克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱…

用半固体－液体两步法克隆的ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分     

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。     

冬虫夏草对白血病人NK和LAK细胞活性的影响

本文采用１２５ＩＵｄＲ释放法，研究了冬虫夏草水提液对缓解期和活动期白血病人ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明冬虫夏草水提液能显著增强活动期白血病人ＮＫ细胞杀伤Ｋ５６２肿瘤细胞的能力，但对ＬＡＫ细胞活性有抑制作用，前列腺素Ｅ１能阻断冬虫夏草水提液增强ＮＫ细胞活性。由此可见，冬虫夏草水提液增强ＮＫ细胞活性在其抗肿瘤免疫中有着极其重要的作用。     

rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较

目的：研究ｒｈＩＬ－１５激活的ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒作用及相关表型的变化。方法：通过用不同浓度的ｒｈＩＬ－１５和ｒｈＩＬ－２分别诱生 ＬＡＫ细胞，研究二者诱生的 ＬＡＫ细胞的增殖状况；当 ｒｈＩＬ－２和 ｒｈＩＬ－１５为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ＭＴＴ法检测 ＬＡＫ细胞的细胞毒作用，利用流式细胞仪检测细胞表面ＣＤ分子表达情况。结果：ＬＡＫ细胞的增殖对ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５均具有时间和剂量依赖性，且无明显差异；终浓度为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＬＡＫ细胞杀伤 Ｋ５６２细胞的能力强于 ｒｈＩＬ－２诱生的 ＬＡＫ细胞，而对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞却明显高于 ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＩＡＫ细胞，且二者杀伤活性均具有时间依赖性；同时ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞的ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞、Ｃｄ９４＋细胞百分率均高于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞。结论：ｒｈＩＬ－１５在体内对ＮＫ细胞功能可能具有较强的调节作用。     

γ－干扰素在淋巴细胞介导的子宫颈角化上皮细胞毒作用中的意义

本研究以子宫颈角化上皮为靶细胞，用试管培养技术及非同位素细胞毒性试验，探讨了干扰素（ＩＦＮ－γ）对淋巴细胞介导的对宫颈角化上皮细胞毒作用的影响及细胞间吸附分子１（ＩＣＡＭ－１）与白细胞功能相关抗原１（ＬＦＡ－１）在细胞毒作用中的意义。结果显示ＣａＳｋｉ、ＳｉＨａ、ＨｅＬａ、Ｗ１２及ＮＣｘ均为ＮＫ抵抗、ＬＡＫ敏感细胞。ＩＦＮ－γ预处理靶细胞明显增加ＬＡＫ细胞的杀伤活性，但对ＮＫ活性影响不大；ＩＦＮ－γ预处理效应细胞可增强ＬＡＫ细胞对上述靶细胞的溶解作用，但并不改变ＮＫ对靶细胞的选择性；抗ＩＣＡＭ－１与ＬＦＡ－１单克隆抗体能有效地降低ＬＡＫ细胞对靶细胞的杀伤作用，而抗ＨＬＡＡＢＣ及ＨＬＡＤＲ则无此作用。提示ＩＦＮ－γ仅对ＬＡＫ细胞介导的对宫颈角化上皮的细胞毒作用有明显增强作用，而对ＮＫ细胞无明显影响；ＩＣＡＭ－１－ＬＦＡ－１通路为ＬＡＫ细胞结合并溶解靶细胞的主要通路，且这种细胞毒作用是非ＭＨＣ限制的。     

脐血LAK细胞对白血病细胞杀伤作用研究

脐血ＬＡＫ细胞对白血病细胞杀伤作用研究李学荣（青岛医学院附属医院儿科青岛２６６００３）沈柏均，张洪泉，侯怀水，时庆，马秀峰（山东医科大学附院低温医学室济南２５００１２）据报道，脐血ＬＡＫ（ＣＢ－ＬＡＫ）对一些靶细胞株的杀伤活性至少与成人外周血ＬＡＫ（...     

MTT比色法检测IL—2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细     

抗MHC I类单抗对NK细胞杀伤能力的影响

探讨ＮＫ细胞杀务与靶细胞表面ＭＨＣＩ类分子的关系。方法用ＨＬＡ－ＡＢＣ单抗培养上清或腹水封闭靶细胞Ｋ５６２表面的ＨＬＡ－ＡＢＣ分子后,分别观察了外周血新鲜ＮＫ细胞、纯化ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞和ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｋ５６２细胞杀伤能力的变化。     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究

目的和方法：实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系ＨＬ－ ６０ 细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响,探索亚硒酸钠对人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞作用机制。结果：８ ×１０６ｍｏｌＬ 或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制ＨＬ－ ６０ 细胞的生长增殖,作用５ ｄ 可在一定程度上诱导ＨＬ－ ６０ 细胞向成熟粒细胞方向分化。８ ×１０６ ｍｏｌＬ 亚硒酸钠作用一段时间,可增强自由基清除系统酶活性,减低胞内自由基水平,降低细胞内ｃＧＭＰ 累积而对ｃＡＭＰ 累积无明显影响。结论：硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关     

HL—60—AR白血病细胞与小鼠中性粒细胞融合后产生分化细胞

通过细胞工程手段,使人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)在体外成熟分化。HL-60-AR白血病细胞在与小鼠外周血中性粒细胞融合所产生的杂交细胞获得了粒细胞的成熟分化标志,同时细胞增殖速度减低、细胞在裸鼠中失去致瘤性。在体外软琼脂培养基中虽有集落形成,但其集落形成率有所降低。     

PHOSPHATIDYLINOSITOL 3-KINASE REGULATES PMA-INDUCED DIFFERENTIATION AND SUPEROXIDE PRODUCTION IN HL-60 CELLS

ABSTRACT

Treatment of the human promyelocytic leukemia cell line HL-60 with phorbol myristate acetate (PMA) is associated with induction of monocytic or myelocytic differentiation. Since phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-kinase) is a critical player in cell proliferation, survival, and differentiation, we studied the role of PI3-kinase during induction of the differentiated monocytic phenotype and superoxide production. In treatment of HL-60 cells with PMA, the PI3-kinase inhibitors LY294002 and wortmannin inhibited cell adhesion and spreading and phagocytic activity. LY294002 and wortmannin also inhibited the proliferation of HL-60 cells. During PMA-induced monocytic differentiation, LY294002 induced apoptosis in a dose dependent manner. The phosphorylation of p85α derived from PMA-stimulated HL-60 cells was shown in the time dependent manner. However, p70 S6 kinase inhibitor, rapamycin, did not inhibit PMA-induced monocytic differentiation. During PMA-induced monocytic differentiation, LY294002 inhibited c-jun protein expression and decrease of c-myc protein level. In contrast, LY294002 induced production of superoxide in the HL-60 cells stimulated with forskolin. Moreover, staurosporine and H7, PKC inhibitors, enhanced superoxide production in dibutyryl cAMP-induced HL-60 cells. These results suggest that PI3-kinase may regulate PMA-induced differentiation signal and provide a crucial link between PKC and cAMP in HL-60 cells.     

裸鼠人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)异种移植模型的建立

将HGPRT~-的人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)接种于裸鼠皮下,能形成实体性白血病肉瘤。肿瘤组织经光镜形态学、细胞超微结构、细胞化学、LDH同工酶谱、染色体分析、细胞遗传标记、以及分化性状的检测等多项指标鉴定,均类似于原来体外长期培养的细胞株。移植瘤细胞能在裸鼠体内连续传代,迄今已传至第12代。这个裸鼠人白血病细胞异种移植模型的建立,将为研究人类白血病细胞在体内的增殖、分化以及对抗白血病药物治疗的反应,提供一个有价值的实验系统。     

PHA－LAK与常规LAK细胞生物学特性的比较

本文对来自正常人Ｏ型外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,经ＰＨＡ预刺激４８小时,然后用ｒＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞（ＰＨＡ－ＬＡＫ）和直接用ｒＩＬ－２诱导的常规制备的ＬＡＫ细胞的生物学特性进行了比较。结果表明ＰＨＡ－ＬＡＫ和常规ＬＡＫ在细胞形态、核型和细胞化学等方面均相似;而在增殖能力、体外存活时间、细胞毒活性方面ＰＨＡ－ＬＡＫ明显优于常规ＬＡＫ。ＦＡＣＳ表型分析表明：ＰＨＡ－ＬＡＫ的表型以ＣＤ３＋ＣＤ８＋为主,而常规ＬＡＫ则以ＣＤ３＋ＮＫＨ￣＋＿１为主,且ＰＨＡ－ＬＡＫＩＬ－２Ｒ的表达水平高于常规ＬＡＫ。采用ＰＨＡ－ＬＡＫ可较好地解决ＬＡＫ细胞的数量和活性问题,这在ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法中有重要的实用价值。     

PHA－LAK与常规LAK细胞生物学特性的比较

本文对来自正常人Ｏ型外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,经ＰＨＡ预刺激４８小时,然后用ｒＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞（ＰＨＡ－ＬＡＫ）和直接用ｒＩＬ－２诱导的常规制备的ＬＡＫ细胞的生物学特性进行了比较。结果表明ＰＨＡ－ＬＡＫ和常规ＬＡＫ在细胞形态、核型和细胞化学等方面均相似;而在增殖能力、体外存活时间、细胞毒活性方面ＰＨＡ－ＬＡＫ明显优于常规ＬＡＫ。ＦＡＣＳ表型分析表明：ＰＨＡ－ＬＡＫ的表型以ＣＤ３＋ＣＤ８＋为主,而常规ＬＡＫ则以ＣＤ３＋ＮＫＨ￣＋＿１为主,且ＰＨＡ－ＬＡＫＩＬ－２Ｒ的表达水平高于常规ＬＡＫ。采用ＰＨＡ－ＬＡＫ可较好地解决ＬＡＫ细胞的数量和活性问题,这在ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法中有重要的实用价值。     

树突状细胞对LAK细胞抗人鼻咽癌细胞的促进作用

本研究对人血树突状细胞(Dendritic cell,DC)联合LAK(Lymphokine Activated Killer cell,LAK)细胞和IL-2对人鼻咽癌细胞株Hep-2的抗肿瘤活性进行了体外观察。实验分为LAK组、LAK+DC组和LAK+DC+IL-2组;效靶比例分别采用10:1和20:1二种。37℃、5％CO_2、饱湿条件下培养48h后,用中性红摄入比色法检测细胞毒活性。结果:各组的细胞毒活性依次为LAK+DC+IL-2组>LAK+DC组>LAK组(P<0.001),随着效靶比例升高,各组细胞毒活性增强(P<0.01).表明DC和IL-2有协同作用,能增强LAK细胞对Hep-2的细胞毒活性。     

HL-60细胞双向分化过程中表面膜抗原的变化

RA和TPA能在体外诱导人的急性早幼粒白血病细胞系HL-60向成熟粒样细胞和单核-巨噬样细胞双向分化。本实验经细胞形态观察、α-NAE细胞化学染色和NBT还原反应证明。用间接免疫荧光法和FACS分析,诱导的HL-60细胞与国产十四种单克隆抗体的结合反应表明,其中六种单克隆抗体可以判定HL-60细胞分化方向。     

LAC-1克隆细胞与L783白血病细胞肿瘤抗原性的研究

本文对小鼠白血病克隆细胞株LAC-1及其母系L783白血病细胞的抗原性进行研究,证实LAC-1瘤细胞表面存在着正常同系SW-1小鼠所不具有的肿瘤抗原(TSA)成份表达,并可被同系宿主免疫系统识别,产生特异性免疫应答反应,包括对相应肿瘤特异的移植排斥作用,细胞介导的特异性杀伤效应和产生高滴度的特异性结合抗体。同时还证明LAC-1细胞与其母系L783白血病细胞具有高度的TSA交叉反应。     

Enhancement of 1,25-dihydroxyvitamin D3- and all-trans retinoic acid-induced differentiation of human leukemia HL-60 cells by Phyllostachys nigra var. henonis

Human myeloid leukemia HL-60 cells are differentiated into monocytic or granulocytic lineage when treated with 1,25-dihydroxyvitamin D₃ [1,25-(OH)₂D₃] or all-trans retinoic acid (RA), respectively. In this study, the effect of acetone fraction prepared from bamboo leaf on cell differentiation was investigated in a HL-60 cell culture system. Treatment of HL-60 cells with 50-400 μg/ml acetone fraction of bamboo leaf for 72 hr inhibited cell proliferation and induced a little increase in cell differentiation, as demonstrated by the MTT and nitroblue tetrazolium reduction assay. Interestingly, synergistic induction of HL-60 cell differentiation was observed when the acetone fraction of bamboo leaf was combined with either 5 nM 1,25-(OH)₂D₃ or 50 nM all-trans RA. Flow cytometric analysis indicated that combinations of 1,25-(OH)₂D₃ and the acetone fraction of bamboo leaf stimulated differentiation predominantly to monocytes, whereas combinations of all-trans RA and the acetone fraction of bamboo leaf stimulated differentiation predominantly to granulocytes. These results suggest that the acetone fraction of bamboo leaf enhanced leukemia cell differentiation and suggest a possibility of bamboo in the treatment of leukemia.