大鼠颅脑损伤急性期水通道蛋白4表达变化的研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在大鼠重型颅脑损伤时的表达变化及其与脑水肿间的关系。方法98只成年雄性Wistar大鼠,随机分为对照组及实验组(伤后0.5、2、6、12、24、48、72 h共7组,对照组不打击)。制作大鼠液压冲击颅脑损伤模型,分别于伤后0.5、2、6、12、24、48、72 h采用干湿比重法测脑组织含水量,半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织AQP4 mRNA表达及其变化。结果脑组织AQP4 mRNA在伤后0.5 h开始表达上调,2、6、12 h依次增高,24 h达到峰值(P<0.05),72 h时仍维持较高水平。脑组织含水量与AQP4 mRNA表达变化一致。经相关性分析,AQP4 mRNA的表达与脑组织含水量呈正相关(r=0.095,P<0.05)。结论重型脑损伤急性期,AQP4 mRNA表达变化与颅脑损伤后脑水肿的形成和发展密切相关。AQP4可能参与重型脑损伤后脑水肿的形成并起重要作用。     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响

目的:观察雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响。方法:Wistar大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发DN大鼠模型。大鼠随机分三组,分别为:对照组、模型组和雷帕霉素治疗组,给药8周,实验第2,4,8周,测定24h尿蛋白定量;治疗8周后,定时定量PCR法测肾小管间质OPN mRNA表达;免疫组化法检测肾小管间质TGF-β1表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量明显升高(P<0.05),肾组织TGF-β1、OPN表达明显增加(P<0.01)。雷帕霉素治疗组大鼠24h尿蛋白定量明显降低,肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达减少,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能减少DN大鼠尿蛋白,下调肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达水平,减轻DN肾小管间质病变。     

乌司他丁对大鼠脑梗死灶周围脑组织ICAM-1表达的影响

目的探讨乌司他丁对大鼠脑缺血梗死灶周围组织ICAM-1表达的作用。方法 54只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和乌司他丁干预组各18只。采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。乌司他丁干预组于造模成功后0.5h经尾静脉注入乌司他丁注射液1万U,术后6、12、24h断头取脑,采用免疫组织化学法测定梗死灶周围脑组织ICAM-1表达水平。结果脑缺血损伤后,缺血坏死周边区ICAM-1的表达逐渐增多,并于24h达高峰;乌司他丁干预组术后6、12、24h脑组织中ICAM-1表达较模型对照组明显降低(P<0.01)。结论脑缺血损伤可诱导缺血周边组织ICAM-l表达,乌司他丁可通过降低脑梗死大鼠ICAM-1表达,从而减轻炎症反应,保护脑组织。     

茵陈五苓散对肝硬化腹水大鼠模型的影响

目的研究茵陈五苓散对肝硬化腹水大鼠血清AQP2表达和NO、NT-1水平的影响。方法采用苯巴比妥灌胃联合四氯化碳腹腔注射复制肝硬化腹水模型。将成模后大鼠随机分为模型组、螺内酯片组(0.066g·kg^-1)和茵陈五苓散低、中、高剂量组(生药4.3, 8.6, 17.2 g·kg^-1),每组10只,并选取10只正常大鼠灌服生理盐水作为空白组。硝酸还原酶法测定大鼠血清NO、ET-1的水平。RT-PCR测定大鼠肝组织AQP2 mRNA水平,Western blotting检测大鼠肝组织AQP2蛋白含量。结果与空白组大鼠比较,模型组大鼠血浆NO和ET-1水平显著升高(P<0.05)。与模型组大鼠比较,茵陈五苓散各剂量组和螺内酯片组大鼠血清NO、ET-1水平显著降低(P<0.05)。与空白组大鼠比较,模型组大鼠肝脏AQP2 mRNA和蛋白含量显著下降(P<0.05)。与模型组大鼠比较,茵陈五苓散各剂量组和螺内酯片组大鼠肝脏AQP2m RNA和蛋白含量显著增高(P<0.05)。结论茵陈五苓散治疗肝硬化腹水的机制与降低血清NO、ET-1水平及调节肝脏AQP-2基因表达有关。     

基于水通道蛋白的知母利水功效研究

目的 通过建立水负荷模型,观察不同剂量知母水提物对大鼠尿量及水通道蛋白（AQP）相关指标的影响,探究其利水功效。方法 将实验动物分为对照组、模型组和知母水提物高、中、低剂量（4.56、3.04、1.52 mg/kg）组,置于代谢笼中,每天9：00时ig给药,对照组和模型组给予等体积蒸馏水,连续3 d,记录每日饮水量、日间8 h尿量、夜间12 h尿量。第4天除对照组外其余各组大鼠ip生理盐水5 mL,同时ig生理盐水5 mL,连续收集6 h尿量,分别记录0~2、2~4、4~6 h尿量。水负荷实验结束后,取各组大鼠的气管、肝脏、肾脏、大肠、小肠、胰腺、心脏、肺脏、唾腺。酶联免疫法检测气管中AQP3、AQP4,肝脏中AQP9,肾脏中AQP2,小肠中AQP4,大肠中AQP2,胰腺中AQP3,心脏中AQP1,肺脏中AQP3、AQP4,唾腺中AQP5蛋白表达。结果 高剂量知母水提物的利水作用起效较慢,与对照组比较,正常大鼠第2、3天夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,高剂量组水负荷大鼠2~4、4~6 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,气管AQP4、肝脏AQP9、肾脏AQP2、胰腺AQP3、心脏AQP1蛋白表达均显著下降（P<0.05、0.01）;中剂量利水作用起效较快,与对照组比较,正常大鼠第1天日间8 h尿量、夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,中剂量组水负荷大鼠0~2、2~4 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,小肠AQP4,肺脏、气管AQP3,心脏AQP1蛋白含量显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,知母水提物低剂量组的水负荷大鼠肺、小肠AQP4,大肠、气管AQP3和肝脏AQP9的蛋白表达显著降低（P<0.05、0.01）。结论 知母水提物通过抑制AQP的表达,抑制机体对水的重吸收,起到利水作用。     

吡拉格雷钠对氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞水肿及AQP4表达的影响北大核心CSCD

目的探讨氧糖剥夺并复氧培养后星形胶质细胞水肿及其水通道蛋白4(AQP4)表达的变化以及吡拉格雷(TSF)对其表达变化的影响。方法体外培养原代星形胶质细胞,建立氧糖剥夺/复氧细胞水肿模型,并随机分为正常组、氧糖剥夺/复氧损伤(OGD/Reox)组、奥扎格雷钠(Ozagrel)阳性对照组和TSF治疗组,在氧糖剥夺/复氧损伤后6、12、24和48 h 4个时间点测定细胞体积变化,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测细胞损伤及存活情况,Western blot法检测各组细胞膜AQP4蛋白的表达水平,RT-PCR法检测各组细胞AQP4 m RNA的转录水平。结果星形胶质细胞经缺氧再复氧处理,随着复氧时间的延长细胞损害加重(P<0.05,P<0.01);TSF治疗组的细胞体积明显低于OGD/Reox损伤组(P<0.05);给予TSF治疗后细胞在氧糖剥夺/复氧后的LDH漏出率较OGD/Reox损伤组明显降低(P<0.05);TSF治疗组与单纯氧糖剥夺/复氧相比较MTT检测细胞活力明显升高(P<0.05);给予TSF治疗组,AQP4表达明显降低(P<0.05);与Ozagrel相比较差异无显著性。Western blot及RT-PCR检测蛋白及m RNA的表达水平,给予TSF治疗组的AQP4蛋白及m RNA表达均明显降低(P<0.05)。结论TSF治疗能明显减轻体外氧糖剥夺/复氧损伤引起的星形胶质细胞水肿,可能是通过降低氧糖剥夺后AQP4的表达水平而实现。     

腹泻大鼠结肠水通道蛋白4表达与分布的研究

目的检测水通道蛋白4(AQP4)在腹泻大鼠结肠的表达和分布,探讨AQP4与肠道水代谢紊乱性疾病的关系。方法用20%的甘露醇灌胃制备大鼠渗透性腹泻模型,采用免疫组织化学方法对各组大鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4进行定位、定量分析。结果①腹泻组和对照组大鼠升、降结肠黏膜都有AQP4表达,且升结肠表达量高于降结肠;②腹泻组大鼠升、降结肠黏膜AQP4表达均较对照组减少(P<0.01),9h时腹泻最严重,AQP4蛋白减少亦最显著(P<0.01);③AQP4主要表达于细胞膜,胞质仅有少量表达。结论①AQP4在升结肠表达高于降结肠,这与肠腔内水分主要是在近段吸收相一致;②腹泻状态下大鼠结肠黏膜AQP4表达下调,导致结肠对肠腔内水分的吸收减少,引起大便稀薄,含水量增加形成腹泻;③AQP4主要表达于细胞膜上,这与其功能密切相关。     

孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠血脑屏障通透性及脑水肿的影响

目的研究孕酮(PROG)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠血脑屏障(BBB)通透性和脑水肿的作用,并进一步探讨其潜在的机制。方法 7 d龄SD大鼠96只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血(HI)组和PROG组。建立HIBD动物模型,HI后24 h,伊文思蓝示踪剂检测BBB;干/湿法测定脑含水量;免疫组织化学法观察大脑皮质水孔通道蛋白4(AQP4)表达。结果正常组和假手术组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达差异无显著性(P>0.05);HI组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显高于假手术组(P<0.01);PROG组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显低于HI组(P<0.05)。结论 PROG通过减轻BBB破坏和脑水肿对HIBD新生大鼠起脑保护作用,PROG的脑保护作用可能与下调新生大鼠脑皮质AQP4的表达有关。     

孕酮对幼年大鼠感染性脑水肿水通道蛋白4表达的影响

目的 观察内毒素(LPS)致幼年大鼠感染性脑水肿后,腹腔注射孕酮(Prog)对水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 将90只幼年大鼠随机分为对照组(C,n=10),内毒素组(LPS,n=40)和内毒素+孕酮组(LPS+Prog,n=40).建立LPS致大鼠感染性脑水肿模型后1 h,LPS+Prog组和LPS组分别腹腔注射孕酮和生理盐水,以后每6小时注射一次.手术后6、12、24和48 h处死动物,分别行脑组织含水量的测定,用免疫组化和RT-PCR检测脑组织内AQP4表达水平.结果 LPS组脑组织含水量明显高于C组和LPS+Prog组(P<0.01).在LPS注射6 h时,幼鼠脑组织 AQP4表达明显增加,12 h达高峰.LPS+Prog组在LPS注射后12 h时,脑组织中AQP4在蛋白水平和mRNA水平的表达均低于LPS组(P<0.01).结论 孕酮可能在转录和翻译水平下调AQP4的表达,从而抑制LPS诱导的幼年大鼠感染性脑水肿的发生发展.     

复方黄金香提取液对创伤性脑水肿大鼠AQP4表达的影响初探

目的通过观察复方黄金香提取液对水通蛋白4（aquaporin4,AQP4）表达的影响,探讨其治疗创伤性脑水肿的相关机制。方法SD大鼠40只．参照Feeney法制作脑损伤模型（TBE模型）．随机分组：祛瘀通腑汤组大鼠（10只）致伤后20min予以祛瘀通腑汤10mL·kg^-1灌胃,复方黄金香提取液组大鼠（10只）致伤后20min予以复方黄金香提取液10mL·kg^-1灌胃．对照组（10只）和创伤组（10只）同时同法给予相同剂量生理盐水。按12、24、72h分别处死大鼠．取标本分析AQP4表达的影响．并作HE染色。结果“复方黄金香提取液”与“祛瘀通腑汤”相比明显减轻脑水肿．其AQP4表达水平显著下调。病理学证实,“复方黄金香提取液”使脑组织水肿明显减轻．神经元坏死数目明显较少。结论早期应用“复方黄金香提取液”可明显减轻脑水肿程度;下调AQP4表达是其作用机制之一.     

黄体酮对颅脑损伤大鼠脑组织含水量及水通道蛋白-4表达的影响

目的:探讨黄体酮对脑外伤模型大鼠脑组织含水量、水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响机制.方法:SD雄性大鼠165只,随机分为假手术组(55只)、模型组(55只)和黄体酮组(55只),用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型,干湿重法测定脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测脑组织AQP-4蛋白的表达.结果:模型组大鼠伤后各时间点伤侧脑组织含水量、伤灶周围AQP-4蛋白表达水平均明显高于假手术组(均P<0.05);黄体酮治疗组各时间点脑组织含水量、AQP-4表达水平均较模型组降低(P<0.05).结论:黄体酮可以明显减轻创伤后脑水肿,其作用可能与抑制AQP-4在损伤脑组织中的表达有关.     

AG490对大鼠脑液压冲击伤后脑水肿及水通道蛋白4表达的影响

目的研究AG490对大鼠脑液压冲击伤后继发性脑水肿及水通道蛋白4(AQP-4)表达的影响。方法取健康成年雄性SD大鼠104只,按照随机数字表法分为假手术组8只,对照组48只,AG490组48只,对照组及AG490组随机各分为6个亚组分别对应伤后各时间点3h、6h、12h、24h、48h、72h。对照组及AG490组给予液压冲击打击,制作大脑损伤模型;假手术组仅给予颅骨钻孔术不给予液压冲击。AG490组于伤后1小时按照5mg/kg给予腹腔注射AG490,对照组接受等量生理盐水。干湿重法测定脑组织含水量,免疫组织化学法测定脑组织AQP-4蛋白的表达,HE染色后光镜下观察细胞形态学改变。结果 (1)和假手术组比,对照组及AG490组脑组织含水量均升高(P<0.05)。AG490组各时间段均比对照组脑组织含水量少(P<0.05)。(2)AQP-4表达阳性细胞镜下呈棕黄色空泡状。AG490组各时间亚组AQP-4表达水平均较对照组减低(P<0.05)。(3)光镜下见AG490组各时间点均较对照组病理损伤轻。结论脑损伤后急性期应用AG490可以明显减轻创伤后脑水肿,其作用可能与抑制AQP-4在损伤脑组织中的表达有关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP-4表达及依达拉奉治疗效果的研究

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）后脑组织水通道蛋白-4（AQP-4）的表达变化及依达拉奉（edaravone）对其治疗效果的影响。方法：将7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组：假手术组、缺氧缺血模型组（HIBD组）及依达拉奉治疗组,每组各40只。每组根据处死的时间不同又分5个亚组：6、24h、3、5、7d组,每亚组各8只,各组分别于不同时间点处死动物,测脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测AQP-4的表达。结果：AQP-4在缺氧缺血6h即增强,3d达高峰,5～7d逐渐降低（P〈0.01）;治疗组各时间点AQP-4表达水平较HIBD组明显降低（P〈0.01）。结论：AQP-4参与了HIBD脑水肿的发生发展过程,依达拉奉可降低AQP-4的表达,从而减轻脑水肿,这可能是其脑保护作用机制之一。     

尼莫同对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP4 mRNA表达的影响

目的研究大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP_4 mRNA表达及脑水含量的变化,以及尼莫同的干预机制。方法健康Wistar大鼠75只,随机分为假手术组、手术组、尼莫同组,建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别在6h、1d、3d、5d、7d5个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,测定脑水含量,并用RT-PCR法测定AQP_4 mRNA表达。结果手术组大鼠脑水含量及脑组织内AQP_4 mRNA表达在6h后开始升高,3d后达到高峰,较假手术组和尼莫同组明显增高(P<0.05)。结论缺血性脑水肿脑组织内AQP_4 mRNA呈高表达,提示AQP4与脑水肿形成有关,钙离子拮抗剂尼莫同可以降低脑组织内AQP_4 mRNA表达,从而减轻脑水肿程度。     

水通道蛋白4mRNA在大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿中的表达及尼莫地平对其表达的影响

目的：研究大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织AQP4mRNA的表达及脑含水量的变化以及应用尼莫地平对AQP4mRNA表达的影响。方法：健康成年大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、SAH组、尼莫地平组,建立蛛网膜下腔出血模型,分别在6h、1d、3d、5d、7d个时间点断头取脑,测定脑含水量,并用RT-PCR法检测AQP4mRNA表达。结果：SAH组脑含水量及脑组织内AQP4在6h后即增加,随时相递增,3d达到高峰,较假手术组及尼莫地平组明显增高（P＜0.05）。结论：大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿的程度与AQP4的表达成正比,这表明AQP4在蛛网膜下腔出血性脑水肿的病理生理中起着非常重要的作用。尼莫地平可以下调AQP4mRNA的表达,从而减轻脑水肿的程度。     

4℃高渗盐对大鼠心搏骤停脑Caspase-3及GFAP表达的影响

目的探讨4℃高渗盐（HTS）对大鼠心搏骤停（SCA）脑海马组织半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,评价4℃高渗盐对脑的保护作用。方法将30只大鼠随机分为：假手术（A）组、生理盐水（B）组、4℃生理盐水（C）组、HTS（D）组、40CHTS（E）组,每组6只。除A组外．其余各组均于复苏即刻给药。制作窒息致大鼠SCA模型,测定给药后60min各组大鼠血清尿素氮、血糖、电解质,并分别计算出各组血浆渗透压值;记录给药后6h、12h、24h神经功能缺损评分（NDS）;复苏后24h处死大鼠取脑组织检测脑海马Caspases-3及GFAP的表达。结果各组给药后60min血清尿素氮、血糖、电解质、血浆渗透压差异无显著性（P〉0．05）。4℃HTS干预后能提高各时间点NDS（P〈0．05）,但4℃生理盐水和HTS干预后NDS提高不明显（P〉0．05）．4℃HTS、4℃生理盐水、HTS均能抑制脑Caspases-3、GFAP的表达（P〈0．01）。而4℃ HTS作用最显著和假手术组无区别（P〉0．05）。结论SCA后给予4℃HTS能抑制脑海马组织Caspase-3、GFAP表达,对脑组织起保护作用,对机体血电解质、渗透压影响不大。     

脑心通抑制脑缺血诱导的内质网凋亡通路

目的观察脑心通对大鼠缺血脑组织内质网凋亡通路caspase-12表达的影响,探讨其对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护机制。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型。大鼠随机分为假手术组、缺血组以及缺血后脑心通治疗组（n=30）,应用组织学观察、免疫组织化学方法及半定量RT-PCR检测缺血不同时段caspase-12表达变化。结果脑缺血6 h caspase-12转录表达增加,12 h达高峰,24h下降。脑心通治疗组与缺血组同时间在相同脑区比较caspase-12转录表达明显减少。假手术组caspase-12无表达。结论脑心通可抑制脑缺血所致的caspase-12凋亡通路,减轻脑缺血造成的损害。     

感染性休克对大鼠肠上皮水通道蛋白8表达的影响

目的 通过建立大鼠感染性休克模型,探讨其对肠上皮水通道蛋白8（AQP8）表达的影响及与肠组织水肿的关系。方法 32只健康SD大鼠随机分成正常对照组（C组）、感染性休克2h、8h和24h组。采用静脉注射大肠杆菌脂多糖（LPs）制作感染性休克模型。Western blot检测肠上皮AQP8蛋白的表达,同时测定肠组织含水量,并做相关分析。结果 感染性休克组各时间点肠组织含水量均明显升高,与C组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,且以休克后8h时最高（P〈0.05）。C组AQP8呈现低密度带;感染性休克后2h、8h、24h时AQP8密度带明显增强,活性增加（P〈0.05）;休克后8 h时点AQP8密度带更高,蛋白表达更强（P〈0.05）。相关分析表明,肠道组织的含水量与AQP8蛋白表达呈正相关。结论 感染性休克使AQP8表达增加,与感染性休克后肠组织水肿的形成有关。