化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo/TAZ信号通路及相关蛋白TAZ、LATS2、MST1的影响

目的:研究化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hippo/TAZ信号通路及其相关蛋白转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)、肿瘤抑制激酶(LATS2)、哺乳动物不育系20样激酶(MST1)表达的影响。方法:采用联合造模法建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型成功后随机分为模型组、维酶素0.06 g/kg组、化浊解毒方7、14、28 g/kg组,灌胃治疗12周。采用HE染色法观察胃黏膜组织病理改变,蛋白质印记法(Western Blot)、实时荧光定量PCR技术检测胃黏膜组织中TAZ、LATS2、MST1蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠胃组织TAZ mRNA和蛋白表达水平显著升高,LATS2、MST1 mRNA和蛋白表达水平显著降低;与模型组相比,化浊解毒方组和维酶素组大鼠一般状态、胃黏膜组织病理变化均改善,胃黏膜组织TAZ蛋白和基因表达水平降低,LATS2、MST1蛋白和基因表达水平升高,并且治疗组中以化浊解毒方28 g/kg组作用最为显著。结论:化浊解毒方在CAG大鼠模型中可通过下调胃黏膜组织中TAZ蛋白和基因表达水平,上调LATS2、MST1蛋白和基因的表达水平而起作用,28 g/kg化浊解毒方能显著改善胃黏膜病理情况,在Hippo/TAZ信号通路的调节过程中,下调TAZ蛋白和基因,上调LATS2、MST1均优于维酶素组。     

Collagen Ⅴ在推拿促进长期大负荷运动大鼠肌肉干细胞自我更新中的作用研究

目的：观察推拿对长期大负荷运动大鼠骨骼肌损伤修复、后肢抓力及Collagen Ⅴ表达的影响，探讨推拿促进大鼠肌肉干细胞自我更新的机制。方法：32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组（C组）、长期大负荷运动组（E组）、长期大负荷运动+推拿组（ET组）、长期大负荷运动+假推拿组（ES组）。C组不做任何处理，E组、ET组和ES组进行4周大负荷跑台运动制备长期大负荷运动损伤模型；E组不予任何干预；ET组于每次运动后6h予以推拿干预；ES组于每次运动后6h仅予以抚摸干预。测定初始及4周后大鼠的体重和后肢抓力。末次干预后24h取大鼠两侧腓肠肌，采用透射电镜观察肌纤维超微结构变化；免疫组织化学染色检测Collagen Ⅴ表达水平；实时荧光定量PCR检测Col5a1和Col5a3 mRNA表达水平；Western Blot检测Pax7、MyoD和Myf5蛋白表达水平；双重免疫荧光染色检测Pax7与Collagen Ⅴ共定位。结果：与C组相比，E组、ES组和ET组大鼠后肢抓力增加值差异显著（P<0.01），E组和ES组超微结构均出现肌原纤维断裂等变化，E组和ES组Collagen Ⅴ、Pax7、MyoD、Myf5、Col5a1和Col5a3 mRNA以及Pax7与Collagen Ⅴ共定位表达显著降低（P<0.05）；与E组相比，ET组后肢抓力增加值差异显著（P<0.05），超微结构表现良好，Collagen Ⅴ、Pax7、MyoD、Myf5、Col5a3 mRNA以及Pax7与Collagen Ⅴ共定位表达显著升高（P<0.05）。结论：推拿可通过上调Collagen Ⅴ表达，促进大鼠骨骼肌肌肉干细胞自我更新，从而加速修复长期大负荷运动诱发的超微结构损伤，增强肌肉力量。     

自体血穴位注射对哮喘大鼠肺组织GATA 3和T-bet蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察自体血穴位注射对哮喘大鼠免疫学机制的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组(8只)、模型组(10只)、生理盐水穴位注射组(10只)、自体血穴位注射组(10只)和地塞米松腹腔注射组(10只)。后4组通过腹腔注射鸡卵蛋白(OVA)加氢氧化铝混合溶液每周1次致敏,2周后每天OVA超声雾化激发哮喘。自体血组穴位注射自体血(0.4mL/穴),"肺俞"穴和"肾俞"穴轮流取穴,隔天1次,共6次。免疫组化半定量法测肺中GATA 3和T-bet蛋白,RT-PCR法测其mRNA的表达。结果:模型组GATA 3、GATA 3mRNA表达和GATA 3mRNA/T-bet mRNA的比值(G/T比)均明显高于正常组(P<0.01),T-bet mRNA表达明显低于正常组(P<0.01)。自体血组GATA 3、GATA 3mRNA的表达及G/T比均明显低于模型组(P<0.01),T-bet及其mRNA的表达均明显高于模型组(P<0.01)。盐水穴位注射对哮喘模型无明显调节效果。地塞米松对GATA 3的作用与自体血相当,但对T-bet的调节不明显。结论:自体血穴位注射可以良性调节辅助性T细胞所分泌细胞因子的失衡,其作用与地塞米松腹腔注射相当。     

滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化和转化生长因子β1/ Smads 信号通路的影响

目的探讨滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads3信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,滋膵通脉饮高、低剂量组(17.6 g·kg^-1,8.8 g·kg^-1)和依那普利组(0.53 mg·kg^-1),空白对照组予以腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液,余组大鼠采用高脂高糖饲料喂养+单次腹腔注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。造模结束后,模型组和空白对照组灌服同等容积的蒸馏水,余组分别给与药物干预,共干预4周。4周后观察心脏指数和左室指数,PCR技术检测大鼠心肌组织转化生长因子(TGF)-β1 mRNA、Smads3 mRNA和Smads7 mRNA的表达,蛋白印迹法检测心肌组织TGF-β1、Smads3、Smads7的蛋白表达。Masson染色观察大鼠心肌结构的改变,计算胶原容积分数。结果与空白对照组比较,模型组心脏指数和左室指数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组心脏指数和左室指数明显降低(P<0.05,P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。Masson染色结果显示:空白对照组大鼠肌纤维排列整齐,肌纤维连接完好。模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,可见纤维断裂。高剂量组大鼠肌纤维排列整齐,可见极少量胶原纤维。低剂量组大鼠肌纤维排列稍紊乱。依那普利组可见极少量胶原纤维,肌纤维断裂不明显。与空白对照组比较,模型组大鼠胶原容积分数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组胶原容积分数明显降低(P<0.01)。结论滋膵通脉饮能抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化,改善心肌重构,其作用可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。     

野山参和园参对术后疲劳综合征大鼠骨骼肌炎症反应的影响

目的探讨野山参和园参对术后疲劳综合征鼠骨骼肌炎症反应的作用。方法 48只大鼠随机分为对照组、模型组、园参组和野山参组,每组12只。术后1、3 d,抓力试验检测骨骼肌功能;术后3 d,荧光RT-PCR法检测促炎因子mRNA水平,Western blot法检测腓肠肌炎症和萎缩相关蛋白表达,HE染色法观察骨骼肌形态。结果术后3 d与模型组比较,园参组大鼠最大抓力显著增强(P0.05),腓肠肌IL-1β、TNF-α mRNA表达及p-p38、p-NF-κB、atrogin-1、Murf-1蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,野山参组大鼠最大抓力显著增强(P0.05),腓肠肌IL-1β、TNF-α mRNA及p-p38、p-NF-κB、atrogin-1、Murf-1蛋白表达显著降低(P0.05);与园参组比较,野山参组大鼠最大抓力增强(P0.05),腓肠肌TNF-α mRNA表达及Murf-1蛋白表达显著降低(P0.05)。HE染色结果显示,对照组肌纤维束直径较宽,肌束间隙紧密;模型组肌纤维束直径较小,肌束间隙较宽;园参组和野山参组肌纤维束形态较模型组得到改善。结论野山参和园参改善了术后疲劳综合征大鼠的骨骼肌炎症反应,且野山参效果优于园参。     

养精种玉汤调控卵巢储备功能下降模型大鼠卵巢原始卵泡启动的作用机制研究

目的 基于长链非编码RNA研究养精种玉汤调控卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠原始卵泡启动的作用机制。方法 3日龄雌性大鼠分离卵巢后进行体外培养,设置空白组、模型组、脱氢表雄酮组和中药高、中、低剂量组,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,分别予相应含药血清培养。HE染色观察生殖细胞并对卵泡计数,Western blot检测卵巢组织抗米勒管激素（AMH）、骨形态发生蛋白15(BMP15)、磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、MST、转化生长因子（TGF）-β1、p-Smad1蛋白表达,RT-PCR检测卵巢组织AMH、BMP15、PTEN、MST、LTCONS-00011173、TGF-β1、Smad1 mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组原始卵泡及生长卵泡数量均减少（P<0.05）,卵巢组织AMH、BMP15、TGF-β1、p-Smad1蛋白表达降低（P<0.05）,PTEN、MST蛋白表达升高（P<0.05）,AMH、BMP15、TGF-β1、Smad1 mRNA表达降低（P<0.05）,PTEN、MST、LTCONS-00011173 mRNA表达升高（P<...     

电针对PCOS合并IR大鼠下丘脑瘦素/Kisspeptin信号的影响

目的:通过电针对多囊卵巢综合征(PCOS)合并胰岛素抵抗(IR)大鼠生殖内分泌与代谢功能的同时调节,探讨其与影响下丘脑瘦素(LEP)/Kisspeptin(KP)信号传导的关联性。方法:3周龄SD雌性大鼠以硫酸普拉睾酮钠皮下注射联合高脂饲料喂养21 d建立PCOS合并IR模型,建模后随机分为模型组、西药组、电针组,继续高脂饲料喂养。另设空白组,每组8只。电针组大鼠予三阴交、关元、中脘、足(后)三里穴位电针治疗,西药组大鼠予二甲双胍溶液灌胃,连续治疗28 d。检测血清T、LH、FSH、LEP、FINS和FPG水平变化,计算HOMA-IR;HE染色观察卵巢形态学变化;实时PCR法检测下丘脑LEP mRNA、Kiss-1 mRNA和GnRH mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测下丘脑LEP和KP蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠性激素紊乱、糖脂代谢异常(P<0.01),下丘脑LEP mRNA及蛋白表达降低且Kiss-1 mRNA、GnRH mRNA及KP蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠血清LH、LEP水平及HOMA-IR降低(P<0.01或P<0.05),下丘脑LEP mRNA及蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05),GnRH mRNA表达降低(P<0.05);西药组大鼠血清T、LH、LEP、FINS水平及HOMA-IR降低(P<0.05或P<0.01),下丘脑LEP mRNA表达升高(P<0.01)。西药组和电针组大鼠卵巢结构均较模型组改善,电针组大鼠血清T、LH、FSH、LEP、FINS、FPG水平,HOMA-IR,下丘脑LEP mRNA、Kiss-1 mRNA及GnRH mRNA表达,以及LEP及KP蛋白表达与西药组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针干预PCOS合并IR大鼠,可影响下丘脑LEP/KP信号传导,可能是电针同时调节糖脂代谢与生殖内分泌治疗PCOS的机制。     

桔梗皂苷-D诱导Hela细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究桔梗皂苷-D对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将体外培养的Hela细胞系随机分为4组,对照组常规培养,桔梗皂苷-D低、中、高剂量组(7,14,28μmol/L)分别加入相应浓度桔梗皂苷-D进行培养。各组细胞培养24 h后,收集细胞用于后续检测。采用CCK8法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡比率,采用TUNEL染色法观察细胞核的形态变化,采用RT-PCR法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子(MST、LATS、YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin)mRNA表达水平,采用Western blot法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子蛋白表达水平。结果与对照组比较,各组桔梗皂苷-D细胞活力随桔梗皂苷-D浓度增高而显著下降(P均0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组G1期细胞比例显著增高(P均0.05),且G1期细胞占比随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高,桔梗皂苷-D中、高剂量组G2期及S期Hela细胞占比显著降低(P均0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组TUNEL染色阳性细胞核的比率和早期凋亡细胞比例均显著增高(P均0.05),且随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐升高(P均0.05),YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐降低(P均0.05)。结论桔梗皂苷-D能显著抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,下调该通路下游YAP、TAZ的过度表达,上调促凋亡因子Bax、P53、Caspase-3表达,从而使Hela细胞发生G1期阻滞,促进Hela细胞凋亡。     

基于Integrin-YAP/TAZ通路探讨理气活血滴丸对YAP基因转染干预内皮细胞及动脉粥样硬化的影响

目的 探讨理气活血滴丸防治动脉粥样硬化的可能作用机制。方法 SD大鼠每15只分为理气活血滴丸低、高剂量组、对照组,理气活血滴丸低、高剂量组按37.5、150mg·kg^-1·d^-1灌胃,对照组予2mL蒸馏水灌胃,96h后取血离心取上层血清;构建重组Yes相关蛋白(YAP)基因腺病毒和空载腺病毒转染的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别加入理气活血滴丸低、高剂量组血清和对照血清进行培养,另外设立HUVECs正常培养组和不加入血清培养的YAP基因腺病毒转染组、空载腺病毒转染组,共9组进行检测;采用EdU法检测各组细胞增殖情况,采用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况,采用Western blot法测定各组细胞中YAP、含PDZ结合序列的转录活化共因子(TAZ)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、结缔组织生长因子(CTGF)、血管生成诱导剂61(CYR61)蛋白表达。结果 YAP腺病毒转染模型组对比正常细胞组、空载腺病毒转染模型组的HUVECs增殖增多、凋亡减少(P<0.01)及其中YAP、TAZ、JN...     

中医治疗急性腰部伤筋概况

急性腰部伤筋作为一种与现代社会相伴随的骨伤科常见病、多发病,属中医“瘀血腰痛”范畴,占临床腰痛的12％以上,占骨伤科门诊量的10％。分析急性腰部伤筋的常见类型,介绍手法治疗、针灸治疗、中药治疗、物理治疗方法。需进一步围绕手法、中药及针灸等治疗方案研究探索,制定更安全、简便、有效、操作性较强的规范疗法,合理有效的指导急性腰部筋伤的临床治疗应用。     

中医治疗急性腰部伤筋概况

急性腰部伤筋作为一种与现代社会相伴随的骨伤科常见病、多发病,属中医"瘀血腰痛"范畴,占临床腰痛的12%以上,占骨伤科门诊量的10%。分析急性腰部伤筋的常见类型,介绍手法治疗、针灸治疗、中药治疗、物理治疗方法。需进一步围绕手法、中药及针灸等治疗方案研究探索,制定更安全、简便、有效、操作性较强的规范疗法,合理有效的指导急性腰部筋伤的临床治疗应用。     

骨骼肌失神经损伤后肌卫星细胞的研究进展

骨骼肌卫星细胞的增殖分化是决定骨骼肌失神经损伤后修复的重要因素,从肌卫星细胞特性、失神经后卫星细胞的变化以及细胞因子的变化对卫星细胞影响的不同方面对近年来的研究做一综述。     

针刀治疗菱形肌损伤临床研究进展

菱形肌损伤是上背痛常见原因之一,由于其特殊的解剖位置和复杂的病因病理,在临床治疗过程中存在着难度大、安全性存疑、治疗不完全及易复发等问题,常发展成顽固性背痛。常规治疗方法有针灸、推拿、物理治疗等,但疗效不佳。针刀疗法可通过分离粘连的软组织、恢复失衡的人体力学平衡、改善局部微环境等作用途径治疗该病,具有较好的临床疗效。通过总结已有的病因病机、治疗原理和临床常用的针刀术式研究,结合临床实践认为,针刀治疗该病较为安全有效。     

武春发治疗伤筋手法简介

北京中医学院东直门医院骨伤科主任医师、教授武春发老师,勤于学习,刻苦钻研,治学严谨,不拘泥门派,团结全国骨伤界同仁,为推动中医骨伤科事业的发展和走向世界作出了贡献.他主持编写的<中医骨伤科学>是解放后骨伤科第一部最完整的学术专著.武老通过数十年的临床实践,对伤筋的手法治疗积累了丰富的经验,形成了独特的见解,兹介绍如下,以飨读者.     

武春发治疗伤筋手法简介

北京中医学院东直门医院骨伤科主任医师、教授武春发老师,勤于学习,刻苦钻研,治学严谨,不拘泥门派,团结全国骨伤界同仁,为推动中医骨伤科事业的发展和走向世界作出了贡献.他主持编写的<中医骨伤科学>是解放后骨伤科第一部最完整的学术专著.武老通过数十年的临床实践,对伤筋的手法治疗积累了丰富的经验,形成了独特的见解,兹介绍如下,以飨读者.     

浅谈心肌缺血再灌注的中医病机及其防治

目的:总结心肌缺血再灌注的中医病机及其防治。方法:归纳相关文献资料,当代研究成果,结合临床从中医的角度探讨其中医病机,并提出几点中医的防治原则。结论:心肌缺血再灌注的中医病机为气虚血瘀、气滞血瘀、热毒积聚、痰瘀互结、气血亏虚、阴阳虚损。其治疗应以益气活血,行气化痰,清热解毒为其根本大法,同时适当辅以补益之法。     

手法对家兔不同急性损伤骨骼肌卫星细胞影响观察

目的：观察手法对急性损伤骨骼肌卫星细胞增殖的影响,分析机械损伤和失神经因素在肌卫星细胞增殖中的作用和手法促进骨骼肌增殖的机制与途径。方法：取6月龄新西兰家兔258只建立家兔单纯钝挫伤、单纯失神经、钝挫伤＋失神经动物模型,于造模后第2天行手法治疗,于造模后第1、2、3周和第1、2、4、6个月各取1小组家兔观察肌卫星细胞数目变化情况,按照日期对肌卫星细胞的增殖情况作一连续动态观察。结果：失神经后骨骼肌卫星细胞数目比无神经损伤组增加明显,在第3周达到峰值,而后迅速下降,4个月后低于正常水平。结论：神经因素在骨骼肌卫星细胞的激活与增殖中有重要作用,手法可以加快失神经早期骨骼肌卫星细胞激活与增殖速度,可能加速了肌卫星细胞向成肌纤维的肌组织转化。     

论人体四肢关节伤筋的中医推拿治疗

推拿手法对柔软四肢韧带有直接促进和调整其功能活动的作用,亦可加速软组织损伤的恢复。气血为生命之本。血行脉中,阴阳相贯,如环无端。气随血行,濡养周身。若脉络不通或筋骨粘连而致血不能行,则必生灾患。因此施术之时必推以＂动＂之,使脏腑升降有常,气血循行顺畅,骨节灵活有力。四肢关节损伤临床上比较多见,久治不愈、反复发作、给患者造成一定的痛苦,临床上根据受伤时外力的性质和受伤的部位,分为扭伤与挫伤两种类型,现就探讨其病因、症状、临床表现和治疗方法。     

芦荟大黄素对动脉损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨中药大黄的活性提取成分———芦荟大黄素对兔髂动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞的增殖动力学的影响。方法 :纯种日本大耳白兔髂动脉内皮剥脱术后 48h ,取中膜做平滑肌细胞原代培养。指数增长期中的平滑肌细胞同步化于G0 期后 ,加入浓度梯度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 5g/L的芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,2 4h后 ,用3H TdR脉冲标记 6h ,然后测平滑肌细胞中TdR掺入量 (cpm ,每份样品每分钟脉冲数 )。同样地 ,细胞同步化于G0 期后 ,加入 2 0mg/L芦荟大黄素于含 1 0 %胎牛血清的细胞培养液中 ,作用 2 4h后 ,用流式细胞仪对细胞周期时相进行了测定。以上两实验与对照组加入等体积的细胞培养液。结果 :药物组与对照组比较 ,3H TdR的掺入量有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,药物浓度为 1 0 - 1 ～ 1 0 - 2g/L时 ,抑制率 (对照组cpm -药物组cpm/对照组cpm× 1 0 0 % )高达 90 %以上。药物对平滑肌细胞的抑制呈剂量依赖关系 ,药物浓度越高 ,抑制作用越大。与对照组比较 ,加入芦荟大黄素后 ,G0 /G1 期细胞百分比升高 ,S期百分比下降。细胞由G0 期向S期的转化受到阻滞。结论 :芦荟大黄素是一种强平滑肌细胞抑制剂 ,这种药理作用在体内可能有利于减轻平滑肌细胞的增殖 ,从而减轻导致动脉损伤后再狭?