几丁糖薄膜对肌腱粘连及愈合影响的实验研究

目的　研究几丁糖薄膜对肌腱粘连和愈合的影响,为临床应用几丁糖薄膜预防肌腱术后粘连提供实验依据。方法　以55 只6～8 个月来亨鸡的趾深屈肌腱为实验模型,将切断的趾深屈肌腱周围包裹几丁糖薄膜,术后2、4、6、8和10 周分别测量肌腱的活动或抗张强度,肉眼及病理切片观察肌腱的粘连、愈合情况。结果　几丁糖薄膜能有效预防肌腱粘连,早期(即4 周内)可以影响肌腱愈合,4 周后可加快肌腱愈合和增加肌腱抗张强度。结论　几丁糖薄膜具有无毒副作用、生物通透性好及生物降解、吸收好,并可以选择性抑制成纤维细胞生长等优点,能有效预防肌腱粘连,晚期(4 周后)可加快肌腱愈合,是一种较为理想的预防肌腱粘连的生物材料     

羟丁基壳聚糖预防大鼠腹腔粘连的实验研究

目的 探讨羟丁基壳聚糖对大鼠术后腹腔粘连的预防作用.方法 清洁级SD大鼠90只,雌雄各半,体重250～280 g,随机分为3组(n=30).采用纱布摩擦盲肠浆膜面制作腹腔粘连动物模型后,A、B组分别于盲肠表面喷涂2 mL浓度为2%的羟丁基壳聚糖溶液及透明质酸钠凝胶,C组旷置30 s后关腹.术后观察大鼠一般情况,术后2、4剧每组各取15只大鼠,行大体观察及组织学观察,双盲法行粘连程度分级.术后4周A、C组透射电镜观察创伤处盲肠壁的超微结构.结果 术后人鼠均存活至实验完成.术后2周,A、B组腹腔粘连程度较轻,纤维结缔组织及胶原增生较少,C组腹腔粘连较重,纤维结缔组织大量增生;根据Nair五级分级标准及组织学观察分级A、B组与C组差异有统计学意义(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后4周,A组粘连程度轻,纤维结缔组织及胶原增生少,C组腹腔粘连严重,纤维结缔组织及胶原大量增生,B组介于两者之间,3组分级差异有统计学意义(P＜0.05).透射电镜观察结果显示:A组成纤维细胞不活跃,胶原纤维较纤细,排列稀疏;C组成纤维细胞活跃,胶原纤维致密、紊乱.结论 羟丁基壳聚糖可显著减少大鼠腹腔术后纤维结缔组织增生,明显抑制成纤维细胞的活性,具有长时间预防腹腔粘连的作用.     

培养基钙浓度对复方壳多糖组织工程皮肤基底膜构建的形态学研究

目的寻找最适于组织工程皮肤生长及基底膜构建的体外培养基钙浓度。方法按照鲁元刚等建立的方法制备复方壳多糖组织工程皮肤，根据培养基钙浓度不同，分为1．00、1．45、1．65和1．95mmol／L四组。在37℃、5％CO2及90％以上湿度孵箱内浸没培养3d后，将培养物置于不锈钢筛网上进行气一液界面三维培养，每天换液1次。培养7、15d，行HE、PAS染色观察组织工程皮肤的组织学特性；并利用免疫组织化学染色对基底膜的主要成分——Ⅳ型胶原进行观察，评价基底膜构建情况。结果各组组织工程皮肤组织学观察类似正常皮肤，有分化良好的表皮和致密真皮，但1．95mmol／L组表皮分化较其他组更好；1．00、1．45及1．65mmol／L组角化层外侧常伴未角化的角质形成细胞，1．95mmol／L组表皮细胞角化完全，且与颗粒层细胞结合牢固。PAS染色显示各组真、表皮间有紫红色带状结构；免疫组织化学染色显示真皮与表皮间Ⅳ型胶原反应呈阳性，且1．95mmol／L组阳性反应强于1．00mmol／L组。结论钙浓度为1．95mmol／L的培养基最适合于复方壳多糖组织工程皮肤生长及基底膜构建。     

几丁糖/海藻酸敷料对海水浸泡创面作用的实验研究

目的 观察几丁糖(chitosan,CTS)/海藻酸(alginate,ALG)敷料对大鼠海水浸泡创面的作用.方法 取健康SD大鼠25只,体重250～300 g,于脊柱两侧切取直径1.8 cm圆形创面,制作皮肤创面模型,左侧为实验组,右侧为对照组.将创面浸泡于预先配置的人工海水1 h后,实验组采用CTS/ALG敷料外敷创面,对照组用无菌纱布外敷.行大体观察并记录创面愈合时间;术后3、5、7、10、12 d切取包括创面在内的2 cm×2 cm皮肤标本,行HE染色和免疫组织化学Envision法染色,观察创面组织学改变及EGF受体(EGF receptor,EGFR)、bFGF表达情况.结果 实验组创面炎性反应轻,结痂收缩较快;对照组创面结痂收缩较慢.实验组创面完全愈合时间为(11.68±0.57)d,对照组为(12.51±0.54)d,比较差异有统计学意义(P＜0.05).实验组自术后3 d开始出现肉芽组织增生及细胞浸润,胶原组织增生,创面皱缩及上皮化,至术后10 d胶原组织已排列整齐,上皮化过程基本完成,可见皮肤附件出现,术后12 d完全愈合;对照组相应时间点细胞浸润出现晚,且出现肉芽组织伴溃疡,上皮化过程较晚.免疫组织化学观察示实验组术后3、5 dbFGF在血管内皮细胞和间质纤维母细胞内高表达,EGFR在血管内皮细胞内高表达,术后7、10、12 d呈低表达;对照组术后相应时间点bFGF及EGFR呈低表达和无表达.结论 CTS/ALG对海水浸泡创面具有促进愈合作用,但其机制仍有待进一步深入研究.     

煅烧骨与水凝胶复合对骨髓基质细胞贴附和生长的影响

目的：观察煅烧骨（CBB）与聚氧化乙烯－聚氧化丙烯－聚氧化乙烯三聚体（PEO－PPO－PEO）聚合物水凝胶（HG）复合对骨髓基质细胞（MSC）的贴附，增殖及分化的影响，探讨组织工程骨构建的最佳方法。方法：CBB、HG、MSC按不同方式和顺序复合，形成三种复合物CBB／HG／MSC和A组、HG／MSC／CBB为B组、CBB／MSC／HG为C组，CBB／MSC作为对照进行体外培养。5、10天取材，扫描电镜观察细胞形态以及与材料的贴附情况，细胞计数观察其增殖情况，组织化学方法检测MSC的碱性磷酸酶（ALP）活性及免疫组织化学方法检测其Ⅰ型胶原基因表达情况，结果：扫描电镜见A、C组与对照组细胞完全伸展，但A组细胞数量明显增多，重叠生长，细胞外基质分泌增加，优于C组和对照组，而B组细胞大多数圆形，轻微伸展，无细胞外基质分泌。A组与C组的ALP活性无差异（P＞0．05），但显著高于B组和对照组（P＜0．05＝。5天时四组细胞Ⅰ型胶原合成情况无明显差异，但10天时B组细胞的Ⅰ型胶原平均灰度值明显高于其它三组（P＜0．01）。结论：CBB、HG与细胞不同的复合对MSC的贴附，增殖，分化均有影响，CBB／HG／MSC顺序复合较好。     

几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞相容性的实验研究

为了观察几丁质及几丁糖对雪旺氏细胞生长的影响，用新生Ｗｉｓｔｅｒ鼠坐骨神经及臂丛神经的雪旺氏细胞接种于几丁质膜片及几丁糖液上，在培养１，３，７天时用光镜及扫描电镜进行观察。发现，几丁质及几丁糖上生长的雪旺氏细胞占９４％，成纤维细胞占６％；对照组雪旺氏细胞占７１％，成纤维细胞占２９％。几丁糖内的细胞数多于几丁质膜片上的细胞数。认为，几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞有着良好的组织相容性，几丁糖液优于几丁质膜片，两者均可抑制成纤维细胞的生长。     

聚丙烯酰胺水凝胶颏部充填26例

目的：总结聚丙烯酰胺水凝胶作颏部充填26例的临床体会,寻找一种理想的整形填充材料。方法：聚丙烯酰胺水凝胶与多种药物混合成可推动状态,行颏部注射。结果：26例颏部充填患者,经随访3个月～2年,效果满意。结论：聚丙烯酰胺水凝胶作颏部充填,具有操作简单、安全可靠、痛苦小、外表不留瘢痕等优点。     

几丁糖抑制人成纤维细胞增殖的实验研究

目的通过研究几丁糖对人成纤维细胞的细胞周期和Ki-67蛋白表达的影响,探讨几丁糖预防手术后组织粘连的机制。方法分别用含0、0.01、0.1、1.0、10.0mg/ml几丁糖的培养液作用于人成纤维细胞48h后,用流式细胞仪检测细胞周期。制作成纤维细胞的细胞爬片,用以上各浓度的含几丁糖培养液作用24h后,行细胞核的Ki-67蛋白免疫组织化学染色,观察细胞核中Ki-67蛋白的表达情况。结果在几丁糖作用下,成纤维细胞的生长在形态上受到明显抑制。几丁糖浓度为1.0、10.0mg/ml时,处于增殖期的成纤维细胞百分率分别为32.3%±5.2%、14.7%±2.9%,均显著低于几丁糖浓度为0时的百分率41.9%±5.8%,具有统计学意义(P<0.05);几丁糖浓度为0.01、0.1mg/ml时,处于增殖期的成纤维细胞百分率分别为39.0%±6.0%、35.5%±3.4%,虽低于几丁糖浓度为0时,但差异无统计学意义(P>0.05)。几丁糖浓度为0.1、1.0、10.0mg/ml时,Ki-67阳性细胞百分率分别为37.3%±3.4%、30.5%±6.2%、17.8%±3.0%,均显著低于几丁糖浓度为0时的57.6%±8.9%,具有统计学意义(P<0.05);几丁糖浓度为0.01mg/ml时,Ki-67阳性细胞百分率为54.1%±8.0%,低于几丁糖浓度为0时,无统计学意义(P>0.05)。结论几丁糖能抑制人成纤维细胞增殖,使处于静止期细胞数量增多,这可能是其预防手术后组织粘连的机制之一。     

黄芪多糖/壳聚糖/聚乳酸为支架的组织工程骨修复牙周组织缺损的实验研究

目的 探讨以黄芪多糖／壳聚糖／聚乳酸（astragalus polysaccharides／chitosan／polylacticacid，AP／C／PLA）为支架的组织工程技术修复水平型牙周组织缺损的可行性。方法成年健康雄性杂种犬10只，体重13±2kg，以犬骨髓基质细胞（marrow stromalcells，MSCs）为种子细胞，分别与AP／C／PLA及C／PLA支架构建组织工程复合物。10只实验犬于双侧下颌第3、4前磨牙颊侧制备水平型牙周缺损模型。将牙周缺损模型随机分为4组（n=10）：A组，缺损直接龈瓣冠向复位缝合，作为空白对照；B组，缺损处植人AP／C／PLA和条件培养基，龈瓣冠向复位缝合，作为培养基对照；C组，缺损处复合植入C／PLA和MSCs，龈瓣冠向复位缝合，作为材料对照；D组，缺损处复合植入AP／C／PLA和Mscs，龈瓣冠向复位缝合，作为实验组。术后8周，分别收集牙周标本行大体观察、X线片及组织学观测。结果 体外诱导培养的MSCs表达1型胶原及碱性磷酸酶，具有成骨细胞活性。各组动物对手术耐受性好，术后观察期内未见支架材料暴露，伤口愈合良好。X线片检查可见，A组牙槽骨密度及高度无明显增加；B组骨密度有一定程度增加，根分叉处增高的牙槽骨量少，邻间牙槽骨无明显增加；C组骨密度增加，根分又处牙槽骨基本恢复原有高度，邻间牙槽骨增加不明显；D组骨密度明显增加，根分叉处和邻间牙槽骨基本恢复原有高度。组织学观察显示，与A组相比，D组形成更多的新生牙槽骨、牙周膜和牙骨质，且新生牙槽骨矿化程度高，骨板排列趋向规则，出现整齐同心圆状的哈佛系统，基本具备骨组织的正常结构；牙槽骨与牙周膜的连接面呈锯齿状，沿根面还可见薄层的牙骨质沉积；新生牙周膜纤维呈束状，排列较密集且呈方向性，类似Sharpey’s纤维。A、B、C、D组新生牙槽骨高度分别为0．83±0．30、1．46±0．55、2．67±0．26及2．90±0.41mm；新生牙骨质高度分别为0．78±0．45、1．30±0．60、2．29±0．18及2．57±0．22mm；新生结缔组织附着高度分别为0．80±0．22、1．33±0．34、2．23±0．42及2．64±0．27mm；各指标D组与A、B、C组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 以AP／C／PLA为支架材料构建的组织工程骨修复水平型牙周骨缺损可以获得部分牙周组织再生。