用辣根过氧化物酶标记抗体Fab染色法在光镜及电镜下检测大肠癌的CEA标志

采用辣根过氧化物酶标记的抗癌胚抗原(CEA)的抗体Fab片断,对4例大肠癌手术标本进行免疫组织化学染色,以检测肿瘤标志CEA。实验证明,此法简便易行、可靠,可用于检测消化系统的许多腺癌,做为病理诊断学的辅助手段。     

RmIL-18多克隆抗体的制备及辣根过氧化物酶的标记

目的用纯品rmIL-18免疫新西兰兔，制备多克隆抗体，并予辣根过氧化物酶标记。方法使用免疫佐剂包被rmIL-18分次免疫新西兰兔，得到兔血清，再采用硫酸铵沉淀粗提法和QAE-Sephadex A-50离子交换层析法提纯IL-18抗体，最后用HRP简易过碘酸钠法标记IL-18抗体。结果用以上方法标记的IL-18抗体酶标记率为40．29％，酶标抗体的效价为1：3200，最佳工作浓度为1：1600。结论成功制备出标记HRP的IL-18多克隆抗体，建立了IL-18抗原的酶联免疫检测，以进一步用于实验研究。     

十七种哺乳动物二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗17种哺乳动物的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为哺乳血清学检测系统的建立提供工具。方法利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A或protein G亲和层析的方法进一步纯化哺乳动物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗哺乳动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗哺乳动物的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blot方法考察标记抗体的特异性。结果纯化了恒河猴、东北虎、布氏田鼠、黑线姬鼠、斑羚、原驼、果子狸、食蟹猴、梅花鹿、长爪沙鼠、马鹿、骆驼、大仓鼠、豚鹿、熊猴、大耳羊和雪貂等17种哺乳动物的血清IgG,分别免疫大耳白兔制备了这17种哺乳动物的兔抗血清,免疫双扩散法测定兔抗这17种哺乳动物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗恒河猴IgG、兔抗东北虎IgG、兔抗布氏田鼠IgG、兔抗黑线姬鼠IgG、兔抗斑羚IgG、兔抗原驼IgG、兔抗果子狸IgG、兔抗食蟹猴IgG、兔抗梅花鹿IgG、兔抗长爪沙鼠IgG、兔抗马鹿IgG、兔抗骆驼IgG、兔抗大仓鼠IgG、兔抗豚鹿IgG、兔抗熊猴IgG、兔抗大耳羊IgG和兔抗雪貂IgG等17种哺乳动物的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～60000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了HRP标记的兔抗17种哺乳动物的二级抗体,为哺乳动物血清学检测体系的建立提供了工具。     

光镜和电镜研究免疫酶的组织化学染色法

本文对免疫酶组织化学的样品制备程序和染色方法做了详细的阐述。用直接法、间进法和ABC法,对IgA、Leu4、HLA-DR、CEA和4型角蛋白的定位,进行了光镜和电镜的观察,染色阳性反应显著,获得了满意的效果。并对染色技巧做了分析和探讨。     

十六种鸟类二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗16种鸟类的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为鸟类血清学检测系统的建立提供工具。方法采用水稀释法粗纯抗体后,再利用改良的饱和硫酸铵分级沉淀法,或亲和层析结合饱和硫酸铵沉淀法,或饱和硫酸铵沉淀法结合SDS-PAGE凝胶切胶纯化的方法进一步纯化鸟类的IgY,利用纯化的IgY免疫大耳白兔制备抗血清,用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鸟类的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鸟类的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blots考察标记抗体的特异性。结果纯化了灰雁、鸬鹚、鸵鸟、小鹈、鸽子、鹅、孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、草鹭、夜鹭、赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭等16种鸟类的IgY,免疫双扩散法测定兔抗这16种鸟类的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗灰雁IgY、兔抗鸬鹚IgY、兔抗鸵鸟IgY、兔抗小鹈IgY、兔抗鸽子IgY、兔抗鹅IgY、兔抗孔雀IgY、兔抗鹌鹑IgY、兔抗贵妃鸡IgY、兔抗草鹭IgY、兔抗夜鹭IgY、兔抗赤嘴潜鸭IgY、兔抗燕鸥IgY、兔抗长脚鹬IgY、兔抗虎皮鹦鹉IgY、兔抗翘鼻麻鸭IgY等16种兔抗鸟类IgY的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶800～80000左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了辣根过氧化物酶标记的兔抗16种鸟类的二级抗体,为鸟类血清学检测体系的建立提供了工具。     

利用辣根过氧化物酶作为示踪物质研究大鼠局部淋巴结抗体产生的动态变化

利用辣根过氧化物酶(HRP)为抗原,加入弗氏佐剂,注入大鼠足掌皮内.对抗原在局部淋巴结中的存留时间;巨噬细胞对抗原的处理;特异性抗HRP抗体的产生以及抗原刺激对其它免疫球蛋白合成的影响等进行了追踪观察.共采用了4种不同的组织化学和免疫组织化学方法,在光镜下进行比较.实验证明,采用HRP、DAB和H₂O₂作为追踪物质和底物,研究细胞生物学和病理学问题,既可在光学显微镜又可在电子显微镜下观察反应产物,同时,也可以在细胞水平上和超微结构水平上,对结果进行比较研究.     

利用辣根过氧化物酶作为示踪物质研究大鼠局部淋巴结抗体产生的动态变化

利用辣根过氧化物酶(HRP)为抗原,加入弗氏佐剂,注入大鼠足掌皮内.对抗原在局部淋巴结中的存留时间;巨噬细胞对抗原的处理;特异性抗 HRP 抗体的产生以及抗原刺激对其它免疫球蛋白合成的影响等进行了追踪观察.共采用了4种不同的组织化学和免疫组织化学方法,在光镜下进行比较.实验证明,采用 HRP、DAB 和 H_2O_2作为追踪物质和底物,研究细胞生物学和病理学问题,既可在光学显微镜又可在电子显微镜下观察反应产物,同时,也可以在细胞水平上和超微结构水平上,对结果进行比较研究.     

PCNA和CEA在大肠癌表达的免疫组化研究

目的:PCNA是一种仅在增殖细胞中合成和表达的36K多肽,其表达和合成与细胞增殖周期有关。CEA是从结肠癌分离出来的一组酸性糖蛋白,其广泛存在于各种上皮性肿瘤,尤其是各种腺癌。本文应用免疫组化方法对60例大肠癌进行研究,结果提示,随着临床分期的增高和组织分化的降低,PCNA和CEA呈明显递增的趋势。对PCNA和CEA的检测,有助于指导临床和估计肿瘤的恶性潜能,以判断预后。     

加压素神经元在下丘脑的分布及其与垂体后叶的关系——辣根过氧化物酶(HRP)与免疫组化双重标记法研究

本文应用HRP与免疫组化结合的方法研究加压素神经元在下丘脑的分布及其与垂体后叶的关系,结果表明:下丘脑视上核、室旁核、视上核后部、视交叉上核、前连合核、终纹床核、环形核、穹窿核、视前区、下丘脑内、外侧区、室周灰质、室管膜层及下丘脑一些血管周围均有加压素神经元分布。室管膜层、视上核的软膜面及一些大血管周围有丰富的神经元突起,有些甚至接触到脑脊液或游离到血管腔中。除视交叉上核外,上述其余核区均有发纤维投射到垂体后叶。本文结果提示:加压素可能通过三种途经释放:①释放到垂体后叶;②直接释放到脑脊液;③直接释放到下丘脑的血管腔内。     

用Hep—2细胞作抗原的过氧化物酶染色法检测抗核抗体

对181例各种类型的自身免疫病患者血清抗核抗体ANA使用Hep-2细胞作抗原的过氧化物酶技术进行了ANA检测,并与间接免疫荧光法进行了比较。证实两种方法的相符率较高,特别是对红斑狼疮、结缔组织病、硬皮病的检测,符合率为93.3％～100％,对用其它方法检出率较低的类风湿的检测符合率也可达71.4％。在敏感性和特异性方面两法没有明显区别。认为用Hep-2细胞作抗原的酶染色法,具有方法简便、不需使用荧光显微镜、细胞及核仁体积较大、易于分型等优点。     

Tc-99m标记抗AFP抗体在人肝癌裸鼠模型中的定位显像研究

目的：揭示锝（Ｔｃ）－９９ｍ标记的单克隆抗体在肿瘤定位中的作用。方法：通过ＳＭＭＣ－７７２１－ＣＳ细胞株诱导原发性肝癌实体瘤裸鼠模型，将Ｔｃ－９９ｍ标记抗ＡＦＰ单克隆抗体（ＡｎｔｉＡＦＰ－ＭｃＡｂ）和正常鼠免疫球蛋白（ＮＭＩｇＧ）通过尾静脉注射荷瘤裸鼠，分别在１５ｍｉｎ、１２ｈ、２４ｈ作单光子发射计算机断层显像（ＳＰＥＣＴ）。结果：在注射标记抗体２４ｈ能得到清晰的肿瘤显像，对照组无肿瘤显像，其中靶与非靶放射性比率（Ｔ／ＮＴ）与对照组比较，ｔ＝３．１０４，Ｐ＜０．０５，有显著差异；肿瘤定位指数（ＬＩ－组织与血液放射性比率）单抗组为２．６８±０．０５，对照组为１．２３±０．０１，肿瘤组织摄取率为２８．６８％±４．００％。结论：Ｔｃ－９９ｍ标记抗ＡＦＰ抗体具有良好的定位效果