氧化型低密度脂蛋白促进巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1表达及辛伐他汀干预研究

目的：观察氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠腹腔巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）表达的影响，探讨LOX-1在泡沫细胞形成中的作用。方法：无菌分离、培养大鼠腹腔巨噬细胞，分别以终浓度10mg／L，25mg／L，50mg／L，75mg／L，100mg／L ox—LDL与巨噬细胞共孵育24h，以RT—PCR和Western blotting检测LOX-1基因表达水平；以终浓度75mg／L ox—LDL与巨噬细胞分别共孵育0．5h，3h，6h，12h，24h和36h后检测LOX-1表达水平；以不同浓度辛伐他汀预处理巨噬细胞后，再与ox-LDL共培养，检测LOX-1基因表达。结果：ox-LDL终浓度为10—75mg／L时，随着浓度增大，LOX-1mRNA和蛋白表达均增强，75mg／L时达高峰，ox-LDL 100mg／L时LOX-1表达显著降低（均P〈0．05）；自ox-LDL与巨噬细胞共孵育6h开始，LOX-1表达逐渐增强，24h达高峰，36h时LOX-1表达下降（均P〈0．01）；不同浓度辛伐他汀均使LOX-1表达降低，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：ox-LDL在一定范围内以剂量和时间依赖方式增强大鼠腹腔巨噬细胞LOX-1表达，LOX-1在巨噬细胞摄入ox-LDL的过程中可能具重要作用，辛伐他汀可抑制巨噬细胞LOX-1表达。     

MMP-2、MMP-9在血脑屏障损伤中的作用

局灶性脑血管病都伴随血脑屏障（blood—brain barrier，BBB）的损伤，血脑屏障物质结构基础是脑毛细血管内皮细胞及基底膜，MMP-2和MMP-9通过降解基底膜导致血脑屏障损伤。     

姜黄素对人胃癌BGC-823细胞增殖及MMP-9、COX-2mRNA表达的影响

目的 研究姜黄素在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制.方法 体外培养人胃癌BGC-823,MTT法检测姜黄素在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检测其对COX-2、MMP-9 mRNA表达的影响.结果 MTF结果显示:相同干预浓度姜黄素抑制人胃癌细胞增殖,其24、48、72 h的IC50分别为:(62.192±7.802) μmol/L、(46.365±8.991) μmol/L和(45.503±9.126) μmol/L; RT-PCR结果显示:正常对照组及姜黄素干预组的人胃癌细胞BGC-823MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.704±0.045,0.147 ±0.052(P＜0.05);COX-2 mRNA灰度值分别为:0.721 ±0.060,0.190±0.027(P＜0.05).结论 姜黄素抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9 mRNA的表达来抑制胃癌细胞增殖.     

置环出血患者子宫内膜局部MMP-9、TIMP-1的表达

目的:研究置宫内节育器(IUD)出血患者子宫内膜局部基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)的表达变化,并分析MMP-9与雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)的相关性。方法:采用免疫组化SP法检测10例正常未上环妇女,24例上环正常患者,25例上环出血患者子宫内膜(正常部位、出血部位)MMP-9、TIMP-1、ER、PR的表达情况。结果:MMP-9在出血部位的表达显著高于正常部位及其他两组,TIMP-1在出血部位的表达显著低于正常部位及其他两组,ER、PR在出血局部间质的表达降低,与其他组比较有显著性,局部MMP-9的表达与ER、PR无显著相关性。结论:局部MMP-9的表达升高、TIMP-1表达下降可能是导致IUD异常出血的直接原因,ER与PR在出血局部间质的表达下降可能与IUD出血有关,MMP-9的表达变化不是由ER或PR的变化引起的。     

MMP-2mRNA、MMP-9mRNA在肺组织损伤修复中的表达

目的 观察MMP-2mRNA和MMP-9mRNA在肺组织损伤修复过程中的表达和变化规律，探讨它们在肺组织损伤修复中作用的分子机制和意义。方法 20只Wister大白鼠，随机分为一个正常组和臭氧攻击损伤后8个时间的实验组，制作大鼠肺损伤模型。应用RT-PCR技术检测MMP-2、MMP-9基因表达规律。结果 成功复制大鼠肺组织损伤动物模型；RTNR检测结果提示：MMP-2、MMP-9基因在正常肺组织为弱表达，在肺组织损伤时表达下调，损伤修复开始时，表达又上调，且明显高于正常肺组织；当肺组织损伤修复达正常时，MMP-2、MMP-9基因表达水平减弱，接近正常水平。结论 MMP-2mRNA、MMP-9mRNA的低表达与肺组织损伤密切相关。     

KAI1、MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1、基质金属蛋白酶9（MMP-9）在子宫内膜异位症（Endometriosis，EMS；内异症）组织中的表达及意义。方法对本院53例内异症者（研究组）及30例正常子宫内膜者（对照组），应用免疫组化sP法检测不同子宫内膜组织中KAI1及MMP-9的表达，分析两组KAI1及MMP-9表达水平及相关性。结果KAI1在研究组中呈低表达，而MMP-9呈高表达；KAI1对照组中呈高表达，而MMP-9呈低表达，两组KAI1及MMP-9表达水平比较差异均统计学有意义（P〈0．05）。内异症和正常子宫内膜组织中KAI1与MMP-9水平均呈负相关（r=-0．402，-0．550，P〈0．05）。结论KAI1及MMP-9在内异症组织中表达呈负相关，其可能参与了EMS异位内膜的转移和侵袭中作用，促进内异症的发生和发展。可成为EMS预后和复发的监测指标之一。     

MMP-9及TIMP-1在子宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)在宫颈鳞癌组织中的表达,及与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学MaxvisioTM法,检测46例宫颈鳞癌,34例宫颈原位癌(CINⅢ)和20例癌旁正常宫颈上皮(NCE)中MMP-9及其抑制因子TIMP-1的表达,分析其表达与宫颈鳞癌的临床分期,病理类型及有无淋巴结转移的关系。结果:MMP-9在宫颈鳞癌,原位癌,NCE中的阳性表达率分别为71.7%,70.6%,25.0%;TIMP-1为54.3%,73.5%,20.0%。MMP-9在NCE组与鳞癌组及原位癌组相比差异有统计学意义(P<0.01),TIMP-1在NCE组与鳞癌组及原位癌组相比差异有统计学意义(P<0.01)。MMP-9和TIMP-1的阳性表达率与临床分期和病理类型均无明显相关性(P>0.05)。MMP-9在淋巴结转移阳性组的阳性表达率明显高于阴性组(P<0.01),而TIMP-1未发现此现象。MMP-9和TIMP-1在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(rs=-0.381,P<0.01)。结论:MMP-9在宫颈癌组织中表达水平的上调和TIMP-1的相对弱表达在宫颈鳞癌浸润和转移中起重要的作用。     

HSG、MMP-2和MMP-9在乳腺癌组织中的表达及意义

[目的]探讨新的增殖抑制基因(hyperplasic suppressor gene,HSG)和基质金属蛋白酶-2、9(matrixmet-alloproteinase-2,-9MMP-2,9)在乳腺癌组织中的表达及意义。[方法]应用免疫组化方法检测唐山市工人医院52例乳腺癌标本和18例乳腺纤维腺瘤标本中HSG、MMP-2和MMP-9表达。[结果]52例乳腺癌组织中HSG、MMP-2和MMP-9的表达分别为46.2%(24/52)、73.1%(38/52)和63.5%(33/52),在乳腺纤维腺瘤中,MMP-2和MMP-9着色很少,HSG的着色很深,表明三者与肿瘤的发生有关;MMP-2的表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和预后复发有关(P﹤0.05);乳腺癌组HSG低表达和MMP-9高表达,与淋巴结转移有关(P﹤0.05),且HSG和MMP-2、MMP-9呈负相关(r=-0.27,P﹤0.05)。[结论]乳腺癌组织中MMP-2高表达预示着病人预后更差,比MMP-9对乳腺癌与后的判断更有价值。综合检测HSG、MMP-2和MMP-9的表达更有利于了解乳腺癌转移的作用机制,更好地判断乳腺癌的进展及预后。     

MMP-2、MMP-9在乳腺导管癌中表达及意义

目的 研究乳腺导管癌中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及与IV型胶原(collagen IV)的关系。方法 免疫组化双染法检测60例乳腺导管癌中MMP-2、MMP-9和IV型胶原的表达并分析其相关性及与肿瘤大小、淋巴结转移及人类表皮生长因子受体-2(C-erbB-2)的关系。结果 MMP-2、MMP-9在乳腺导管癌中的阳性表达率分别为75%,80%,明显高于乳腺正常组织的10%;MMP-2、MMP-9在靠近基膜或者将突破基膜处的癌细胞中表达明显增强,MMP-2、MMP-9在肿瘤直径>2 cm(83.9%,90.3%)、有淋巴结转移(87.0%,91.3%)及C-erbB-2阳性组(80.9%,85.1%)的表达率明显高于相应对照组(58.6%,65.5%),(64.9%,67.6%),(46.2%,53.8%);IV型胶原的表达与MMP-2、MMP-9的表达均呈负相关。结论 在乳腺导管癌的局部侵袭和远处转移过程中,MMP-2、MMP-9对IV型胶原的降解可能起重要作用;联合检测MMP-2、MMP-9和IV型胶原,可能对判断乳腺癌的浸润转移潜能及评估预后有参考价值。     

H19及MMP-2、MMP-9在复发性自然流产患者中的表达及相关性分析

目的:探讨H19及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在复发性自然流产患者中的表达及相关性。方法:体外培养人绒毛外滋养细胞系HTR-8,采用慢病毒感染HTR-8细胞系分别过表达H19及干扰H19的表达,ELISA法检测各组细胞培养上清液中MMP-2及MMP-9蛋白浓度。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测...     

多西环素对兔膝关节骨关节炎软骨及滑膜中MMP-3和TIMP-1mRNA表达的影响

目的探讨多西环素对骨关节炎软骨退变的保护机制,为临床防治退行性骨关节病、治疗创伤性骨关节炎提供实验依据。方法（1）模型制作：成年新西兰大白兔16只,行右侧膝关节前交叉韧带切断术（ACLT）,术后不固定右膝关节。分笼饲养,每笼1只。予以青霉素（40万单位）肌注预防感染,11次／d,注射3d。术后第4天,驱赶实验动物以强制膝关节活动,每天60min,持续30d。术后4周,右膝关节创伤性关节炎模型建立完成。（2）动物分组：将动物随机分为两组,每组8只,实验组注射多西环素[1．33％多西环素溶液0．3ml（总量0．4mg）],对照组注射生理盐水（0．3m1）,所有动物均分笼饲养,不再强制活动。总共注射时间为4周。（3）采集标本及数据分析：用空气栓塞的方法处死所有实验动物,采集髌骨关节面软骨及关节内滑膜标本,应用Brittberg软骨退变分级标准进行大体评分。用RT—PCR的方法检测MMP-3mRNA及TIMP-1mRNA的表达。结果大体评分显示实验组髁软骨评分0级6例,1级2例,髌软骨评分0级5例,1级3例。对照组髁软骨退变程度较轻,髌软骨评分0级2例,I级6例。实验组和对照组中,在术后8周都有MMP-3mRNA及TIMP-1mRNA的表达。实验组MMP-3mRNA表达（1．20±0．32）较对照组（1．97±0．54）明显降低（t=3．47,P〈0．05）,而实验组中TIMP-1mRNA表达（3．22±0．42）较之对照组（1．90±0．33）有显著缯强（t=6．99,P〈0。01）,两者比较差异均有统计学意义。结论关节内注射多西环素后,抑制了关节软骨和滑膜中MMP-3mRNA的表达、上调TIMP-1mRNA的表达,从而减轻关节软骨退变程度。     

辛伐他汀下调OX—LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成

目的 探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的NRK52E细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（lectin-like ox-LDL receptor,LOX-1）表达和活性氧生成的作用.方法 体外培养NRK-52E,同步化后分为三组：（1）空白对照组（NRK52E细胞＋0μg/ml ox-LDL）;（2） ox-LDL组（NRK52E细胞＋50 μg/ml ox-LDL）;（3）辛伐他汀组（NRK52E细胞＋10μmol/L辛伐他汀＋50 μg/mlox-LDL）,用Western blot测定LOX-1蛋白表达,激光共聚焦检测ROS的表达.结果 （1）正常NRK52E细胞表达LOX-1非常低,50 μg/ml ox-LDL明显刺激NRK52E细胞表达LOX-1增加6.80倍,加用10 μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞LOX-1表达降低65％;（2）正常NRK52E细胞内ROS生成很少,50 μg/ml ox-LDL可明显刺激NRK52E细胞内ROS生成增多了4.86倍,加用10μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞ROS生成减少60％.结论 辛伐他汀可下调ox-LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成,从而保护肾脏.     

莱菔硫烷对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及MMP-9活性的影响

目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）活性的影响。方法体外培养NCI—H446细胞,用0、25、50、100txmol／LSFN处理24～72h后,MTT法检测细胞的增殖情况;小室侵袭实验分析细胞的侵袭力改变,明胶酶谱实验检测MMP-9的酶活性变化。结果经25、50、100Ixmol／LSFN处理24～72h后,NCI．H446生长均能受到不同程度抑制。其中72h后,25、50、100μmol／LSFN组NCI．H446细胞的抑制率分别为（11．1±2．26）％,（25．2±3．24）％和（44．6±4．2）％,与溶剂对照组相比差异具有统计学意义（t=10．685,8．417,5．264,P〈0．05）。25、50、100μmol／LSFN作用NCI—H446细胞24h后,NCI—H446细胞穿膜数分别为（48．6±1．84）％,（35．4±2．22）％和（27．8±1．36）％,与溶剂对照组[（68．4±2．21）％]相比差异具有统计学意义（t=6．341,5．562,4．925,P〈0．05）。明胶酶谱实验显示,25、50、100ixmol／LSFN处理后,MMP-9活性的灰度值分别为764±18．4,685±14．74和638±21．54,与对照组相比（822±12．53）,差异有统计学意义（t=4．971,7．582,11．235,P〈0．05）。结论SFN对肺癌NCI—H446细胞生长、侵袭力及MMP-9的活性具有抑制作用。     

MMP-9在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨MMP-9在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 应用EnVisionTM二步染色免疫组化法,检测67例HCC手术切除的新鲜标本和16例正常肝组织中MMP-9的表达情况.利用鼠抗人MMP-9单克隆抗体对组织切片进行染色.应用x2检验,t检验和秩和检验,对MMP-9在HCC中的表达及其与临床病理特征的关系进行研究.结果 MMP-9在HCC组织中的阳性率明显高于正常肝组织(58.21％ vs 12.5％,x2=10.80,P＜0.01),MMP-9在有转移的HCC组织中表达的平均秩明显高于无转移的HCC组织中表达的平均秩(40.18 vs 26.38,P＜0.01).结论MMP-9在HCC组织中表达明显升高,有转移的HCC组织中MMP-9表达较无转移的HCC中明显升高,可能与它破坏靠近HCC细胞表面的细胞外基质和基底膜有关,进而促进HCC的侵袭与转移.     

骨桥蛋白和基质金属蛋白酶-9在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase9,MMP-9）在胰腺癌组织及细胞中的表达及临床意义,分析其在胰腺癌浸润转移中的作用.方法 人胰腺癌细胞系MIA PaCa-2体外培养,应用免疫荧光染色法检测OPN蛋白在胰腺癌细胞系内定位.选择100例胰腺癌及40例癌旁正常胰腺组织,应用免疫组化法检测胰腺癌细胞中OPN、MMP-9蛋白表达情况.结果 OPN主要表达于胰腺癌细胞的胞膜和胞浆内,OPN和MMP-9在胰腺癌组织中的表达阳性率分别为73.0%（73/100）和68.0%（68/100）,均高于在癌旁正常胰腺组织（均P＜0.05）;OPN及MMP-9表达与胰腺癌病理分级、淋巴结转移和神经浸润有关（P＜0.05）;二者在胰腺癌组织中的表达呈正相关（rs=0.39,P＜0.01）.结论 OPN、MMP-9可能参与了胰腺癌的发生、浸润及转移,二者在发展过程中起协同作用.     

MMP-2、MMP-9和VEGF与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的 研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）,基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、MMP-9）在乳腺癌组织中的表达以及与乳腺癌侵袭转移之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测20例乳腺纤维腺瘤和12例正常乳腺组织及38例乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的表达.结果 乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的高表达率（63.2%,78.95%,71.1%）高于正常乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织（25.0%,30.0%,33.3%,35.0%,41.7%,45.0%,P＜0.05）.VEGF,MMP-2,MMP-9蛋白表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、ER及PR无关（P＞0.05）;有淋巴结转移组乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的高表达率[80.0%、85.0%,85.0%]高于无淋巴结转移组（44.4%、55.6%,55.6%,P＜0.05）,与组织学分级有关（P＜0.05）.乳腺癌组织中三种蛋白VEGF、MMP-2和MMP-9之间的表达呈正相关（rs=0.541,0.511,0.502,P＜0.01）.结论 VEGF、MMP-2和MMP-9在乳腺癌中有协同作用,促进肿瘤血管形成、细胞外基质的降解和癌细胞的侵袭转移.VEGF、MMP-2及MMP-9的高表达与乳腺癌的侵袭和转移密切相关,有可能成为判断乳腺癌侵袭和转移的有价值的指标.     

LOX-1介导苯扎贝特对内皮细胞凋亡的影响

目的研究苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在其中的作用。方法用流式细胞仪观察HUVECs凋亡，用RT-PCR技术观察LOX-1基因表达的变化。结果ox—LDL组与正常组比较凋亡明显增加（P〈0．05），LOX-1 mRNA表达明显增加（P〈0．05），苯扎贝特干预后凋亡减少，LOX-1 mRNA的表达降低（P〈0．05），呈浓度依赖关系。用LOX-1阻滞剂多聚肌苷酸预先干预2h后与苯扎贝特组比较细胞凋亡及LOX-1mRNA表达进一步减少（P〈0．05）。结论苯扎贝特可改善ox-LDL对内皮细胞的影响，下调LOX-1表达，减少内皮细胞凋亡，部分机制可能通过LOX-1介导。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子及基质金属蛋白酶9在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）在卵巢癌组织中的表达意义。方法应用免疫组化sP法对55例上皮性卵巢癌组织、21例良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9的表达情况,分析卵巢癌组织及良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9阳性表达率,其与临床病理指征的关系。结果卵巢上皮性癌组织中EMMPRIN及MMP-9阳性表达率[89．1％（49／55）,96．4％（53／55）]高于卵巢良性肿瘤[14．3％（3／21）,23．8％（5／21）,）（2=40．64,45．84,P〈0．01]。上皮性卵巢癌组织中EMMPRIN与MMP9阳性表达呈正相关（rs=0．5535,P〈0．01）。结论EMMPRIN、MMP-9在肿瘤细胞及基质细胞中阳性表达率高,二者参与了卵巢癌的发生、发展,并有促进卵巢癌的浸润和转移作用。