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干细胞的研究与应用已经对迅猛发展的生命科学产生了大范围的影响。神经干细胞(neural stem cells,NSC)研究近年来成为脑科学研究的重要领域,神经干细胞不仅能促进神经元的再生和脑组织的修复,而且通过基因修饰还可用于神经系统疾病的基因治疗,表达外源性的神经递质、神经营养因子及代谢性酶,为许多难以治疗的神经系统疾病提供了新的治疗途径。本文就NSC的研究现状作一评述。1神经干细胞的概念干细胞是指对于那些处于分化过程之中,具有分裂增殖能力、并能分化产生1种以上“专业”细胞的原始细胞。Anderson等[1]1989年首先提出了神经干细…     

神经干细胞的研究现状和治疗中的应用展望

神经干细胞是当今神经科学领域研究的热点。热经干细胞具有自我更新，未分化和多分化潜能的特性，随着从细胞水平，分子水平对神经干细胞的深入研究而展起来的基因治疗和细胞移植疗法在治疗脑缺血，神经系统退行性疾病等方面的成效，使神经干细胞视为治疗神经系统疾病很有希望的新途径，新方法，新策略，所以神经干细胞不仅为神经发育研究提供了一条思路，更重要的是为临床治中枢神经系统疾病提供了重要的理论依据。     

脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析

目的 客观总结和评价神经干细胞治疗神经系统疾病综合效果及临床存在的问题.方法 250例偏瘫、截瘫、脑瘫、神经系统变性疾病等通过静脉输注、鞘内注射、局部注射使用脐血源神经干细胞4次～8次,每次间隔1周,治疗前后进行常规、生化、免疫检查,临床相关量表评定,并观察其临床效果和副反应.结果 神经干细胞治疗对脊髓损伤、脑瘫、偏瘫、遗传性共济失调、多发性硬化、脑炎后遗症、周围神经损伤等部分病例有明显效果,且临床使用安全.对运动神经元病有短期疗效,但不能阻止疾病发展,对重症脑变性疾病,单一疗程效果不佳.结论 神经干细胞对神经系统疑难病有临床效果,但效果不齐同.对病因尚不明确的疾病,能改善症状、体征,不能阻止其恶化、复发.副反应与细胞质量和个体差异有关.     

间充质干细胞对心肌损伤修复的研究进展

在过去的10年中,干细胞已成功地应用于治疗各种疾病:胰岛移植治疗糖尿病;利用胚胎神经前体细胞和神经干细胞治疗神经系统疾病(帕金森综合征、癫痫、休克、脊髓损伤);肝细胞和肝的干细胞治疗肝脏疾病.近几年,干细胞移植治疗缺血性心脏病已成为一个热点话题.大量的动物实验和前期临床试验表明这种治疗对心肌细胞再生和心脏血流动力学改变有着明显的疗效.在各种干细胞中,由于骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有取材方便、体外易培养和可诱导分化的特点,对其研究更加广泛和深入.现对MSCs在治疗心肌病中的应用作一综述.     

成年哺乳动物海马齿状回神经发生的研究进展

<正> 神经发生指神经干细胞增殖、存活和分化的过程,传统的观点认为成年哺乳动物中枢神经系统不存在神经发生。近年大量研究证实成年哺乳动物海马齿状回终身存在着神经发生,这为脑损伤和神经系统变性疾病如老年性痴呆的治疗带来希望,通过刺激机体自身的神经发生使中枢神经系统实现自我修复,有望为神经系统疾病的治疗开拓新领域。     

干细胞移植在神经系统疾病治疗中的应用

干细胞是胚胎组织的天然增殖单位，是成人细胞及各种组织再生的基础。上世纪90年代以来的研究证实，成人的神经系统存在着可在特定情况下分裂增殖的神经干细胞。这种细胞具有分化成神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的的克隆细胞群。随着人类对干细胞的深入了解和应用性研究的进展，神经干细胞移植将成为治疗某些神经系统疾病的重要手段。     

中枢神经功能再生研究的现状与展望

中枢神经功能再生是当今神经学科领域研究的热点。主要是利用神经干细胞所具有的自我更新、未分化和多分化潜能的特性。随着从细胞水平、分子水平对神经干细胞的深入研究,对促使中枢神经功能的再生已取得可喜的成果。用神经干细胞移植等新方法,对脑缺血、神经系统退行性疾病等方面研究的成效,为今后临床治疗中枢神经系统疾病提供了重要的理论依据。     

应用神经干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

经典的神经科学理论曾经认为中枢神经系统的神经元在出生后不久即停止生长,且损伤后也无再生能力。但Reynolds等于1992年从成年鼠的纹状体和海马中分离出具有不断分化潜能的细胞群落,提出神经干细胞（neural stem cell,NSC）概念。神经干细胞的发现为中枢神经系统损伤、神经退行性疾病、神经系统肿瘤等的治疗提供了新的手段。其中应用神经干细胞治疗脊髓损伤是研究的热点之一。     

神经干细胞临床应用和前景展望

神经干细胞移植是一门新兴学科,与其相关的研究引起学者的广泛关注。许多使用传统临床技术手段治疗效果不理想甚至无法治疗的疾病,通过神经干细胞移植的方法可能获得显著改善。2000年Gage提出神经干细胞的定义为:①能产生神经组织或来源于神经系统;②具有自我更新能力;③能通过不对称分裂产生一个与自己相同的细胞和一个与自身不同的细胞(神经元、神经胶质细胞或少突胶质细胞)。神经干细胞来源较多,主要通过以下的途径获得:①来源于神经组织。现已证实,成体哺乳动物中枢神经系统中存在两个神经干细胞聚集区:侧脑室下区和海马齿状回的颗粒下…     

神经干细胞研究进展

神经干细胞是从胚胎期和成年啮齿类动物、灵长类动物以及人的脑和脊髓中分离、培养出具有向神经元和神经胶质细胞分化潜能的细胞.神经干细胞的发现,是神经科学的重大发展,标志着多年来"中枢神经细胞不可再生"理论的结束,对神经系统的损伤修复、退行性疾病的治疗以及深入研究动物的生长发育和分化具有重要意义,为中枢神经系统的结构和功能重建提供了新的手段,具有广阔的应用前景.     

毒胡萝卜素对ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和凋亡的影响

目的观察毒胡萝卜素对ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和凋亡的影响。方法将ReNcell CX人神经干细胞分为两组,实验组分别加入10、20、50、100 nM毒胡萝卜素,干预6 h;对照组不加任何药物。采用分光光度计法测量两组乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫荧光显微镜下观测细胞增殖情况及Caspase-3水平。结果实验组LDH、Caspase-3水平明显高于对照组,细胞增殖率明显低于对照组,且均呈剂量依赖性,P<0.05或<0.01。结论毒胡萝卜素抑制神经干细胞存活和增殖;其机制可能为激活Caspase-3释放,促进神经干细胞凋亡。     

大鼠神经干细胞的分离培养和鉴定

目的建立神经干细胞分离、培养、鉴定技术.观察神经干细胞生长、增殖特点.方法利用无血清培养,从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代观察.采用荧光免疫细胞化学检测技术,观察鉴定神经干细胞.结果从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有nestin表达阳性细胞,显微镜下观察到典型的干细胞特征.结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,通过鉴定确为神经干细胞.     

大鼠脑出血后神经干细胞移植的实验研究

目的探讨脑出血后大鼠胚胎神经干细胞移植治疗的可行性.方法从14d胚龄的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞,通过荧光免疫组化技术研究其特性.制作大鼠脑出血模型,分别于3d和7 d时将未分化的神经干细胞注入血同侧的尾状核内.分别记录模型制作后2 h和移植后2 h、4周的大鼠运动功能.移植4周后处死大鼠,观察移植后干细胞在体内生长情况.结果实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞.出血后7 d干细胞移植组的大鼠运动功能的改善显著好于3 d组和对照组.结论神经干细胞移植治疗能够显著改善脑出血动物的运动功能,是一种很有发展前途的方法,值得进行更深入的研究.     

CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal forebrain

The postnatal forebrain subventricular zone (SVZ) harbors stem cells that give rise to olfactory bulb interneurons throughout life. The identity of stem cells in the adult SVZ has been extensively debated. Although, ependymal cells were once suggested to have stem cell characteristics, subsequent studies have challenged the initial report and postulated that subependymal GFAP(+) cells were the stem cells. Here, we report that, in the adult mouse forebrain, immunoreactivity for a neural stem cell marker, prominin-1/CD133, is exclusively localized to the ependyma, although not all ependymal cells are CD133(+). Using transplantation and genetic lineage tracing approaches, we demonstrate that CD133(+) ependymal cells continuously produce new neurons destined to olfactory bulb. Collectively, our data indicate that, compared with GFAP expressing adult neural stem cells, CD133(+) ependymal cells represent an additional-perhaps more quiescent-stem cell population in the mammalian forebrain.     

大鼠海马神经干细胞的原代培养方法

目的探索总结一种简单、高效的大鼠海马神经干细胞原代培养方法。方法选取新生24 h的SD大鼠,剥离出双侧海马,用机械吹打法制成细胞悬液,加入培养液,接种于培养皿中,3 d后半量换液,5~7 d后可传代。每天在荧光倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用免疫荧光法对第2代神经干细胞进行鉴定。结果本方法能准确分离出海马组织,培养出的神经干细胞中无其他混杂的细胞生长,经鉴定呈兔抗巢蛋白(Nestin)阳性和5-嗅-2-脱氧尿苷(BrdU)阳性。结论运用本方法获得的海马神经干细胞纯度高、细胞活力高、增殖能力强。     

The RNA-binding protein HuD regulates neuronal cell identity and maturation

Neural Hu proteins (HuB/C/D) are RNA-binding proteins that have been shown to induce neuronal differentiation activity when overexpressed in immature neural progenitor cells or undifferentiated neuronal tumors. Newly generated HuD-deficient mice exhibited a transient impaired-cranial-nerve-development phenotype at an early embryonic stage. Adult HuD-deficient mice exhibited an abnormal hind-limb reflex and poor rotarod performance. Analysis of neurosphere formation revealed that the number and self-renewal capacity of the neural stem/progenitor cells were increased in HuD-deficient mice. HuD-deficient primary neurospheres also generated a smaller number of neurons. Cohort analysis of the cellular proliferative activity by using BrdUrd and iododeoxuridine labeling revealed that the number of differentiating quiescent cells in the embryonic cerebral wall was decreased. Long-term administration of BrdUrd revealed that the number of slowly dividing stem cells in the adult subventricular zone was increased in the HuD-deficient mice. Taken together, the results suggest that HuD is required at multiple points during neuronal development, including negative regulation of proliferative activity and neuronal cell-fate acquisition of neural stem/progenitor cells.     

Cancerous stem cells can arise from pediatric brain tumors

Pediatric brain tumors are significant causes of morbidity and mortality. It has been hypothesized that they derive from self-renewing multipotent neural stem cells. Here, we tested whether different pediatric brain tumors, including medulloblastomas and gliomas, contain cells with properties similar to neural stem cells. We find that tumor-derived progenitors form neurospheres that can be passaged at clonal density and are able to self-renew. Under conditions promoting differentiation, individual cells are multipotent, giving rise to both neurons and glia, in proportions that reflect the tumor of origin. Unlike normal neural stem cells, however, tumor-derived progenitors have an unusual capacity to proliferate and sometimes differentiate into abnormal cells with multiple differentiation markers. Gene expression analysis reveals that both whole tumors and tumor-derived neurospheres express many genes characteristic of neural and other stem cells, including CD133, Sox2, musashi-1, bmi-1, maternal embryonic leucine zipper kinase, and phosphoserine phosphatase, with variation from tumor to tumor. After grafting to neonatal rat brains, tumor-derived neurosphere cells migrate, produce neurons and glia, and continue to proliferate for more than 4 weeks. The results show that pediatric brain tumors contain neural stem-like cells with altered characteristics that may contribute to tumorigenesis. This finding may have important implications for treatment by means of specific targeting of stem-like cells within brain tumors.     

脑源性神经营养因子对β淀粉样蛋白诱导神经干细胞损伤的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)对β淀粉样蛋白(-βamyloid protein,Aβ)致神经干细胞(neural stem cells,NSCs)损伤的保护作用。方法将培养至第7天的NSCs分组如下,对照组:正常培养的NSCs;损伤组:NSCs+A1β-40;BDNF保护组:NSCs+A1β-40+BDNF;BDNF预保护组:NSCs+BDNF预培养48 h后+A1β-40。分光光度法测定各组培养液乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量。免疫组织化学染色观察培养物微管相关蛋白(MAP-2)。透射电镜观察上述各组NSCs超微结构变化。结果BDNF保护组和BDNF预保护组LDH、NO、NOS与对照组比较无显著性差异,与损伤组比较有显著性差异;MAP-2、GFAP免疫组织化学染色结果显示,BDNF保护组NSCs分化为神经元倾向优于损伤组;超微结构观察,BDNF保护组细胞发生凋亡情况少于损伤组,且BDNF预保护组细胞生长优于BDNF保护组。结论BDNF能拮抗Aβ1-40对NSCs的细胞毒作用;预先加入BDNF与NSCs共培养,其保护作用尤为明显。     

弓形虫ROP18重组腺病毒载体的构建及其对神经干细胞C17.2凋亡的影响

目的 构建弓形虫棒状体蛋白ROP18重组腺病毒载体,研究其对神经干细胞C17.2凋亡的影响.方法 将弓形虫ROP18从PEGFP-G2-ROP18重组质粒上亚克隆至腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP,重组腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP- ROP18经PCR,测序鉴定正确后,与骨架质粒pHBAd-BHG共转染HEK293细胞进行包装,收获,扩增重组腺病毒并对其滴度进行测定.以MOI=70的重组腺病毒感染神经干细胞C17.2,转染不同时间荧光显微镜观察基因的表达情况.转染48 h用CCK-8法检测C17.2的增殖情况;转染24 h采用Annexin V-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白水平.结果 重组ROP18过表达腺病毒在C17.2神经干细胞内能有效表达.转染48 h,与空载体对照组相比,C17.2细胞增殖活性明显降低(P<0.05);转染24 h,流式细胞术检测结果显示,ROP18基因转染组C17.2细胞凋亡率明显增加(P<0.001);Western blot检测显示caspase-3活性片段的表达明显增加(P<0.05).结论 成功构建了弓形虫ROP18重组腺病毒并在神经干细胞C17.2中表达,ROP18重组腺病毒能诱导C17.2神经干细胞凋亡.