超速玻璃化法冻存小鼠肝细胞球形聚集体的初步研究

现有的肝细胞冻存法是将分散的肝细胞用于冻存.从肝组织消化分离的肝细胞,其细胞完整性和功能都会受影响.有报道用肝细胞球形聚集体培养,效果优于用分散肝细胞培养[1].玻璃化法冻存细胞组织,由于不形成冰晶,对细胞损伤较小,已成功用于冻存胚胎、卵巢、胎肝组织和脑细胞[2-5].本研究将小鼠肝细胞预培养成球形聚集肝细胞,用改进的超速玻璃化法冻存,解冻后与含胶原培养液混合、培养,通过检测培养上清液中ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)浓度判断肝细胞受损漏出情况,检测白蛋白( Alb)浓度判断肝细胞合成功能.对照组用单层贴壁培养分散肝细胞做同样冻存和检测.     

成人脂肪肝整肝肝细胞分离及大量冻存的实验研究

目的建立成人脂肪肝整肝肝细胞的分离以及人肝细胞大量冻存技术,为生物人工肝提供稳定的人肝细胞来源。方法采用胶原酶经肝静脉逆行灌注的方法分离成人重度脂肪肝的整肝肝细胞,并比较常规冻存和程序冻存后肝细胞在细胞活性、贴壁率、LDH漏出量及白蛋白合成能力的差异。结果采用添加N-乙酰半胱氨酸(NAC)的胶原酶灌注液分离肝细胞的产量为(7.4±0.5)×10~6 cells/g肝组织,活性为(81.4±3.4)%,而未添加NAC组的肝细胞产量为(5.6±0.8)×10~6 cells/g肝组织和活性为(67.3±5.0)%,差异均有统计学意义(P0.05)。分离的人肝细胞采用程序冻存后在细胞活性、贴壁率及白蛋白合成能力方面均相应高于常规冻存组(P0.05),LDH漏出量低于常规冻存组(P0.05)。结论应用添加NAC的胶原酶灌注液经肝静脉逆行灌注可提高脂肪肝整肝肝细胞分离的活性及产量,采用程序冻存的方法可以提高冻存人肝细胞的活性,满足生物人工肝对肝细胞的需要。     

分离人肝细胞的超低温保存

探索一种肝细胞超低温冻存的方法。将分离的肝细胞洗涤 ( 50 ｇ 3ｍｉｎ)后 ,用自制配方的肝细胞保存液制成悬浮液 ,置于 - 80℃超低温冰箱内冻存 ,2周后取冻存的肝细胞常规方法复苏 ,锥虫兰染色、计数 ,普通方法接种培养观察 ,以同期分离的细胞接种培养为对照。结果显示 ,采用此法冻存的肝细胞解冻后存活率较高 ,经锥虫兰染色 ,其活率为 ( 95± 1) % ,接种培养的细胞贴壁率为 ( 80± 2 ) % ,白蛋白的合成功能与对照组的白蛋白合成功能无显著差异 ,细胞生长良好。人肝细胞可在 - 80℃超低温条件下保存 ,可望成为贮存肝细胞的有效办法之一。…     

用于生物人工肝的大量猪肝细胞低温冻存技术

目的：比较大量猪肝细胞程序冻存与常规冻存的效果。方法采用二步法胶原酶经肝静脉逆行灌注的方法分离猪肝细胞,分离的肝细胞根据冻存方法与冻存袋的不同分5组：a 组,50 mL 冻存袋,程序冻存;b 组,100 mL 冻存袋,程序冻存;c 组,50 mL 冻存袋,常规冻存;d 组,100 mL 冻存袋,常规冻存;e 组,新鲜分离的肝细胞。各冻存组解冻后,比较各组的肝细胞活性、贴壁率、LDH 漏出量及白蛋白合成能力。结果新鲜分离的肝细胞产量为（1．8＆#177;0．4）1010/肝,活性高达（90．5＆#177;1．7）％,培养后贴壁率为（70．5＆#177;8．5）％。采用程序冻存的 a、b 组在肝细胞活性、贴壁率、LDH 漏出量及白蛋白合成能力方面明显优于常规冻存的 c、d 组（P＜0．05）,但与 e 组新鲜分离的肝细胞相比,其解冻后肝细胞的活性、贴壁率及蛋白合成能力均降低（P＜0．05）,LDH 漏出量增加（P＜0．05）。相同冻存方法条件下,50 mL 袋装与100 mL 袋装冻存效果差异无统计学意义（P＞0．05）。结论采用袋装程序冻存法大量冻存猪肝细胞可满足生物人工肝对肝细胞活性及数量的要求。     

二甲亚砜不同浓度对猪肝细胞-80℃保存影响的初步研究

为寻求有效的长期保存肝细胞方法,我们采用含不同浓度二甲亚砜(DMSO)的保存液对猪肝细胞进行保存,以筛选合适的冻存条件与方法,进一步提高冻存肝细胞的活力,为生物人工肝研究提供细胞材料。 一、材料和方法 1.实验分组及方法:体外两步胶原酶灌注法获取新生中国实验性小型猪(第三军医大学动物研究所)肝细胞,以每毫升     

肝细胞冻存复苏成活率及胆红素代谢活性的实验评价

目的评价成年异种动物肝细胞液氮冻存复苏后对人重型肝炎胆红素的代谢活性,探讨生物人工肝支持系统（EBLSS）使用冻存复苏异种肝细胞的实际价值.方法采用H-E染色镜检肝细胞形态、锥虫兰染色计数肝细胞成活率、细胞培养检测胆红素代谢活性,实验观察液氮中冻存3个月复苏后的成年小白鼠肝细胞形态、存活率和对重型肝炎胆红素代谢活性,并设刚分离的肝细胞作对照组.结果冻存复苏后肝细胞胞质严重丢失,成活率约为30%,重型肝炎的总胆红素、直接胆红素、间接胆红素分别下降8.63%、8.98%、8.06%;新鲜分离肝细胞形态完整,成活率为90%以上,使重型肝炎总胆红素、间接胆红素、直接胆红素分别下降14.09%、12.95%、20.82%（t=8.932,P＜0.01）.结论冻存复苏的异种肝细胞胞质丢失严重,细胞成活率很低,对胆红素代谢活性很弱,不是EBLSS理想的生物材料.     

生物人工肝用肝细胞低温保存的现状与进展

大量功能好的肝细胞是生物人工肝支持系统(bio-artificial liver support system,BLASS)的核心,是制约BLASS临床广泛应用的瓶颈.探索出一种实用的肝细胞低温保存方法,建立一个随时可用(ready to use)的肝细胞库是BALSS普遍推广的基础.目前肝细胞低温保存分为4℃或零下非结冰保存和-80℃或-196℃深低温冻存两大类,两大类保存方法各有优缺点.影响肝细胞低温保存的因素很多,如保存(冻存)液、(冻存)保护剂等.有关肝细胞在低温保存过程中死亡的机制尚未完全阐明,但大量研究发现细胞凋亡是除了坏死之外低温保存肝细胞死亡的另一个重要的途径.     

低温保存猪肝细胞异种移植治疗急性肝衰机理的探讨

目的低温可以降低移植组织细胞的免疫原性，本文将探讨低温对猪肝细胞膜蛋白结构的影响及其细胞移植治疗大白鼠急性肝衰的机理．方法将分离的猪肝细胞在液氮中冻存１５０ｄ后移植入大鼠腹腔内，３ｄ后，切除该鼠的８０％肝叶，并测定猪肝细胞膜蛋白的构象以及鼠肝功能和肝重量．结果冻存肝细胞存活率为冻前７８％，光、电镜显示细胞完整，细胞内糖原和葡萄糖６磷酸酶丰富．新鲜肝细胞膜蛋白构象，α螺旋为４８％，经低温处，其α螺旋增至５９５％．移植组鼠的存活率为１６／１７，明显高于对照组３／９，Ｐ＝０００２２．但肝衰后２和７ｄ的两组间残肝重量及肝功能指标并无显著差异．结论冻存猪肝细胞移植可治疗急性肝衰，其作用机理可能是综合效应的结果；低温使膜蛋白α螺旋结构比率增加，它可能与降低移植细胞的免疫原性有关．     

促肝细胞生长素联合不同DMSO浓度冻存小鼠肝细胞的质量研究

目的使用自行配制组方含有促肝细胞生长素联合不同浓度DMSO的冻存液冻存小鼠肝细胞,以探索一种效果较好的冻存液从而改善冻存肝细胞质量。方法以体重20~30 g的昆明小鼠为肝细胞供体,用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞,将分离好的肝细胞分别以10%、20%、30%浓度的DMSO联合促肝细胞生长素的冻存液(试验组1、2、3组)和标准冻存液(对照组)进行逐级降温缓慢冻存,置液氮中。2个月后快速复苏肝细胞,观察并测定肝细胞活率、功能和形态学。结果冻存小鼠肝细胞2个月复苏检测,试验1组、2组、3组的肝细胞活率台盼蓝(TB)染色结果为80.18±2.44%、86.20±2.33%、78.50±3.43%,而对照组肝细胞活率TB染色49.71±3.51%,试验组和对照组差异具有统计学意义(P0.05),试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义(P0.05);血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的值,试验1组、2组、3组分别为14.03±2.21 U/L、8.05±1.25 U/L、18.40±3.25 U/L;15.14±3.03 U/L、9.12±1.56 U/L、20.51±3.56 U/L;15.11±2.10 U/L、8.26±1.23 U/L、20.31±3.21 U/L,而对照组分别为24.28±1.96 U/L、25.44±2.06 U/L、26.22±3.23 U/L,两组差异具有统计学意义(P0.05),试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义(P0.05);合成血清白蛋白的值,试验1组、2组、3组为3.24±0.18 g/L、4.12±0.23 g/L、3.01±0.45 g/L,对照组为2.56±0.32 g/L,两组差异具有统计学意义(P0.05),试验2组与其他组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论在本研究中,冻存小鼠肝细胞2个月,促肝细胞生长素联合20%DMSO冻存液较常规冻存液能有效减轻小鼠肝细胞的损伤,发挥良好保护作用。     

生物人工肝乳猪肝细胞的聚集培养、冻存及形态、功能观察

目的　为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法　采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞 ,并对其活力、单层、聚集培养及冻存复苏后培养的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果　采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为 ( 3 .1± 1.5 )× 10 10 ,活性超过 95 %。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时 ,肝细胞功能良好 ,可维持 2周左右 ,而在未加入激素和生长因子的培养基中肝细胞虽能存活 1周 ,但功能于 2 4h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养 ,且生物学活性较单层培养显著提高。冻存复苏后肝细胞活力仍超过 90 % ,肝细胞功能与新鲜分离培养的肝细胞功能间无明显差异。结论　采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大 ,细胞生物学活性高 ,可用于构建生物人工肝。冻存复苏后肝细胞仍功能良好。     

Tools and techniques for developing policies for complex and uncertain systems

Agent-based models (ABM) are examples of complex adaptive systems, which can be characterized as those systems for which no model less complex than the system itself can accurately predict in detail how the system will behave at future times. Consequently, the standard tools of policy analysis, based as they are on devising policies that perform well on some best estimate model of the system, cannot be reliably used for ABM. This paper argues that policy analysis by using ABM requires an alternative approach to decision theory. The general characteristics of such an approach are described, and examples are provided of its application to policy analysis.     

Pleuroscopy for diagnosis and therapy for pleural effusions

Pleuroscopy, also known as medical thoracoscopy, is a minimally invasive procedure to inspect and perform a biopsy of the pleural space as well as to perform therapeutic interventions. It differs from conventional video-assisted thoracic surgery in that it may be performed under moderate sedation in the endoscopy suite without the need for intubation or single-lung ventilation. The diagnostic accuracy of this procedure approaches 100% in malignant and tuberculous pleural effusions. Complication rates are low (2%-5%) and are typically minor (subcutaneous emphysema, bleeding, infection), with mortality rates <0.1%. Therapeutic interventions, such as chemical pleurodesis, may be performed during pleuroscopy for recurrent, symptomatic malignant pleural effusions, with success rates approaching 90%. In trained hands, pleuroscopy is a safe and well-tolerated procedure with high diagnostic accuracy and therapeutic efficacy.     

Risk Factors for Death for Males and Females

ABSTRACT. In the Stockholm Prospective Study, 531 male and 163 female deaths had occurred during 14.5 years of observation. Deaths were divided into three categories: “ischemic”, “neoplastic” and “other” and their relations to entry characteristics were analyzed. For ischemic vascular deaths age, smoking, systolic blood pressure and triglycerides were independent risk factors for both sexes, while cholesterol and weight/height index were not. For neoplastic deaths age, smoking, systolic blood pressure and ESR were positively and cholesterol and weight/height index negatively associated. This negative association was found especially for colon carcinoma and not for, e.g., prostatic and bronchial carcinoma in men. For other deaths age, blood pressure and ESR were independent risk factors for men, and age, smoking and ESR for women.