膜移植后的免疫反应.     

大鼠角膜移植排斥反应中体液免疫作用的研究

测定３０例ＰＶＧ－ＰＶＧ和４０例ＬＥＷ－ＰＷＧ角膜移植术前，术后血清，房水和泪液Ｉｇ和Ｃ３含量。结果表明，泪液和房水ＩｇＧ含量异常升高与角膜移植排斥反应显著相关。初步建立了大鼠角膜移植术衙无排斥反应发生时泪液ＩｇＧ含量变化的定量关系，提出了预测角膜移植术后排斥反应发生的一种辅助方法。     

肿瘤坏死因子-α在角膜移植免疫排斥反应中作用的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子 α在角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法　以近交系大鼠制作穿透性角膜移植模型 4 4例 ,利用逆转录 多聚酶链反应和酶联免疫吸附实验技术分别检测不同时间供、受体角膜组织内TNF αmRNA的表达和外周血清中TNF α的水平 ,同时观察移植角膜组织的病理形态学变化 ,并观察应用抗TNF α单克隆抗体治疗后上述各项指标的变化。结果　同基因移植大鼠角膜轻度增厚 ,浅基质层见轻度炎性反应。在发生排斥反应的异基因移植鼠 ,角膜明显变厚 ,各层弥漫散在炎性细胞。术后早期各组大鼠血清TNF α浓度均有升高 ,而后同基因组逐渐下降 ,术后第 7天即已降至正常水平。异基因组渐趋升高 ,治疗组升高时间后延 ,而当发生排斥反应时 ,二者差异无显著性 (P <0 .0 5 )。异基因组自术后第 3天以及治疗组自术后第 7天 ,在供、受体角膜组织中均检测到TNF αmRNA的表达 ,而在同基因移植大鼠和正常大鼠角膜中则未检测到。异基因移植大鼠植片存活时间为 10 .2± 1.94d ,而抗体治疗组 13.8± 2 .17d ,二者相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　TNF α在角膜移植免疫排斥反应中发挥重要作用 ,术后监测TNF α浓度变化对排斥反应的发生有一定预测和早期诊断作用 ,并且可延长植片存活时间     

穿透性角膜移植术后免疫排斥反应高危因素分析

目的 分析穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的高危因素。寻找角膜移植术后免疫排斥反应的有效防治方法。方法 对穿透性角膜移植术后发生免疲排斥反应的31例，从角膜盲原因、植床新生血管程度、合并症、移植片直径、联合手术等5大高危因素进行回顾性分析。结果 血管化角膜、大植片移植、植床术前的活动性炎症、偏中心移植、多次移植、联合手术等应视为穿透性角膜移植术后免疲排斥反应的高危因素，而移植片上皮反复脱落、眼压高、旧病复发、术眼再次手术、缝线松解与拆线等可能是诱导排斥反应发生的促发因素。结论 尽量减轻角膜血管化，掌握适当的手术时机，强调病人的及时复诊和治疗，术后坚持局部使用免疲抑制剂半年，排斥发生时及时足量地全身及局部使用激素和免疲抑制剂，均可以在一定程度上帮助控制免疲排斥反应。     

60例穿透性角膜移植疗效分析

目的：观察穿透性角膜移植的疗效和并发症．方法：对60例(60眼)穿透性角膜移植进行回顾性总结．结果：统计分析表明：角膜植片透明54例(90．00％)，视力≤0．0422例(36．67％)．0．05～0．227例(45．00％),≥0．311例(18．33％)．主要并发症：角膜植片免疫排斥反应17例(28.33％)，继发性青光眼2例(3．33％)．结论：穿透性角膜移植可使角膜盲患复明，但防治术后免疫排斥反应是成功关键。     

IL-1ra抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的　观察白细胞介素 - 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法　建立大鼠同种异体穿透性角膜移植动物模型 ,受者随机分为生理盐水对照组 ,CsA治疗组 ,IL - 1ra治疗组。术后连续观察 2周 ,对各组大鼠角膜植片存活情况进行评分比较 ,评价药效。结果　IL - 1ra组与CsA组角膜植片存活时间分别为 (19.5 83± 0 .2 88)d和 (16.667± 0 .43 2 )d ,与对照组 (11.0 0 0± 0 .3 2 6)d相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;IL - 1ra组和CsA组排斥反应指数 (RI)均明显低于对照组 (P <0 .0 1) ;IL - 1ra组新生血管评分明显低于对照组和CsA组 (P <0 .0 1)。结论　IL - 1ra可明显抑制角膜移植术后免疫排斥反应 ,减轻炎性反应 ,减少新生血管生成 ,延长角膜植片的存活时间     

高危角膜移植免疫排斥反应中ICAM-1的作用

目的:探讨细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion Molecule-1,ICAM-1)在高危角膜移植免疫排斥反应中的作用.方法:制作兔角膜新生血管(Comeal neovascularization,CNV)模型后行穿透性角膜移植(penetrating keratoplasty,PKP)4组,A组:正常对照组;B组:自体穿透性角膜移植组;C组:同种异体穿透性角膜移植组;D组:新生血管化角膜穿透性移植组.术后对CNV生长情况进行评分;记录植片存活时间;记录移植排斥指数(rejection index,RI);应用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测房水及外周血中sICAM-1的含量.结果:CNV生长达中央平均为16.4±1.8d;排斥组植片平均存活12.4±1.3d,其他组角膜植片长期存活;正常房水和血清中均可检测到少量的sICAM-1,它们的浓度分别为16.55±3.63pg/ml,95.15±6.26pg/ml;术后早期D组房水及外周血中sICAM-1含量即升高,至排斥反应前达最高水平分别为53.87±19.25pg/ml,378.78±30.58pg/ml,在观察期内维持高水平;排斥反应发生时,炎性细胞布满全层,基质结构紊乱,有大量新生血管,部分内皮消失.结论:ICAM-1在角膜移植免疫排斥反应中发挥重要作用,术后监测ICAM-1浓度变化对排斥反应的发生有一定预测和早期诊断作用.     

角膜移植免疫排斥反应防治研究进展

同种异体角膜移植是角膜病致盲患者复明的终末治疗手段,但移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的首要原因,尤其在高危角膜移植(新生血管、多次角膜移植及活动性炎症)免疫排斥反应高达50%以上。因此,预防角膜移植排斥反应发生是角膜移植成功的关键。本文针对角膜移植排斥反应发生机制,对目前防治角膜移植免疫排斥反应等研究热点进行综述。     

角膜移植术后排斥反应的临床研究

目的探讨穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)后排斥反应发生的规律。方法163例(163眼)角膜病患者行PKP手术,分别于术后1～7d、半月、1月、3月、6月、12月、15月、18月、24月、36月角膜病专科检查,观察患者术后排斥反应发生率、发生时间及治疗效果。结果163例(163眼)PKP手术后有47眼发生了排斥反应,其中角膜溃疡及新生血管化角膜组排斥反应发生率最高;而圆锥角膜组排斥反应发生率低。结论不同疾病的穿透性角膜移植术后排斥反应发生率不同,排斥反应的发生与术前植床情况、手术设计与操作、术后预防及治疗等有关。     

CD86在大鼠角膜移植排斥反应中的表达及意义

目的 观察大鼠角膜组织中共刺激分子CD86(B7-2)的原位表达，以了解共刺激分子在大鼠角膜移植排斥反应中的作用和意义。方法 制作大鼠角膜移植模型，观察角膜透明度、新生血管。采用免疫组化法检测CD86在角膜、脾脏组织中的表达。结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管，角膜水肿、混浊，基质增厚。CD86在正常的角膜组织中无阳性表达；在移植后出现急性排斥反应的角膜上皮层中有大量阳性细胞表达。在脾脏的阳性细胞表达与文献报道的一致。结论 共刺激分子CD86在移植后发生排斥的角膜组织中的阳性表达，可能与免疫排斥反应有关。     

青藤碱防治角膜移植排斥反应的实验研究

目的观察青藤碱滴眼液对大鼠穿透性角膜移植术后急性排斥期免疫排斥反应的影响。方法建立Wistar→SD大鼠同种异体穿透性角膜移植动物模型,受者随机分为生理盐水对照组(A组),0.5%SIN(B组),1%SIN(C组),2%SIN(D组),术后连续观察,并对各组大鼠角膜植片存活情况和排斥反应指数进行评分比较,评价药效。结果术后各组角膜移植排斥指数及发生角膜移植排斥时间,A组与B组,A组与C组,A组与D组,B组与C组,C组与D组比较差异均有显著性(P均<0.05);B组与D组比较差异无显著性(P>0.05)。结论SIN滴眼液可以有效的防治角膜移植免疫排斥反应,1%SIN滴眼液更有效。     

免疫细胞在角膜移植排斥反应中作用的研究进展

角膜无血管和淋巴管,处于相对的"免疫赦免"状态,但仍可因细胞介导的排斥反应,植片在移植后1周左右被排斥.角膜移植排斥反应是多种免疫细胞和免疫因子参与的、复杂的免疫反应过程.主要就近年来各类免疫细胞在角膜移植排斥反应中作用的研究进展做一综述.     

穿透性角膜移植手术排斥反应的观察与护理

角膜移植是角膜盲患者复明的最有效手段。角膜由于缺乏血管和淋巴管 ,因此具有相对的免疫赦免性 ,角膜移植手术的成功率也较其他器官移植高。 2 0世纪 50年代初 ,Ｍａｕｍｅｒｎｅｅ等通过实验证实供体角膜移植后会发生排斥反应[1 ] 。目前 ,角膜移植术后排斥反应仍是导致移植失败的主要原因。而护理人员在手术前后做好观察与护理 ,对于防止排斥反应的发生或减轻其影响也是相当重要的。现将我科于 1 999年 8月 - 2 0 0 0年 1 2月施行的 1 0 7例穿透性角膜移植手术病人的护理情况总结如下。1　资料和方法1.1　一般资料　　接受角膜移植手术病…     

角膜移植排斥反应与外周血及泪液中免疫球蛋白的相关性研究(摘要)

目的观察角膜移植排斥反应与无排斥反应时外周血与泪液中免疫球蛋白的比较以及未排斥反应组与老年性白内障术后泪液中IG的比较．方法分别采集角膜移植术者及老年性白内障行ECCE术后各期泪液及外周血，以放射免疫法分别检测各期的IgG,SigA,LF进行统计学处理．结果角膜移植术正常组与排斥反应发生组血清中的IG无显著性差异(P>0.05)．角膜移植排斥反应发生组泪液中IgG含量升高，随着排斥反应的治愈，IgG含量趋于正常(P<0.05)．而LF含量则呈下降，当排斥反应治愈时，LF水平亦恢复正常(P<0.05)．角膜移植无排斥反应组术后各期泪液中IgG及sIgA的含量均高于老年性白内障行ECCE+IoL术组(P<0.05)．结论角膜移植术后，泪液中的IgG,sIgA,LF呈一规律变化曲线，当排斥反应发生时，IgG水平异常升高，LF水平呈下降趋势，检测泪液中的IG含量，有助于预防角膜移植排斥反应的发生和排斥反应是否治愈的参考依据．     

基因治疗与角膜移植免疫耐受

角膜移植是组织或器官移植中成功率最高的一种手术，是目前治疗角膜盲最为有效的方法，但是术后免疫排斥反应仍是引起同种异体角膜移植尤其高危角膜移植手术失败的首要原因。随着近代分子生物学和免疫学技术的迅速发展，利用基因治疗技术将抑制免疫排斥反应的基因转入角膜防治移植免疫排斥反应成为很有希望的新手段。本文主要对近年来基因治疗诱导角膜移植免疫耐受的主要策略进行简要综述。     

环孢素A联合地塞米松长期滴眼对高危角膜移植术后免疫排斥反应的影响

目的探讨长期应用环孢素A(Cyclosporin A,CsA)联合地塞米松滴眼液对高危穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的防治效果及其安全性..方法42例(42眼)高危穿透性角膜移植术后患者,术后3个月随机分为二组:Ⅰ组为实验组23例23眼,应用1%CsA和0.1%地塞米松溶液滴眼,每日各2～3次,交替用药,术后6个月后地塞米松浓度改为0.05%,每日各2次,交替用药,直至术后1年;Ⅱ组为对照组19例19眼在术后3月改为单纯1%CsA滴眼,每日3次,直至术后1年.所有病例随访观察1年以上.结果42眼PKP术后发生角膜植片免疫排斥反应11眼(26.19%),其中I组4眼(17.39%),Ⅱ组7眼(36.84%),差异具有显著性(P＜0.05).其它并发症的发生率两组间无显著性差异.术后患者视力均较术前明显提高,差异具有显著性(P＜0.05).结论较长期应用1%CsA联合地塞米松滴眼,可以安全、有效地降低高危PKP术后植片免疫排斥反应发生率,从而提高穿透性角膜移植的成功率.