聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究

目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性。结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%。其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带。结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值。     

酶联免疫吸附试验反映的急性和慢性曼氏血吸虫病之间的血清学差异

作者应用曼氏血吸虫的虫卵、尾蚴和成虫抗原,以酶联免疫吸附试验(ELISA)术检测急性和慢性曼氏血吸虫病病人和实验猴血清,探索其血清学的差异。试验对象:(1) 确诊的急性或慢性血吸虫病病人21例,这些病人在4个月前初次感染,用加藤厚涂片或改良 Ritchie 醛醚法计数粪便虫卵,排卵率为10～1,800个/克粪便;(2) 慢性血吸虫病13例,至少已感染3年,只有1例经过治疗,排卵率为50～3,500个/克粪便;(3) 巴西流行地区肝脾肿大或肝     

曼氏血吸虫热休克蛋白70在感染的狒狒体内产生的早期体液免疫应答

通过药物治疗 ,螺的控制 ,健康教育和卫生措施等手段 ,人们不断努力 ,以期消灭血吸虫病。但是 ,血吸虫病仍然是传播广泛并为最重要的寄生虫病之一。针对这一公共卫生问题 ,作者研究了曼氏血吸虫感染初期宿主体内抗体的 DNA重组体蛋白质应答。本实验的观察对象为 7只未感染过曼氏血吸虫的狒狒 ,按每公斤体重感染 350条左右曼氏血吸虫尾蚴。每周收集血清和粪便 ,共1 2 wk。急性感染的狒狒以 AC- 1到 AC- 7标记 ,并筛选曼氏血吸虫成虫微粒体抗原( MAMA)。根据 MAMA快速 ELISA方法的结果 ,从感染 4 wk的血清中筛选 c DNA表达文库。感…     

不同药物治疗对埃及血吸虫及曼氏血吸虫混合感染病人血清循环阳极抗原水平的影响

160名混合感染埃及血吸虫和曼氏血吸虫苏丹病人经不同药物治疗后检测其血清循环阳极抗原(CAA)水平。病人随机分成四组,每组分别用敌百虫、羟胺喹、吡喹酮及多种维生素制剂治疗。治疗前及治疗后1日、5日分别收集病人血清、粪便和尿液。尿液采用Feldmeier的过滤锥蓝染色法查找虫卵、粪便虫卵计数采用Teesdale等改进的加藤     

一种血吸虫病循环抗原的特性

Berggren等曾报道重感染曼氏血吸虫的小白鼠和大白鼠具有来自血吸虫的循环抗原。本文报道循环抗原也发现于埃及血吸虫、曼氏血吸虫和日本血吸虫的盐水浸出液以及重感染日本血吸虫的小白鼠血清中,并对该种抗原的特性进行了研究。作者从重感染日本血吸虫的小白鼠获得血清,另外制备曼氏血吸虫匀浆以免疫家兔,并用各种免疫扩散与免疫电泳技术测定其血清的特性;还提取曼氏血吸虫匀浆三氯醋酸可溶部分氯仿浸出液,测定其成分并试验其     

门静脉周纤维化人群呈现高水平抗曼氏血吸虫虫卵抗原的IgG4抗体

曼氏血吸虫病主要由于虫卵沉积于宿主肠道和肝门脉系统,虫卵抗原导致肉芽肿和纤维化而致病。有证据显示人类对曼氏血吸虫再感染的易感性和IgG4产生增加有显著联系。随着超声检查在曼氏血吸虫病中的应用,可以根据门静脉周纤维化(peri portalfibrosis)所致不同程度的门静脉周厚度来划分病人,以此来探究曼氏血吸虫病易感性相关的肝脾疾病的发展与体液免疫间的关系。收集曼氏血吸虫流行区340名参加者的医疗记录和定量粪便虫卵计数,对有疾病症状(腹痛腹泻)或触诊肝脾肿大者2 6 7人进行超声检查。患者接受治疗,一年后采集粪便作再感染统计。同时…     

用抗原序列标签法识别编码曼氏血吸虫抗原的基因

本文描述了一种用抗原序列标签(AST)识别编码曼氏血吸虫抗原基因的方法。 经临床及粪便检查从慢性血吸虫病病人中挑选出粪检曼氏血吸虫虫卵阳性的患者,收集治疗前的血清。经ELISA分析,从中选出17名含有抗曼氏血吸虫成虫抗原或虫卵抗原的高水平IgM患者的血清,混和后用亲和层析法纯化获得抗曼氏血吸虫成虫的免疫球蛋白,用于筛选曼氏血吸虫成虫λZAP cD-     

基于重组酶聚合酶扩增的曼氏血吸虫核酸可视化检测技术的建立及初步评价

目的 结合重组酶聚合酶扩增技术(RPA)和侧流层析试纸条(LFD)，建立一种快速、便捷的曼氏血吸虫核酸可视化检测方法，并初步评价其检测效能。方法 以曼氏血吸虫细胞色素c氧化酶亚基1(SmCOX1)基因为靶序列，利用Primer Primer 5软件结合手工辅助，设计特异性引物和探针并进行筛选，建立曼氏血吸虫核酸LFD-RPA检测方法。制备不同浓度(1 ng/μl、100 pg/μl、10 pg/μl、1 pg/μl、100 fg/μl、10 fg/μl、1 fg/μl、0.1 fg/μl)的曼氏血吸虫成虫基因组DNA和含有不同拷贝数浓度(10~5、10~4、10~3、10~2、10~1、10~0、10^-1拷贝/μl)的SmCox1重组质粒DNA，评价所建立方法的敏感度。以曼氏血吸虫成虫、日本血吸虫成虫、埃及血吸虫虫卵、感染曼氏血吸虫双脐螺(阳性双脐螺)和阴性双脐螺、感染日本血吸虫钉螺(阳性钉螺)和阴性钉螺、华支睾吸虫成虫、大片形吸虫成虫、卫氏并殖吸虫成虫基因组DNA为模板，评价所建立方法的特异性。将30只雌性BALB/c小鼠随机分为40尾感染组、80尾感染组和健康...     

免疫细胞和血清对曼氏血吸虫感染的免疫抑制小鼠肝脏保护作用的比较

曼氏血吸虫虫卵肉芽肿是细胞介导的Ⅳ型变态反应。本研究试图分析肉芽肿在虫卵诱导的肝损伤中的保护作用。将曼氏血吸虫感染的供体鼠淋巴细胞或血清被动转移给重感染的免疫抑制受体鼠,测定其血清谷草转氨酶(SGOT),并对肝切片进行组织学检查。     

粪便中日本血吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

目的建立一套系统、完整的粪便日本血吸虫虫卵DNA提取法及PCR优化体系。方法利用蛋白酶K和苯酚法从感染日本血吸虫尾蚴的家兔粪便中提取DNA，根据日本血吸虫基因（AF00369）设计特异性引物，以粪便中提取的DNA为模板，采用PCR方法扩增目的基因片段，对PCR方法的各种反应条件进行优化并采用有限稀释法推测PCR检测法可检测到的最低虫卵数。结果以感染家兔的粪便中提取的DNA为模板．用PCR方法可扩增到分子量大小约为400bp的特异性条带，测序结果经BLAST工具进行分析．与日本血吸虫基因（AF00369）比对的同源性为96％；25μl PCR反应体系的最优化反应条件：MgCl2 1．5μl；dNTP0．5μl；引物1．0μl；DNA模板5．0μl；TaqDNA聚合酶0．5μl。扩增程序为：94℃预变性5min、94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸30s，30个循环、72℃延伸7min、4℃保存。PCR检测法可检测到的最低虫卵数为0．015个。结论成功建立感染家兔粪便中虫卵DNA的提取方法及PCR血吸虫基因片段检测方法，同时对PCR反应条件进行优化，为从分子角度检测日本血吸虫虫卵DNA提供科学的实验依据。     

曼氏血吸虫虫卵纤溶酶的识别及该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原代谢的调节作用

曼氏血吸虫虫卵提取物能抗血小板活化、凝集 ,从而抑制纤维蛋白原聚集形成纤维蛋白 ,抑制血栓形成。Doenhoff等从虫卵中分离出一种相对分子质量为 2 70 0 0的纤溶酶 ,并分析了该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原的代谢作用。选用波多黎各分离的曼氏血吸虫 ,制备尾蚴、成虫和虫卵及其提取物。取 10U血栓素 ,加至含 5 0mg人纤维蛋白原的10mlPBS中 ,混和液加至 10cm培养皿中 ,放入纤维素膜 ,膜表面分别加曼氏血吸虫尾蚴、成虫和虫卵提取物 ,37℃孵育 4h ,摄影观察结果 ,比较尾蚴、成虫和虫卵提取物和不同浓度人纤溶酶的溶解面积大小 ,检测血…     

吡喹酮对曼氏血吸虫虫卵的作用及其控制脑型血吸虫病的可行性

吡喹酮对血吸虫成虫有很强的杀伤力,但对虫卵的作用尚未取得一致的意见。脑型血吸虫病,主要与虫卵毒素的分泌及虫卵肉芽肿的形成有关。为此,作者研究了吡喹酮不同疗程对曼氏血吸虫虫卵的影响,并探讨了吡喹酮用于脑型血吸虫病的可行性。实验用小鼠,每鼠感染曼氏血吸虫波多黎各株尾蚴200条,7周后,选择每克粪便虫卵在100个以上的阳性鼠作为观察对象。将感染度相似的动物分配在同一实验组内。实验一:共4组,每组10个鼠。1.吡喹酮60mg/kg     

基于重组酶介导核酸等温扩增反应的曼氏血吸虫 基因检测方法的建立

目的　建立一种可用于曼氏血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法（Recombinase?aided amplification, RAA）。方法　以曼氏血吸虫121 bp高重复基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计、合成引物及荧光探针,建立并优化荧光RAA法反应体系。分别以不同拷贝数的含121 bp基因片段的重组质粒及不同浓度曼氏血吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA法扩增,评价该方法的敏感性;分别以日本和埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,评价其特异性。结果　建立的荧光RAA法可在39 ℃、20 min内特异性扩增曼氏血吸虫基因组DNA。以重组质粒为模板,荧光RAA法最低可检出的质粒拷贝数为10拷贝/μL;以基因组DNA为模板,荧光RAA法最低可检测浓度为0.1 fg/μL。以日本血吸虫虫卵、埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,结果均为阴性。结论　成功建立了一种可用于曼氏血吸虫DNA检测的荧光RAA法,该方法反应快捷、操作简便,敏感性和特异性均较好。     

不同抗原对曼氏血吸虫病酶联免疫吸附试验的适用性

本文作者在苏里南用7种不同的曼氏血吸虫抗原作酶联免疫吸附试验(ELISA)检测曼氏血吸虫病患者血清中的特异性抗体。抗原材料从感染48天的金色仓鼠体内收集成虫和虫卵,制备7种抗原:(1)成虫抗原(AWA);(2)成虫超速离心抗原(AWA-UC);(3)三氯乙酸-可溶性成虫抗原(AWA-     

曼氏血吸虫原肌球蛋白:重组蛋白的制备、纯化及其用于免疫诊断的可能性

从曼氏血吸虫成虫及童虫中曾分离出一约40kDa多肽,它具有较强的免疫原性,并为慢性曼氏血吸虫感染者和经照射尾蚴免疫的动物血清所识别。该多肽为原肌球蛋白(tropomyosin),是肌肉收缩系统中的一种主要调节分子。本研究用DNA重组技术制备曼氏血吸虫原肌球蛋白,与正常人及多种寄生虫感染病人血清进行Western blot和ELISA,进一步研究其在免疫诊断中的价值。     

基于RPA-LFD的日本血吸虫循环核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价

目的结合重组酶聚合酶扩增(RPA)技术及侧流层析试纸条法(LFD)建立日本血吸虫特异核酸片段的快速可视化检测方法,并初步评价其检测日本血吸虫感染小鼠血清中血吸虫循环核酸的应用价值。方法以日本血吸虫非长末端重复序列逆转录转座子SjCHGCS19为靶标,设计RPA引物和探针,以日本血吸虫基因组DNA为模板进行RPA及LFD检测,并优化RPA反应温度及时间,建立日本血吸虫核酸RPA-LFD快速可视化检测方法。用RPA-LFD检测模板量为10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5)、10~(-6)和10~(-7)ng的日本血吸虫基因组DNA,评价其敏感性;用RPA-LFD方法检测日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫及华支睾吸虫基因组DNA,评价其特异性。制备含0.01、0.1、1、10和100 ng日本血吸虫成虫基因组DNA的模拟阳性鼠血清。用40条日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采集并分离感染前及感染后7、21、35 d小鼠尾静脉血清。提取模拟阳性鼠血清、感染小鼠血清样品中的循环DNA,评价RPA-LFD检测血清中血吸虫特异核酸的可行性及其早期检测价值。结果建立了快速可视化检测SjCHGCS19重复序列的RPA-LFD方法,30～45℃反应10 min即可检出目的片段。RPA最优反应条件为39℃,20 min。RPA-LFD对日本血吸虫成虫基因组DNA的最低检出限为10~(-6)ng (1 fg)。特异性评价结果显示,RPA-LFD检测曼氏血吸虫和埃及血吸虫基因组DNA结果为阳性,检测卫氏并殖吸虫和华支睾吸虫基因组DNA结果为阴性。RPA-LFD方法可成功检出含0.01～100 ng日本血吸虫基因组DNA的模拟阳性鼠血清以及血吸虫感染后7、21、35 d鼠血清中的游离SjCHGCS19 DNA片段。结论建立了一种快速、可视化检测日本血吸虫循环核酸的RPA-LFD方法,该方法敏感性高,具有检测血吸虫早期感染的潜在应用价值。     

酶联免疫吸附试验可检出感染曼氏血吸虫小鼠的抗虫卵和成虫特异性抗体

本文应用曼氏血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(AWA)作酶联免疫吸附试验检测小鼠曼氏血吸虫感染。用250条尾蚴感染小鼠,于70～80天后收集成虫及虫卵,加PBS(pH7.2)分别匀浆。匀浆物搅拌过夜,再离心10000转/分钟,共1小时,然后用PBS透析,即得到SEA和AWA。DDY小鼠感染30或50条曼氏血吸虫尾蚴后,每两     

曼氏血吸虫对水鼠适应性的实验证据和生态学展望

水鼠(Nectomysspp)具有半水栖生活习性,且与血吸虫病流行区分布重叠,因此它们很可能在日常生活中感染曼氏血吸虫。水鼠对曼氏血吸虫非常敏感,并且能够排出活的虫卵。上述特点说明水鼠有可能是曼氏血吸虫的保虫宿主。Andrea等在水鼠自然感染曼氏血吸虫流行区进行了实验。实验1调查了水鼠日常的生活习性,他们用单位时间内捕获水鼠的频率来衡量。在试验区2 ,7,10这3个月中,每月连续3个晚上,放置15个鼠笼(4 0×2 0×2 1)cm3在水鼠出没、栖居的地方。每个鼠笼相距13m ,全天打开,笼内放上由花生、香蕉、咸肉、燕麦等混合物作钓饵。在4p .m～10 p …     

重组酶聚合酶扩增结合电化学DNA传感器检测日本血吸虫方法的建立

目的联合重组酶聚合酶扩增及电化学DNA传感器检测技术,建立一种敏感、特异且简单的日本血吸虫(Schistosoma japonicum)核酸检测方法。方法提取日本血吸虫基因组DNA,以Sj R2基因片段为靶序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物与探针,与电化学DNA传感器(EC)检测技术联合,将探针固定于多通道电极芯片进行界面RPA扩增及电化学检测,建立日本血吸虫核酸等温检测方法。优化RPA反应条件,通过检测10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8ng日本血吸虫基因组DNA,评价RPA-EC方法的敏感性;通过检测10 ng日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫的基因组DNA,评价RPA-EC方法的特异性。取10只6~8周龄C57成年小鼠,每鼠经腹部贴片感染40条日本血吸虫尾蚴,分别于感染前(0 d)和感染后7、21、35 d收集尾静脉血清,验证RPA-EC方法检测感染动物动态血清DNA中Sj R2基因片段的可行性。结果RPA-EC联合检测方法可在37℃、30 min内完成SjR2基因片段的界面快速扩增及检测,成虫基因组DNA的最低检出限可达10^-8ng,与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫基因组DNA无交叉反应,具有较好的特异性。日本血吸虫感染小鼠实验结果显示,RPA-EC联合检测方法可高敏感检出感染后7、21、35 d等不同感染期小鼠血清中的SjR2基因片段。结论本研究所建立的RPA-EC联合检测方法敏感性高、特异性好、操作简便,具有一定的应用前景。     

曼氏血吸虫抗原和循环抗原的酶联免疫吸附试验抑制法的检测及其特性

本文报告以感染曼氏血吸虫鼠血清作指示抗体,用酶联免疫吸附试验抑制法(IELI-SA)检测曼氏血吸虫抗原。从感染螺蛳及鼠获得尾蚴、虫卵、成虫,制备可溶性尾蚴免疫原(SCI)、成虫免疫原(SWI)、卵抗原(SEA),将可溶性虫卵抗原经亲和层析得纯化卵抗原(CCI)。此外还制成日本血吸虫可溶性卵抗原(S,SEA),肝吸虫成