缝隙连接阻断剂-辛醇对实验性局灶性脑缺血/再灌注半暗带的影响

目的研究Wistar大鼠局灶性脑缺血/再灌注后72 h内不同时间点半暗带面积的变化及缝隙连接（GJ）阻断剂辛醇（Octanol）对半暗带面积的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、辛醇干预组、DMSO溶剂对照组。大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,Zea Longa评分观察行为学变化,免疫组化测定缝隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）表达,甲苯胺蓝染色、焦油紫染色并利用图像分析仪测量半暗带面积。结果各组动物神经功能缺损评分无显著差异;缺血/再灌注后Cx43表达无明显变化;缺血/再灌注30 min开始半暗带面积逐渐扩大,于再灌注6 h达最大,以后逐渐缩小;辛醇干预组半暗带面积较对照组相比明显缩小,坏死神经元数目明显减少。结论脑缺血/再灌注对Cx43的表达无明显影响;缝隙连接阻断剂辛醇可明显缩小局灶性脑缺血/再灌注半暗带面积。     

脑缺血再灌注糖尿病大鼠海马CA1区凋亡基因的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2、Bax在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元损伤中的表达。方法 采用链脲佐菌素（STZ）诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,应用HE染色和免疫组化方法比较糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失、凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。结果 糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失,明显高于缺血再灌注组（P〈0.05）;缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax阳性染色阳性细胞与正常对照组及假手术组比增多,差异显著（P〈0.05）,而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显,差异有显著性（P〈0.05）,其中Bax上调幅度大。结论 糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区细胞发生凋亡,Bcl-2、Bax介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB、表达及神经细胞凋亡的影响

目的：探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-κBp65表达水平及神经细胞凋亡的影响。方法：Wistar大鼠105只,分为假手术组、再灌注组及干预组各35只。干预组阿托伐他汀灌胃20d后,与再灌注组采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分,应用免疫组化、TUNEL法检测阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后NF-κBp65表达及对神经细胞凋亡的影响。结果：与假手术组比较,再灌注组及干预组大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中NF-κBp65表达明显增加（P〈0．01）,缺血再灌注24h达高峰;干预组给予阿托伐他汀钙干预后与再灌注组比较能减少缺血脑组织中NF-κBp65表达（P〈0．01）,减少神经元凋亡（P〈0．01）,降低神经功能缺损评分（P〈0．01）。结论：阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-κBp65表达,并能减少神经元凋亡,减轻缺血再灌注损伤。     

PI3K/PKB信号途径在远程肢体缺血后处理减轻 脑缺血再灌注损伤中的作用

目的：通过观察肢体缺血后处理（LIP）后p-Akt、Caspase-9 及Bcl-2 蛋白的表达,探讨PI3K/PKB信号途 径在远程LIP 减轻脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：42 只大鼠随机分成对照组、缺血再灌注（IR）组和LIP 组各14 只,后2 组采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,LIP 组在缺血2 h 后再灌注前实施3 个循环健 侧股动脉缺血5 min再灌注5 min的LIP。采用TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测p-Akt、Caspase-9、 Bcl-2蛋白的表达。结果：LIP组大鼠脑梗死体积较IR组明显减小（P＜0.05）。LIP组p-Akt、Bcl-2蛋白表达较 IR 组明显增高（P＜0.05）,LIP 组Caspase-9 蛋白表达较IR 组明显降低（P＜0.05）。结论：LIP 可上调p-Akt、 Bcl-2表达,下调Caspase-9表达,并减轻脑梗死体积,PI3K/PKB信号通路在LIP减轻脑缺血再灌注损伤中可能 发挥重要保护作用。     

恩他卡朋对异动症大鼠行为学及其纹状体区 DARPP-32 磷酸化表达的影响

目的：通过观察肢体缺血后处理（LIP）后p-Akt、Caspase-9 及Bcl-2 蛋白的表达,探讨PI3K/PKB信号途 径在远程LIP 减轻脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：42 只大鼠随机分成对照组、缺血再灌注（IR）组和LIP 组各14 只,后2 组采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,LIP 组在缺血2 h 后再灌注前实施3 个循环健 侧股动脉缺血5 min再灌注5 min的LIP。采用TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测p-Akt、Caspase-9、 Bcl-2蛋白的表达。结果：LIP组大鼠脑梗死体积较IR组明显减小（P＜0.05）。LIP组p-Akt、Bcl-2蛋白表达较 IR 组明显增高（P＜0.05）,LIP 组Caspase-9 蛋白表达较IR 组明显降低（P＜0.05）。结论：LIP 可上调p-Akt、 Bcl-2表达,下调Caspase-9表达,并减轻脑梗死体积,PI3K/PKB信号通路在LIP减轻脑缺血再灌注损伤中可能 发挥重要保护作用。     

阿托伐他汀对大鼠缺血再灌注脑组织中CD40L和MMP-3的抑制作用

目的：探讨阿托伐他汀对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用机制。方法：采用Zealonga线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型血管内皮细胞间黏附分子。将Wistar大鼠随机分组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）、阿托伐他汀治疗组（AT组）。采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织CD40L、金属基质蛋白酶-3（MMP-3）的表达。结果：AT组脑组织CD40L、MMP-3表达及脑含水量和神经功能评分较IR组低（P〈0.01）,而较Sham组明显增高（P〈0.01）。结论：阿托伐他汀可以通过抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织CD40L、MMP-3表达,发挥脑保护作用。     

芪棱汤对线粒体介导caspase-9依赖凋亡通路的干预

目的：从细胞凋亡及其信号转导通路角度，探讨芪棱汤抗局灶性脑缺血／再灌注损伤的部分机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、芪棱汤组。采用改良线栓法制备局灶性脑缺血／再灌注模型。在大鼠脑缺血2h，再灌注2、4、6、12、24和48h不同时间点进行神经功能评分；观察再灌注24h脑皮质和海马CA1区神经元病理形态改变和线粒体超微结构的改变；应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TuNEL）和免疫组化技术分别观察不同时间点缺血半暗带区神经细胞凋亡、细胞色素C（cyt C）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）表达的变化。结果：芪棱汤对再灌注各时间点神经功能评分和再灌注24h组病理形态学均有不同程度的改善，可减轻线粒体水肿，减少内部嵴断裂和基质颗粒的脱落，维持线粒体的基本形态，降低缺血半暗带区凋亡指数，减少cytC和caspase-9的表达。结论：芪棱汤对线粒体介导的caspase-9依赖的凋亡通路有干预作用，通过保护线粒体的形态功能，稳定线粒体膜，抑制cytC和caspase-9的释放和激活，降低细胞凋亡率，发挥神经保护作用，这可能是其改善缺血／再灌注损伤的部分作用机制。     

七氟烷预处理对脑缺血-再灌注损伤大鼠脑组织热休克蛋白70和27表达的影响

【目的】观察七氟烷对大鼠局灶性脑缺血-再灌注时脑组织热休克蛋白（HSP）70和27表达的影响,以探讨其脑保护的机制。【方法】采用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型。30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I-R组）和七氟烷组（S组）,每组10只。大鼠脑缺血60min,然后进行再灌注。S组在脑缺血前30min吸入氧气＋2．4％七氟烷60rain。Sham组和I-R组吸入氧气。缺血60min,再灌注24h后处死大鼠,取缺血侧顶叶皮层脑组织,采用Western-blot法检测HSP_70和HSP-27蛋白的表达水平。【结果】局灶性脑缺血再灌注后,HSP-70和HSP-27蛋白的表达增加（P〈o．01）,应用七氟烷预处理能显著地促进脑缺血-再灌注后脑组织中HSP-70和HSP-27蛋白的表达（P〈0．01）。【结论】七氟炕能上调大鼠局灶性脑缺血-再灌注时HSP70和HsPL27的表达,这可能是其脑保护作用的部分机制。     

低氧预适应对脑缺血-再灌注大鼠神经元凋亡及P53蛋白表达的影响

目的：探讨低氧预适应对局部缺血-再灌注大鼠脑的保护作用及其分子机制。方法：24只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（I/R）组、低氧预适应（HP＋I／R）组。用线穿法建立大鼠局灶脑缺血-再灌注模型。脑缺血前12h将HP＋I／R组大鼠放在8％低氧舱中完成低氧预适应。分别用免疫组化、原位末端标记法检测P53的表达和神经元凋亡，并进行神经体征观察。结果：缺血3h再灌注24h后HP＋I／R组神经行为缺陷计分明显低于I／R组（P〈0．05）；HP＋I／R组凋亡细胞数明显少于I／R组（P〈0．05）；HP＋I/R组P53蛋白阳性细胞数明显低于I／R组（P〈0．05）。结论：低氧预适应可降低大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺陷和神经元凋亡。下调神经元中P53蛋白表达可能是低氧预适应脑保护作用的分子机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注伤后神经元IκB及NF-κB表达研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期神经元IκB及核因子κB（NF-κB）的动态变化。方法 采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法检测IκB、NF-κB的动态表达,并与假手术组对照。结果 与假手术对照组相比,脑缺血再灌注后,随着再灌注时间的延长,IκB阳性细胞数逐渐减少（P〈0.01）,NF-κB蛋白阳性细胞逐渐增加（P〈0.01）。结论 脑缺血区缺血再灌注损伤可导致IκB降解,引起NF-κB的激活,进一步导致自由基大量产生,加重了细胞内DNA的损伤,从而促进损伤区的神经元凋亡。     

表儿茶素对大鼠缺血再灌注后神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响

目的:研究表儿茶素(EC)对大鼠缺血再灌注后缺血侧脑皮质神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、依达拉奉(ED)3 mg/kg组,每组9只。除Sham组外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,于再灌注后0 h、12 h、24 h三个时间点给药,第12 h、24 h进行神经功能评分,第36 h取脑称重,应用缺口末端标记法(TdT-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)检测缺血侧脑皮质区神经元凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况。结果:与Sham组比较,I/R组神经功能评分显著升高(P0.05),脑指数无明显差异,凋亡指数明显增大(P0.05),Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著减少(P0.05)。与I/R组比较,EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、ED3mg/kg组脑指数无明显差异,凋亡指数明显减小(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著增加(P0.05),EC10 mg/kg组、EC20 mg/kg组、ED3mg/kg组神经功能评分显著降低(P0.05),Bax蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:表儿茶素可增强大鼠脑缺血再灌注后抗凋亡能力,可能与减少Caspase-3、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达有关。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后p-Bad的作用

目的：探讨促凋亡蛋白Bad的磷酸化p-Bad在局灶性脑缺血再灌注中的表达及依达拉奉的作用机制。方法：建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组织化学法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化Bad的平均光密度值（A值）。结果：与假手术组比较,p-Bad在缺血再灌注2 h明显升高,于4 h达到峰值（P〈0.05）,随灌注时间延长表达逐渐减少并低于假手术组;依达拉奉干预组阳性表达在各时间点明显增加（P〈0.05）。结论：脑缺血再灌注损伤可能导致Bad磷酸化活性增强,依达拉奉可通过上调p-Bad来发挥脑保护作用。     

金纳多注射液对脑缺血/再灌注后caspase-3和caspase-9表达的影响

目的：观察金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法：40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、金纳多小剂量治疗组及金纳多大剂量治疗组,每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;应用免疫组化检测caspase-3和caspase-9的蛋白表达;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果：与假手术组比较,缺血组、金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数以及caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著增高（P均〈0.01）;与缺血组比较,金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著减少（P均〈0.01）;与金纳多小剂量治疗组比较,金纳多大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均明显减少（P均〈0.05）。结论：金纳多注射液能显著减少脑缺血/再灌注后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,疗效表现为剂量依赖性。     

拜阿司匹灵预处理对高血糖SD大鼠局部脑缺血再灌注损伤中ICAM-1的影响

目的采用高血糖条件下SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,通过观察大鼠脑梗死体积、细胞问粘附分子的表达情况,探讨预防性应用拜阿司匹灵对高血糖条件下SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法随机分为对照组与拜阿司匹灵组,两组按缺血90min再灌注3h、6h、12h再分为3个亚组。各组均建立高血糖模型及SD大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。分别测量梗死体积,免疫组化方法测定ICAM-1的表达情况。结果拜阿司匹灵组与对照组相同再灌注时间点相比较：梗死体积减小（P均〈0．01）;缺血区ICAM-1表达减少（P均〈0．01）。结论预防性应用拜阿司匹灵能减轻高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤,缩小梗死体积,使损伤脑区ICAM-1表达减少。     

大鼠急性脑缺血-再灌注模型缺血半暗带的磁共振扩散张量成像

目的：研究大鼠急性脑缺血-再灌注模型缺血半暗带（IP）的扩散加权成像（DWI）和扩散张量成像（DTI）演变规律。方法：制作大鼠大脑中动脉闭塞缺血模型。分为永久缺血组，0．5h、1．5h、2．5h和3．5h4个再灌注组。在0．5～24h内行T2WI、DWI及DTI检查，测定缺血灶不同部位的ADC、DCavg、FA值，计算病侧与对侧正常组织的相对值。结果：缺血核心与边缘区之间9～12h内的rADC和rDCavg、6h内的rFA有显著性差异（P〈O．05）。2．5h和3．5h再灌注组与永久缺血组组间分析无显著性差异（P〉O．05）。结论：大鼠MCAO模型缺血灶ADC、DCavg、FA值具有特征性演变规律；IP存在时间窗为9～12h，再灌注的时间窗应小于2．5h。     

帕瑞昔布在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用

[目的]探讨帕瑞昔布在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用.[方法] Sprague-Dawley雄性大鼠36只,随机分为3组：假手术组（SH组）、缺血再灌注组（I/R组）、帕瑞昔布组（PA组）.电凝左侧大脑中动脉、夹闭双侧颈总动脉60min以制备脑缺血再灌注模型,再灌注72h时行神经功能缺失评分、2,3,5-氯化三苯四唑（TTC）染色并计算脑梗死容积百分比、Western blot检测缺血侧半影区高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达.[结果] I/R组神经功能缺失评分、梗死容积百分比明显高于PA组（P〈0.05）;与SH组相比,I/R组缺血侧半影区HMGB1表达减少,而PA组较I/R组HMGB1表达减少（P〈0.05）.[结论] 帕瑞昔布可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,可能是通过抑制炎症介质表达而发挥神经保护作用.     

局灶性脑缺血大鼠血瘀证相关指标和脑损伤病理生理的动态变化

目的：观察局灶性脑缺血大鼠血瘀证相关指标的改变，为建立病证结合的脑卒中血瘀证动物模型提供实验依据。方法：采用插线法致大脑中动脉栓塞（MCAO）2h制备局灶性脑缺血大鼠模型，分别于再灌注6、12、24、48、72和168h取血并处死动物取相应标本。检测腹动脉血血液流变学动态变化；采用酶联免疫吸附法（ELISA）和放射免疫竞争法测定脑组织白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）含量；用苏木素-伊红（HE）染色法观察脑细胞的病理形态学变化并进行细胞计数；用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果：与假手术组比较，模型组再灌注12～168h全血黏度和红细胞聚集率明显增高（P〈0.05或P％0．01），再灌注48h时血浆纤维蛋白原含量也显著增高（P〈0.01）。缺血侧脑组织前炎症细胞因子IL-1β水平于再灌注6～24h明显增高，TNF—α含量于再灌注24～48h显著增多（P〈0.05或P〈0．01）；再灌注6～72h脑缺血梗死区细胞数量明显减少，12～72h凋亡细胞大量出现（P均〈0.01）。结论：局灶性脑缺血大鼠模型出现血液流变学指标异常和脑部病变，因此有可能作为脑卒中血瘀证的病证结合动物模型。     

不同负荷游泳训练对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3和IL-1β的表达影响

目的研究运动训练对局部脑缺血再灌注大鼠Caspase-3和IL-1β的表达影响。方法将70只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、再灌注＋10min训练组及缺血再灌注＋30min训练组,采用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型。运动组大鼠术后每天进行游泳训练,6周后观测每组Caspase-3和IL-1β的指标。结果大鼠局部脑缺血再灌注后,每天30min运动训练的大鼠脑组织Caspase-3表达量低于缺血再灌注模型组（P〈0.05）,同时,IL-1β量也下降（P〈0.05）。结论合理的运动训练能促进缺血再灌注大鼠损伤部位的恢复,其相关机制可能与减轻局部有害因子的表达有关。     

电刺激小脑顶核对成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后脑内Nestin表达的影响

目的探讨电刺激小脑顶核（FNS）对成年大鼠局灶脑缺血／再灌注后脑内不同部位、不同时间点Nestin表达的影响。方法采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血／再灌注模型。180只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、假手术组（SC组）、局灶脑缺血／再灌注组（I／R组）、局灶脑缺血／再灌注＋假FNS组（I／RFs组）、局灶脑缺血／再灌注＋FNS组（I／RF组），每组36只，并根据再灌注时间的不同又分为1d、3d、7d、14d、21d和28d6个亚组（n=6）。缺血时间均为1h，于再灌注后立即刺激对侧小脑顶核1h。应用免疫组织化学技术检测缺血侧侧脑室、海马Nestin阳性细胞的动态表达。结果局灶脑缺血／再灌注后不同时间点Nestin阳性细胞在缺血侧侧脑室区、海马齿状回的表达均有增加，呈单峰变化趋势，7d达高峰（P〈0．01），14d后逐步下降（P〈0．01），而FNS后，Nestin阳性细胞数量增加更加明显（P〈0．05，P〈0．01），7d达到高峰（P〈0．01），14d后仍维持在较高水平（P〈0．01），且Nestin阳性细胞形态也发生明显变化。结论FNS可促进局灶脑缺血／再灌注后脑内Nestin阳性细胞数量增加。     

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究

目的 观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制。方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、KATP开放剂治疗组（C组）及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组（D组）。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于缺血后2h进行再灌注。各组于再灌注6、12、24、48和72h分别取5只大鼠脑组织标本，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡，用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9的蛋白表达；各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01），C组各指标均显著低于B组和D组（P〈0．05或P〈0．01），而B组与D组各指标间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 KATP开放剂能显著减少脑I／R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达，提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I／R损伤后的神经元凋亡。