姜黄素对人黑素瘤A375细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究姜黄素抑制人黑素瘤A375细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 体外培养人黑素瘤A375细胞,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖抑制作用;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡.结果 姜黄素可使A375细胞体积缩小,细胞变圆;姜黄素对人A375细胞的生长增殖有明显的抑制作用,并且这种作用呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI双染法证实姜黄素可以诱导A375细胞发生凋亡.结论 姜黄素对人黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用.     

重楼皂苷Ⅰ通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑素瘤A375细胞凋亡与自噬

目的探讨重楼皂苷Ⅰ(PolyphylinⅠ,PPⅠ)对人黑素瘤A375细胞凋亡和自噬的影响以及相关机制,确定PPⅠ诱导的细胞自噬与其促进A375细胞凋亡的相关性。方法 PPⅠ处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标法检测PPⅠ对人黑素瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3的分布与表达来确定PPⅠ对自噬的诱导作用;采用氯喹抑制细胞自噬后,观察PPⅠ对细胞凋亡的影响。结果 PPⅠ能抑制A375细胞增殖活力;PPⅠ抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化并促进了A375细胞内Bax和cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑素瘤细胞发生凋亡;PPⅠ促进了A375细胞LC-Ⅱ/LC-Ⅰ值和Beclin-1蛋白表达的升高,下调了p62蛋白的水平,促进了细胞自噬;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了PPⅠ的上述作用;PPⅠ与自噬抑制剂氯喹联用后,A375细胞凋亡数量明显减弱。结论 PPⅠ能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡与自噬,抑制自噬减少了PPⅠ诱导的人黑素瘤细胞凋亡。     

Celecoxib抑制人黑素瘤A375细胞增殖及对Cox-2/MMP-1蛋白表达的影响

目的研究Celecoxib(塞来考昔)对人黑素瘤A375细胞增殖抑制、凋亡诱导和周期阻滞作用及对A375细胞表达Cox-2和分泌型MMP-1蛋白的影响。方法MTT法测定Celecoxib对A375细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡及周期阻滞作用;细胞爬片SABC免疫细胞化学检测Celecoxib对A375细胞Cox-2蛋白表达的影响,ELISA法分析Celecoxib对A375细胞分泌型MMP-1蛋白表达的影响。结果80μmol/L的Celecoxib明显抑制人黑素瘤A375细胞增殖,并诱导凋亡(凋亡率35.91%)和G2/M期阻滞,减少A375细胞表达Cox-2蛋白和分泌型MMP-1蛋白。结论人黑素瘤A375细胞表达Cox-2蛋白和MMP-1蛋白,Celecoxib是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

白藜芦醇对人A375及鼠B16F10黑素瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人A375及鼠B16F10黑素瘤细胞增殖及凋亡的调节作用.方法:利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、光学显微镜技术,检测不同浓度的Res对人A375及鼠B16F10细胞增殖及凋亡的影响.结果:Res对人A375及鼠B16F10细胞均有显著的增殖抑制作用,呈剂量效应依赖性关系.结论:Res在体外可抑制恶性黑素瘤(MM)细胞的增殖.     

重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料（DCFH？DA）测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl？2、Bcl？2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK？q检验。结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制 A375 细胞的增殖（P 〈 0.01）;荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的 A375 细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7,P 〈 0.01）,G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81,P 〈 0.01）;细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P 〈 0.01）;细胞内ATP含量下降（P 〈 0.01）,培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升（P 〈 0.01）;细胞Bax、cleaved？caspase？3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl？2和PKM2蛋白表达下降（P 〈 0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。     

芍药苷对人黑素瘤细胞株A375增殖凋亡的影响

目的:研究不同浓度芍药苷(PF)对人黑素瘤细胞A375增殖抑制及早期凋亡的影响.方法:将体外培养的人黑素瘤细胞株A375分为6组,5个实验组分别加入不同浓度PF(2、1、0.5、0.1、0.01 mg/mL),对照组不加PF.光镜下观察细胞密度及形态、MTT法测定细胞增殖抑制率,Amnexin V/PI染色法检测细胞早期凋亡率.结果:镜下观察可见随着PF浓度的增加,黑素瘤细胞株A375数量降低,贴壁能力渐差,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩.与对照组相比,不同浓度PF处理A375细胞24h、48h和72 h后,PF对细胞有浓度依赖性的增殖抑制作用(P＜0.05),但未见明显的时间依赖性(P＞0.05).不同浓度PF干预24h时A375细胞的早期凋亡率,对照组和各实验组差异无统计学意义(P＜0.05).结论:PF能抑制人黑素瘤细胞株A375的增殖,这种抑制作用呈浓度依赖性而非时间依赖性,但对A375细胞早期凋亡率无明显影响.     

麦冬皂苷B通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡

目的探讨麦冬皂苷B对人黑色素瘤(Melanoma)A375细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响以及相关机制。方法麦冬皂苷B处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;免疫印迹法检测麦冬皂苷B对A375细胞PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase3表达的影响。结果麦冬皂苷B能抑制A375细胞增殖活力及PI3K/Akt/mTOR通路的活化;麦冬皂苷B促进了A375细胞内Bax和Cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑色素瘤细胞发生凋亡;麦冬皂苷B阻滞了A375细胞细胞周期,G0/G1期细胞比例明显升高;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了麦冬皂苷B的上述作用。结论麦冬皂苷B能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。     

白花蛇舌草总黄酮对黑色素瘤A375和B16细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察白花蛇舌草总黄酮（FOD）对体外培养黑色素瘤A375和B16细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养黑色素瘤A375和B16细胞,使用不同浓度的FOD作用24 h、48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞凋亡的影响。结果：FOD抑制黑色素瘤A375和B16细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用呈明显的浓度和时间依赖性。结论：FOD能有效抑制黑色素瘤A375和B16细胞细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇抑制A375细胞增殖和迁移及CCR7表达的体外实验

目的观察雷公藤内酯醇在体外抑制人黑素瘤细胞A375增殖和迁移的能力及对细胞表面趋化因子受体CCR7表达的影响情况,初步分析其作用机制。方法用CCK-8比色试剂盒检测雷公藤内酯醇对A375细胞增殖的作用,Transwell微孔隔离小室迁移实验检测雷公藤内酯醇对A375细胞体外迁移能力的影响,Western blot法检测雷公藤内酯醇对A375细胞CCR7蛋白表达的影响。结果雷公藤内酯醇以剂量依赖方式抑制A375细胞的增殖,24h的IC50值为0.20μg/mL;雷公藤内酯醇能显著地抑制A375细胞的体外迁移能力(P0.01),侵袭抑制率约为82.84%;经不同浓度雷公藤内酯醇(0μg/mL,0.2μg/mL和0.4μg/mL)处理后,A375细胞中CCR7蛋白表达呈明显下降趋势(P0.05)。结论雷公藤内酯醇具有抗A375细胞增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与下调其表面趋化因子受体CCR7的表达相关,并且该作用呈一定的浓度依赖性。     

腺病毒介导p27mt基因转移诱导恶性黑素瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨突变型p27基因(p27mutant type gene;p27mt)对恶性黑素瘤A375细胞凋亡的调节作用。方法:利用重组腺病毒Ad-p27mt转染培养的人恶性黑素瘤A375细胞,用3H-TdR掺入法检测细胞增殖;流式细胞术、DNA片段分析法、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:重组腺病毒Ad-p27mt在MOI≥50时,可达到100%的转导效率。Ad-p27mt转染恶性黑素瘤细胞A375后,3H-TdR掺入法检测发现细胞增殖抑制;流式细胞术检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性梯带。TUNEL法检测凋亡指数分别为48.5±3.6(Ad-p27mt组)及4.2±0.8(空白对照组),差异有显著性(P<0.01)。结论:重组腺病毒介导的p27mt基因转移可诱导恶性黑素瘤A375细胞在Gl期阻滞并导致细胞凋亡。     

维A酸CD437和阿维A抑制人黑素瘤A375细胞的比较

目的探讨合成的维A酸CD437与阿维A对体外培养的人黑素瘤A375细胞的增殖抑制、凋亡诱导、周期阻滞作用及对Bax/bcl-2蛋白表达的影响。方法MTT法测定CD437及阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测两种药物诱导细胞凋亡及周期阻滞;细胞爬片SABC免疫细胞化学分析两种药物对细胞Bax/bcl-2蛋白表达的影响。结果干预24h后,10-5mol/L维A酸CD437和阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制率(PIR)和凋亡率分别为58.6%和43.25%,28.03%和17.13%(P<0.05),CD437促A375细胞G0/G1期阻滞,而阿维A无此作用;两药均上调A375细胞Bax蛋白表达和下调bcl-2蛋白表达,但CD437组与阿维A组差异无显著性。结论与阿维A相比较,CD437更有效抑制人黑素瘤A375细胞的增殖及更明显的凋亡诱导和G0/G1期阻滞作用;在辅助治疗黑素瘤方面,CD437比阿维A可能更具潜力。     

姜黄素对人黑素瘤细胞株A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探讨姜黄素对恶性黑素瘤体外抗癌作用的分子机制。 方法 体外培养的人黑素瘤细胞株A375和C8161分为实验组和对照组。实验组经不同浓度姜黄素处理一定时间,对照组采用二甲基亚砜处理。采用噻唑蓝法检测姜黄素对A375和C8161细胞增殖的影响,体外侵袭实验检测姜黄素对A375和C8161细胞侵袭的影响,流式细胞仪检测姜黄素对A375和C8161细胞周期的影响,Western 印迹检测姜黄素对A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。 结果 噻唑蓝法显示,姜黄素分别在5 ~ 15 mg/L和5 ~ 10 mg/L浓度时,对A375和C8161细胞抑制作用呈量效关系;在0 ~ 48 h呈时效关系,与对照组相比差异有统计学意义（P < 0.001）。其24 h的IC50分别为10 mg/L和5 mg/L。体外侵袭试验显示,10 mg/L和5 mg/L姜黄素分别作用于A375和C8161细胞72 h,可明显抑制细胞侵袭（P < 0.001）。流式细胞仪检测显示,10 mg/L和5 mg/L姜黄素分别作用于A375和C8161细胞24 h,细胞周期阻滞于G2/M期; A375细胞G2/M期比例为35.00% ± 3.54%,与对照组120.80% ± 7.46%相比,差异有统计学意义（P < 0.001）;C8161细胞G2/M期比例为19.33% ± 4.04%,与对照组85.00% ± 9.53%相比,差异有统计学意义（P < 0.001）。Western印迹检测显示,分别经10 mg/L和5 mg/L姜黄素作用于后,A375和C8161细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平下降。结论 姜黄素抑制人黑素瘤细胞株A375和C8161增殖及侵袭机制可能与其诱导细胞周期阻滞及抑制AKT/mTOR信号通路活化有关。     

转染c-kit基因对A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:明确转染c-kit基因对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养人恶性黑素瘤A375细胞,分为A组(实验组)、B组(转染空病毒载体的阴性对照组)、C组(空白对照组)。转染后采用RT-PCR检测c-kit mRNA表达情况,在倒置相差显微镜观察A375细胞分化及形态,MTT比色分析法检测对A375细胞增殖抑制的影响,流式细胞分析术,Anexin-v-PI双染色检测细胞早期凋亡的变化。结果:转染后A组细胞出现不同程度的皱缩、破裂,漂浮细胞增多。RT-PCR半定量分析结果显示,A组扩增出c-kit c DNA 230 bp大小片段,而B、C组则没有扩增出相应大小的片段。转染后A组OD值低于B、C组(P0.05),A组早期凋亡率高于B、C组有显著性差异(P0.05)。结论:转染c-kit后A375细胞增殖被抑制,早期凋亡增加。     

生存素反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤A375细胞生物学行为的影响

目的研究生存素反义寡核苷酸(AS-ODN)经脂质体介导转染对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法合成生存素硫代反义寡核苷酸(AS-ODN),脂质体携带转染人恶性黑素瘤A375细胞。采用台盼蓝计数、软琼脂克隆形成试验、电镜、流式细胞仪检测AS-ODN对A375细胞增殖及凋亡的影响。通过裸鼠致瘤实验观察AS-ODN对A375细胞动物体内增殖的抑制作用。结果生存素反义寡核苷酸能降低G2/M期细胞百分比,诱导细胞凋亡发生,明显抑制A375细胞的生长和克隆形成,裸鼠体内A375细胞恶性增殖潜力下降。结论脂质体介导生存素AS-ODN能有效抑制A375细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。     

白花丹素对黑素瘤A375细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 评价白花丹素对黑素瘤细胞体外增殖及凋亡的影响.方法: 体外培养黑素瘤细胞A375细胞株,应用不同浓度的白花丹素进行处理,培养24 h后,MTT法测定对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot检测bcl-2的表达.结果: 浓度为1～13 μmol/L的白花丹素能显著抑制A375细胞株的增殖,且随浓度增加抑制作用递增;白花丹素作用24 h的半数抑制浓度约为10 μmol/L;当浓度为2.5 μmol/L、5.0 μmol/L和10.0 μmol/L作用24 h,细胞的凋亡率分别为8.52%±0.96%、14.83%±1.34%和19.56%±1.85%,与空白对照组(4.58%±0.46%)比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞内bcl-2蛋白表达量随药物浓度升高而递减,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论: 白花丹素体外能抑制黑素瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡及下调黑素瘤细胞bcl-2蛋白的表达.     

姜黄素联合热疗对人黑素瘤A375细胞毒性的实验研究

目的从细胞水平探讨姜黄素联合热疗治疗人恶性黑素瘤的可行性。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理因素对人恶性黑素瘤A375细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测A375细胞的凋亡情况。结果 30μmol/L姜黄素联合热疗的细胞抑制率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(F=5.47,P0.01);A375细胞增殖抑制率与姜黄素浓度呈正相关(rs=0.95);30μmol/L姜黄素联合热疗组细胞早期凋亡率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(H=15.37,P0.01)。结论姜黄素联合热疗对人恶性黑素瘤A375细胞的毒性起协同相加作用,细胞毒性与姜黄素的剂量成明显剂量-效应关系。     

内皮抑制素对黑素瘤A375细胞侵袭能力的影响

目的探讨内皮抑制素对体外培养的黑素瘤A375细胞核因子κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP9)表达的影响。方法 CCK-8法检测内皮抑制素对A375细胞增殖的抑制作用;Transwell小室试验检测内皮抑制素对A375细胞侵袭能力的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测内皮抑制素对A375细胞NF-κB,MMP9 mRNA和二者蛋白表达的影响。结果内皮抑制素对A375细胞增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;20μg/mL内皮抑制素作用A375细胞72h后:细胞穿膜数(21.5±7.3)低于对照组(56.8±6.2);胞内NF-κB,MMP9 mRNA以及二者蛋白表达水平均有明显下降,与对照组相比的差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论内皮抑制素可下调NF-κB和MMP9的表达,从而抑制黑素瘤浸润和转移。这为内皮抑制素临床治疗皮肤黑素瘤提供了部分理论依据。     

依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导人黑素瘤细胞自噬

目的：研究依巴斯汀对人黑素瘤细胞自噬的影响及机制。方法：体外培养人黑素瘤细胞A375和M14,采用CCK-8增殖实验检测细胞活力,并计算IC50;利用mCherry-EGFP-LC3B双荧光指示系统检测自噬流;采用Western blot验证自噬相关蛋白LC3,Beclin1及信号通路蛋白的表达。结果：依巴斯汀可显著抑制人黑素瘤细胞的活力;依巴斯汀明显诱导人黑素瘤细胞中自噬小体和自噬溶酶体的产生;依巴斯汀显著上调人黑素瘤细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值以及Beclin1的表达,同时抑制AKT/mTOR信号通路的活化,降低p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR。结论：依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导人黑素瘤细胞自噬的发生。     

携带IL-24基因的溶瘤腺病毒诱导黑素瘤细胞凋亡

目的 探讨携带IL-24基因的溶瘤腺病毒（ZD55-IL-24）诱导人黑素瘤A375细胞凋亡的作用。方法 用PCR方法鉴定ZD55-IL-24,并大量扩增、纯化和病毒滴度测定。将ZD55-IL-24感染人黑素瘤A375细胞。结晶紫染色观察细胞毒性,MTT法测定细胞存活率,Western印迹检测溶瘤腺病毒E1A、IL-24基因蛋白表达。结果 PCR鉴定表明ZD55-IL-24包含IL-24基因且没有野生型腺病毒污染;结晶紫染色结果表明ZD55-IL-24对A375细胞有明显的细胞毒性效应。MTT法结果显示,ZD55-IL-24对A375细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性效应。Western印迹结果表明ZD55-IL-24能在A375细胞内高效表达E1A、IL-24基因。结论 溶瘤腺病毒ZD55-IL-24能携带IL-24基因在黑素瘤A375细胞中高效表达,抑制细胞增殖并诱导其凋亡。     

芹菜素对人恶性黑素瘤A375细胞周期的影响及机制研究

目的研究芹菜素对人恶性黑素瘤细胞系A375细胞周期的影响,并进一步探讨其作用机制。方法 A375细胞经芹菜素干预后,MTT比色法检测芹菜素对细胞增殖的影响,PI单标流式细胞术检测芹菜素对细胞周期的影响,蛋白印迹法检测芹菜素对细胞周期相关蛋白Cyclin D1及p21表达的影响。结果芹菜素在体外能明显抑制A375细胞增殖,其抑制效应呈时间及浓度依赖性;芹菜素可影响A375细胞周期,经芹菜素干预的A375细胞,其细胞周期被阻滞于G1期;芹菜素可显著影响A375细胞周期相关蛋白的表达,芹菜素在下调A375细胞Cyclin D1表达的同时,明显上调p21蛋白的表达。结论芹菜素能拮抗人恶性黑素瘤A375细胞增殖,其机制可能与芹菜素影响A375细胞周期相关蛋白Cyclin D1/p21的表达进而调控A375细胞周期进程有关。